API5000仪器维护简明手册

1、LC-MS维护简明手册维护简明手册 杜杜 明明 维维修服修服务务工程工程师师2 2011 AB SCIEX目录目录维护计划维护计划简明维护步骤简明维护步骤详细维护步骤详细维护步骤无信号诊断步骤无信号诊断步骤灵敏度低灵敏度低检查步骤检查步骤重复性差重复性差检查步骤检查步骤处理通信不上的处理通信不上的9个步骤个步骤如何延长分子泵的寿命如何延长分子泵的寿命离子源喷口与离子源喷口与orifice的位置的影的位置的影响响喷雾口与喷雾口与ORIFICE位置的确定方位置的确定方法法一些常用的部件号一些常用的部件号常用试剂列表常用试剂列表常用工具列表常用工具列表仪器主要电路模块图仪器主要电路模块图3 2011

2、 AB SCIEX维护计划维护计划维护项目维护项目每日每日每周每周三个月三个月需要时需要时1.检查各路气体压力或液氮量X2.清洗离子源流路X 3.清洗离子源内腔体 X4.清洗Curtain PlateX5.检查机械泵油量X6.更换机械泵油X7.清洗机械泵滤网X8.仪器除尘每半年9.PPG质量校正X每次开关机时10.更换空气过滤网过滤网堵塞时11.更换PEEK管发现堵塞时12.更换喷雾针发现堵塞时13.清洗interface ,Q0, orifice内部与工程师沟通有需要时14.更换或清理机械泵废气回油装置每年4 2011 AB SCIEX简明维护步骤简明维护步骤维护项目维护项目操作步骤操作步骤

3、1.检查各路气体压力或液氮量Gas1/2 0.7MPa, Curtain/CAD, Exhaust gas 0.35-0.4MPa2.清洗离子源流路50:50 甲醇水 为流动相 200ul/min 冲洗10-20分钟3.清洗离子源内腔体50:50 甲醇水 无尘纸 擦拭4.清洗Curtain Plate50:50甲醇水 无尘纸 擦拭，再用甲醇擦拭，用氮气吹干。5.检查机械泵油量在最高和最低标线之间（两个箭头之间）的80%6.更换机械泵油停机,冷却,放空旧油后用100ML-200ML新油冲洗,后加油至正常位置. 需使用8mm内六角工具。（不同型号厂家的油不可混用）7.清洗机械泵滤网拆下机械泵进气口

4、滤网，清洗吹干，装上。8.仪器除尘停机,打开前后盖,用氮气吹扫电路板,风扇（不要碰触电路电线）9.PPG质量校正参考装机调试手册Q1,Q3,POS,NEG测试步骤10.更换空气过滤网松开滤网前固定栅板,更换新的滤网11.更换PEEK管长度确定, 使用专用切管器环形切断,切平12.更换喷雾针安装时喷针与两通接触后用工具拧紧,防止死体积13.清洗interface ,Q0, orifice内部50:50 甲醇水 清洗专用大, 小棉签 无尘纸 擦拭，氮气吹干14.更换或清理机械泵废气回油装置需在工程师指导下完成, 需专用内六角工具5 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤1.1.检查各路

5、气体压力或液氮量检查各路气体压力或液氮量 Gas1/Gas2 0.7MPa, Curtain/CAD 0.35-0.4MPa,Exhaust gas 0.35-0.4MPa2.2.清洗离子源流路清洗离子源流路a. 每次做完样后,用甲醇水50:50或流动相(不含盐)冲洗进样管直到样品信号回到基线(信号走平或回到日常水平),亦可与冲色谱柱同时进行。b. 如进样管堵塞,可把离子源取下，用注射器推甲醇冲洗进样管，如果进过非极性样，可用丙酮，氯仿等其他有机溶剂冲洗，最后用甲醇再冲一遍。c. 也可把堵塞的进样管放到 甲醇水50:50 中用超声波清洗。3 3. .清洗离子源内腔体清洗离子源内腔体 应该定期(

