实验诊断学实验报告(牡丹江医学院)

1、实验诊断学试验操作报告目录一、 红细胞计数试验二、 血红蛋白测定三、 白细胞计数四、 白细胞分类计数五、 尿比重六、 尿沉渣定性检查七、 尿蛋白检查磺基水杨酸法八、 尿干化学分析九、 尿葡萄糖定性检查（班氏法）十、 ABO血型测定红细胞计数试验实验目的： 通过红细胞计数实验1、掌握红细胞计数方原理、方法及注意事项。2、掌握血细胞计数板的结构试验器材： 血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、血红蛋白吸管、生理盐水实验原理： 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。操作步骤： 1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管

2、内。2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。 4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。 6、待23分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域： 中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。计数原则： 数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。计算： 答案不唯一，言之有理即

3、可红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×201×106或红细胞数/L=5个中方格内红细胞数÷100×1012 式中×5 5个中方格换算成1个大方格 ×10 1个大方格容积为0.1ul，换算成1.0 uL。 ×201 血液的稀释倍数×106 由u1换算成L数据处理： RBC: ×l012/L 参考值 男:(45.5)×1012/L 女：（3.55）×1012/L 新生儿：（67）×1012/L注意事项： 1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅

4、速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血。2充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。3、中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80100个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大(超过10个细胞以上的)应重混匀再充填。血红蛋白测定实验目的： 通过血红蛋白测定1、氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。2、掌握红血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。试验仪器： 试管、微量吸管、分光光度计实验原理： 血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰化钾氧化成高离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（CN-）结合，生成稳

5、定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在540nm波长比色。从HicN参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。操作步骤： 1、取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟2、用721光电比色仪，540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。计算： 血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×367.7数据处理： 答案不唯一，言之有理即可 Hb ： gL参考值 男0.400.54L/L女: 0.370.48L/L儿童：0.350.49L/L新生儿：0.500.60L/L注意事项： 1、做血红蛋白测定，白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避

6、免红细胞破坏。白细胞计数实验目的： 掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。实验器材： 显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。实验原理： 用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。操作步骤： 1、取试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部，再吸取上清液清洗3次，摇匀。4、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取悬液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待白细胞下沉。

7、5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。计算： (四个大方格内WBC数/4)×10×20× 106 =WBC数/20×109/升 数据处理：答案不唯一，言之有理即可正常参考值： 成 人：（4-10）×109/升 新生儿：（15-20）×109/升 6月-2岁：（11-12）×109/升 白细胞分类计数实验目的： 掌握白细胞分类计数、原理及技术。实验器材： 显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。实验原理： 把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经wright染色后，显微镜下观察，根据白细胞形态特点逐个分类计数

8、。得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态和质量的变化。操作步骤： 1、取末梢血1滴。置于载玻片的一端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空气干燥。2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞0.5-1分钟。4、按1：1或1：2加缓冲液与染料混匀，染色10分钟左右。5、在血膜染10分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。计算： 1、先用低倍镜观察血片染色情况，白细胞多少和细胞分布情况。2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数100-200个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求

9、出各自白细胞所占数值（百分率）。3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，完全记录法、半记录法、分类计数器计数法。4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升，既得每升血液中各类白细胞的度。 数据处理：答案不唯一，言之有理即可尿比重实验器材： 比密计、比密桶实验原理： 尿液比密与所含溶质成正比，溶质越多，尿比密越高，对浮标的浮力越大，侵入尿液的比重计部分则越小，读数越大；反之，读数越小。操作步骤： 1、充分混匀尿液后，沿管壁缓慢倒入小量杯中 2、比重计放入杯中使悬浮于中央，勿触及杯壁或杯底 3、比重计停稳后读取尿液凹面相切的刻度，即为被测尿液的比重注

10、意事项： 1、尿比密计必须经过校正，应用纯水在规定温度下观察比重是否标准将结果增加0.001，每低3则减去0.001 3、尿内含Pr和Glu时的修正：每10g/L蛋白质将比密减0.003， 10g/L葡萄糖将比密减0.004 4、盐类沉淀的处理，将尿标本加温使盐类溶解，测定数据处理：答案不唯一，言之有理即可尿沉渣定性检查实验操作： 1、取新鲜尿液10ml于试管内1500r/min5分钟。 2、待离心机停后，取出离心管，弃去上清液。留下 0.2ml，轻轻离心使尿沉渣有形成分混匀。 3、取沉淀于玻片上镜检。结果判断： 用10×10倍，观察其中有形成分管型，10×40倍观察细胞成