6、或基线不能靠冲洗进样管路下降时)清洗离子源内腔体,用无尘纸和甲醇水50：50擦洗离子源内腔体，再用氮气吹干。这样可以减低背景信号和噪音. 4.4.清洗清洗Curtain Plate ,orificeCurtain Plate ,orifice外部外部 定期清洗Curtain Plate: 先用无尘纸加甲醇水50：50擦洗，再用甲醇擦洗，氮气吹干 定期清洗Orifice外部:拆卸Curtain Plate后,先用无尘纸加50水/50甲醇擦洗，再用甲醇擦洗，然后用氮气吹干，擦洗时注意不要堵塞orifice小孔，不要用砂纸擦和针捅。 6 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤5.5.检查

7、机械泵油量检查机械泵油量 在最高和最低标线之间（两个箭头之间）的80%，过高或过低都会影响机械泵的工作效率和寿命。6.6.更换机械泵油更换机械泵油注意注意 a. a. 每三个月更换机械泵油每三个月更换机械泵油 b. b. 不同公司的油不可混合使用不同公司的油不可混合使用: :会损坏机械泵会损坏机械泵 c. c. 更换不同公司的油时更换不同公司的油时: :必须用新油先冲洗一次必须用新油先冲洗一次 VarianVarian油的购买油的购买:V209038:V209038 Leybold Leybold油的购买油的购买:WC010998:WC010998更换机械泵油的步骤：a. 关掉主机电源，最少1

8、5分钟之后，关掉机械泵电源开关； b. 提高机械泵，在排油孔下方放一器皿（约1升容量），打开排油孔，见下图7 2011 AB SCIEX详细维护步骤8 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤 c. 当无泵油流出时，拧上排油孔螺栓，加入100mL-200mL新油打开机械泵电源开关（时间不要超过5秒钟），重新打开排油孔螺栓，排出泵内残余的泵油。d. 拧上排油孔螺栓并上紧。 e. 打开加油孔盖子，添加干净的真空泵油，油面位置约到“MAX”80%处，拧上加油孔盖子，见下图。 f. 连接相关部件并开机械泵，20分钟以后再开主机。 9 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤 7.7

9、.清洗机械泵滤网清洗机械泵滤网 在机械泵抽气入口处有一个滤网，见下图，如果有太多灰尘或颗粒吸附在滤网上，会影响到机械泵性能。如果发现机械泵抽空力量不足，机械泵发热甚至烫手，或者机械泵电流过大，应考虑清洗该滤网。一般情况下，在更换机械泵油时顺便清洗该滤网。 10 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤清洗滤网步骤： a.关掉主机电源，最少15分钟之后，关掉机械泵电源开关； b.拧开真空管路和机械泵接头处的夹子，小心取下“O”型圈，不要刮伤，然后拿出该滤网； c.用水清洗该滤网，用干燥气体吹干，然后重新装回； d.连接相关部件并开机。8.8.仪器除尘仪器除尘 停机,打开前后盖,用氮气吹

10、扫电路板,风扇（不要碰触电路电线）。此步骤可以在更换机械泵油的时候同步进行。9.PPG9.PPG质量校正质量校正仪器只有在质量正确的条件下才能保征分析结果可靠:什么时候要做校正: 1. 每次重新开机； 2. 不关机时,每三个月 用什么做校正: 1. 负离子 : PPG3000 10ul/min 2. 正离子: PPG 5ul/min (API2000,2000QTrap) 1/10 PPG 5ul/min (API3000，API3200, 3200QTrap) 1/50 PPG 5ul/min (API4000,4000QTrap)校正时: 请注意CEM电压可能要增高 校正时参考装机调试手册

11、进行Q1,Q3的正负离子的校正各离子的灵敏度，半峰宽，质量偏移等。下面是PPG试剂的配制方法，以作参考：11 2011 AB SCIEXPPG Standards Kit P/N 401936 Store at 2 to 8C.PPG 标准试剂准备Caution:PPG 3000 Standard is not PPGs for the API-3000.PPG 3000 Standard is Negative and High Mass PPG. No Dilution necessary.PPG Dilution Solvent / API-4000 HPLC BufferPPG Dil

12、ution Solvent RecipeNote: It is essential to dissolve the Ammonium Acetate and water first. 1. Dissolve 15.4 milligrams of Ammonium Acetate in 49.9 ml of water. 2. Dissolve 49.9 ml of methanol + 0.1 ml of Formic Acid + 0.1 ml of Acetonitrile. 3. Mix above two together to make final PPG Dilution Solv

13、ent.API-4000 HPLC Buffer Recipe 70/30Note: It is essential to dissolve the Ammonium Acetate and water first. 1. Dissolve 154 milligrams of Ammonium Acetate in 300 ml of water. 2. Dissolve 699 ml of Acetonitrile + 1.0 ml of Formic Acid. 3. Mix above two together to make final API-4000 HPLC Buffer 70/

14、30.12 2011 AB SCIEXPPG / Reserpine / Renin DilutionsNo dilutions necessary for API-1XX/3XX, API-2000, Q-Star & non-Q-Trap mode.To Dilute PPG Standard 10:1: API-3000 onlyUse PPG Dilution Solvent from above Recipe.Put 2 mls of the PPG Standard in a clean vial and add 18 mls of the PPG Dilution Sol

15、vent.To Dilute PPG Standard 50:1: API-4000 onlyUse PPG Dilution Solvent from above Recipe.Put 20 mls of PPG Dilution Solvent in a clean vial and remove 0.4 mls to make 19.6 mls.Add 0.4 mls of the PPG Standard to the 19.6 mls of the PPG Dilution Solvent.Reserpine Dilution 6:1: API-3000 / 4000 / Q-Tra

16、p (trapping mode only)Use Dilution Solvent included in Kit P/N 401936 for Reserpine Dilutions.Make up Stock Solution first: Add 4.0 mls of Dilution Solvent to the vial, cap and mix gently or sonicate to dissolve material.Reconstitution produces a 1 pmol/ul solution of Reserpine. Put 1 ml of the Rese

17、rpine Stock Solution in a clean vial and add 5 mls of Dilution Solvent.Reserpine Dilution 60:1 (10 pg/ul) : API-4000 IQOQ injections Put 1 ml of the Reserpine Stock Solution in a clean vial and add 59 mls of Dilution Solvent.Note: Use Dilution Solvent included in Kit P/N 401936. Since there is not e

18、nough in kit you will need to make it. Dilution Solvent is50/50 ACN/H2O with 0.1% acetic acid.Renin Dilution 2:1: API-3000 / 4000 / Q-Trap (trapping mode only)Use Dilution Solvent included in Kit P/N 401936 for Renin Dilutions.Make up Stock Solution first: Add 3.8 mls of Dilution Solvent to the vial

19、, cap and mix gently or sonicate to dissolve material.Reconstitution produces a 10 pmol/ul solution of Renin. Put 2 mls of Renin stock solution in a clean vial and add 2 mls of Dilution Solvent.13 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤10.10.更换空气过滤网更换空气过滤网 空气过滤网堵塞会导致仪器内部电路板散热不好，严重时仪器停止数据采集，所以要经常清理，每三个月，取出除尘，如有破损，

20、更换新的过滤网。API2000/3200/Qtrap/3200Qtrap空气过滤网在仪器后部,取下用水清洗,干燥后装回 API3000的过滤网PN：1003712 API4000/5000/4000Qtrap的过滤网PN：100371211.11.更换更换PEEKPEEK管管 如果日常维护较好，每次做完样品都冲洗管路，那么PEEK管不易堵塞，一旦堵塞可以先用甲醇水等冲洗，如果冲洗不好那么就要更换了，更换时使用专用切管器环形切平。12.12.更换喷雾针更换喷雾针 喷雾针的维护也很重要，一旦堵塞并且冲洗不好时就需要更换，安装时喷针与两通接触后用工具拧紧,防止死体积。13.13.清洗清洗interf