11、分和计数，观察10个视野管型计数20个视野。 参考值： 1、细胞成分：最低-最高值/HP RBC 0-3/HP WBC 0-5个/HP 2、管型（透明）：平均值/LP 3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野（）（ 2 ）（ 3 ）报告三、注意事项： 1、清晨空腹第一次尿应在1h内送检 2、准备干净，干燥尿杯，留取中段尿，尿液细胞及管型的计数。Addis 1h尿沉渣计数四、标本收集： 患者先排尿弃去准确收集3h尿液于清洁干燥器内 （标本留取5：30-8：30）五、实验操作： 准备侧量3h尿量，充分混匀取尿液10ml，1500r/min 5分钟，用吸管吸取上层尿液9ml留取1ml，吸取混匀尿液1滴注

12、入计数盘中，cal计数10大方格，管型20个大方格。 六、计算： 1小时细胞=10个大方格细胞总数×（1000/10）×（3h尿量/3） 1小时Cost计数=(20个大方格管型数/2) ×(1000/10)×（3h尿量/3） 式中1000为微升换算成毫升数，10为尿液浓缩倍数 答案不唯一，言之有理即可七、实验注意事项： 1、尿液新鲜PH值应在6以下。 2、被检尿SG在1.026以下如<1.016的为低渗尿易破坏cell。 3、尿中有磷酸盐时应加少量冰乙酸，但勿加过多，使cell管型溶解。尿蛋白检查磺基水杨酸法实验原理： 磺基水杨酸为生物碱试剂，在酸

13、性磺酸根阴离子上蛋白质氨基的阳离子结合成不溶性蛋白盐沉淀。 实验试剂： 磺基水杨酸溶液三、实验方法： 取试管1只加入澄清尿液2-3ml滴加磺基水杨酸试剂0.1ml立即轻轻摇匀1分钟内观察结果。 实验结果判断：阴性（）：清晰透明 微量（±）： 黑色背景下仅见轻度浑浊 弱阳性（）： 明显白雾状浑浊，无颗粒 阳性（ ）： 明显浑浊并出现颗粒 强阳性（ ）： 白雾性不明显浑浊并有小块状物 最强阳性（ ）：严重浑浊并大量凝块。尿干化学分析测试项目： 尿胆原、胆红素、酮体、隐血、 蛋白质、葡萄糖、 酸碱度、亚硝酸盐。实验原理：1、空白（校正块）：尿在试纸块上分布的状态及尿本身的颜色，一般都会给测

14、定结果带来误差，设空白块就是为了排除这些产生误差的因素，各项目都使用同一空白块。2、酸碱度：通过pH指示剂测定4.5-9的范围内的pH值，正常人的新鲜尿液pH值在5-7之间。3、亚硝酸盐：反应依赖于尿中革兰氏阴性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物，重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出桃红色。4、葡萄糖：根据葡萄糖氧化酶法反应原理，葡糖糖氧化酶特异性氧化-D-葡糖糖，生成葡糖糖醛酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使指示剂氧化而呈现出蓝色。5、蛋白质：根据指示剂蛋白误差法原理，蛋白质与染料结合形成复合物产生变色，特别是对白蛋白的反应比对球蛋白、血红蛋

15、白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。6、隐血：根据血红蛋白接触活性法原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过氧化物，使邻联甲苯胺氧化呈色。7、胆红素：根据偶氮偶合法的原理，2，4-二氯苯氨重氮盐与胆红素进行特异性反应，并与胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。8、尿胆原：根据偶氮结合法的原理，尿胆原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。9、酮体：根据硝普酸钠法原理，硝普酸钠和酮体在碱性条件下相互作用而呈现紫色，特别是乙酰乙酸对此特别灵敏。实验操作：1、测试条件：环境温度（25±5），相对湿度80，推荐最佳测试温度23-27 .2、取一试纸条，拿住试纸条印有厂标的一端，把试纸条完全

16、侵入尿样中，2秒钟后取出。3、在卫生纸上蘸掉试纸条边缘多余的尿液后再放入仪器中进行测定。项目 参考范围 酸碱度 5.5-7.0 亚硝酸盐 0umol/L 葡萄糖 2.8mmol/L 蛋白质 0.15g/L 隐血 10cells/uL 胆红素 0umol/L 尿胆原 3.2-16umol/L 酮体 0mmol/L 尿葡萄糖定性检查（班氏法）实验目的： 掌握尿葡萄糖定性的班氏法。实验原理： 葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氢氧化铜，进而形成红色氧化亚铜沉淀。实验器材： 试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯、班氏试剂实验操作：1、鉴定班氏试剂质量：取试管一支，加入班氏试剂2.0ml，摇动试管徐徐加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行以下实验。2、加尿液：向班氏试剂中加离心后的尿液0.2