21、ace Q0 orifice interface Q0 orifice 内部内部 清洗interface Q0 orifice orifice 内部内部 需要卸真空，所以尽量在工程师的指导下进行； a.先关主机，分子泵停转后(15分钟以后)关机械泵。 b.真空卸掉后就可以打开interface了，卸下orifice,skimmer等。 c.用200ul加样枪头,用50水/50甲醇冲洗Orifice内部，用无尘纸或专用棉签沾甲醇水50:50擦洗skimmer Q0等，再沾甲醇擦洗，清洗完后用氮气吹干。(如果有放电变蓝的现象可以用金属抛光剂擦，但擦完后一定要用正己烷擦洗干净，再用甲醇擦洗，氮气吹干

22、。) d.将各部分装好开机械泵抽真空，半小时后再开主机。14 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤 14.14.更换或清理机械泵废气回油装置更换或清理机械泵废气回油装置 机械泵上面有一个油过滤器，其作用是回收机械泵工作过程中挥发出的油蒸汽，然后由回油管把收集到的油滴回收到机械泵腔体，其中发挥关键作用的是滤芯，见图一、二。如果滤芯吸收的油太多，甚至饱和，会导致机械泵向外排气不畅，所以每次换油时要注意清除滤芯吸收的泵油，最好一年更换一次。 步骤：步骤： a. 把仪器处于Standby状态，关掉Analyst软件，关闭主机电源，最少15分钟以后，关闭机械泵电源； b. 移出机械泵，用内

23、六角扳手拧开过滤器顶部的四个螺丝，见图三： c. 拿掉滤芯上面的定位弹簧见图四，取出滤芯，见二； d. 用无尘纸擦拭滤芯表面的泵油，并紧裹滤芯以吸干滤芯海棉中的油，重新放回滤芯，如有必要更换新的滤芯； e. 放回定位弹簧，装回过滤器顶盖，上紧四个螺丝，重新开机。 15 2011 AB SCIEX详细维护步骤详细维护步骤 16 2011 AB SCIEX无信号诊断步骤无信号诊断步骤在需要工程师到达之前，首先说明出现此现象的时间，是正在工作时突然出现，还是一段时间没用仪器，再开机后出现的，在此之前，动了仪器哪些部位，是某些扫描方式没有信号还是都没有信号。例如MRM无信号，先看Q1,Q3有无，若Q1

24、,Q3有，则通常是Analyst参数设置问题，若无，则继续看有无本底信号，电噪声有无,如有,则可能是离子源或软件问题。 检查真空,Q1 SCAN方式,通常应该0.7-1.2x10-5 torr之间,过好可能是Orifice堵塞,过差则可能是漏气或真空泵有问题 。电源电压是否超限，UPS显示正常否？更换了离子源以后，高压线是否插好到位？喷雾电压设置正确与否?各路气体压力是否正常，阀门是否打开，加热气开了吗？离子源喷雾针重装后，有无漏气，漏液？液体是否从针外壁流出？17 2011 AB SCIEX无信号诊断步骤无信号诊断步骤管路有否堵塞，一节一节拆开测试，看通否，喷雾是否均匀，泵压是否过高，通常不

25、接色谱柱，200ul/min流速，压力应不超过数十PSI。 进样管及spray tube堵塞： a. 用Syringe推：直线喷出没有堵塞 b. 若堵，取下用50水/50甲醇超声清洗 c. 超声仍无效,更换进样管及spray tube Orifice堵塞： 现象：灵敏度下降或真空度异常的好 处理方法： a. 50水/50甲醇清洗orifice外部 b. 不能解决问题时再清洗orifice内部18 2011 AB SCIEX无信号诊断步骤无信号诊断步骤若为APCI,检查流速是否过低（要接LC，可用三通共用注射泵,应大于200uL/分钟），放电尖端对正方向没有，放电电流是否加上(一般3uA)?若为

26、APPI,有没有通甲苯？若为NANOSPRAY,针尖碰开了没有?高压放电烧坏或样品堵塞针尖,外涂金属层被磨掉,加不上高压,需提高喷雾电压才有信号，都要更换新的喷雾针。TIS源:有无气泡，注射针里面，LC流动相管路是否有空气，流速低时多等一会儿，可手推一下注射针，帮助液体快速到达喷雾针。在工程师指导下用万用表测量各点电压值，判断故障点。19 2011 AB SCIEX灵敏度低检查步骤灵敏度低检查步骤首先按照无信号处理方法检查。Orifice 脏也可引起真空变差，当Curtain Gas很高才好，说明脏了，清洗。机械泵油半年以上没换，或颜色加深,要换油，低于刻度下限，亦要换油，注意要用同型号的油。

27、管路漏液:样品没有完全进到离子源里。管路部分堵塞:喷雾时断时续,小流量信号好,大流量信号差。先调出安装仪器时的PPG等方法，用注射泵SYRINGE PUMP，进PPG看看，质量校准点漂移否,若质量校准不对，造成质量数无法选准，要重新校准仪器。若注射泵采集PPG强度和质量校准正常，则再看标准品样品，COMPOUND等参数是否正确，质量数是否准确。然后用Reserpine等标准品，接通LC，如果有手动进样阀，可从此处进样，看FIA有无峰，若无或很弱，则可能是LC及源参数设置问题。如果正常，则排除MS，再自动进样，看FIA有无峰，若无，则可能是自动进样器问题。20 2011 AB SCIEX灵敏度低

28、检查步骤灵敏度低检查步骤若FIA正常，则再继续接上色谱柱采样，判断是色谱柱问题还是流动相问题。离子化方式是否对路，如非极性物质用ESI效果很差，有机酸采用正离子方式没什么信号。样品本身的问题，如样品没有完全溶解，浓度不够，所用溶剂与流动相不匹配等。样品存贮时间过长，保存条件不好，分解或吸附了。放在自动进样器中的样品小瓶内套管底部有气泡，没取到样品，或针头位置太高，而样品液面太低。前处理步骤中，标准品、内标样品是否加进，提取过程中有无遗洒。离子抑制，-改变前处理方法或LC梯度，或换为APCI也可以降低部分离子抑制效应。离子对质量数输入准确否，有无错误？21 2011 AB SCIEX重复性差检查

29、步骤重复性差检查步骤参考前面各步骤气帘气(Curtain Gas)太低，会有周期性降低现象。采样时间(Dwell Time)太长，每个色谱峰采样点太少，至少十几点，采样时间太短则噪声太高，信噪比不好。新色谱柱没有充分平衡，旧色谱柱老化，重新清洗活化，或更换。离子对的选择有问题,如M+Na做为母离子不稳定,子离子若为脱水峰亦不太好。源温度太高，样品分解。加样前与标准液分别平行做处理，观察有无区别，若标准品溶液无问题，而样品重复性差，则问题可能出在基质的干扰或前处理方法不当。稀释配制样品的移液枪，移液管，容量瓶等有无污染问题。某些样品正离子改为负离子试试,干扰少，重复性会好些。样品管中吸附，尤其低

30、浓度,不成线性,如氨基糖甙,可适当加些甲酸或乙酸。溶解样品一定要用流动相，如果不同，例如甲醇溶液，流动相是乙腈/水，出峰乱，稀释时残存甲醇都会有影响。22 2011 AB SCIEX重复性差检查步骤重复性差检查步骤梯度洗脱后平衡时间不够，或脏东西没洗干净，累积使得重复性差重复性差，应彻底冲洗柱子。手动阀如果没问题了，再看自动进样器有无问题。空调波动，与仪器在同一供电线路上，启动/停止会影响仪器真空，进而影响实验结果。当液氮剩不多时，及使用钢瓶时，尤其注意压力变化。流动相虽有在线脱气，但装入瓶后超声还是必要的。PEEK吸附，FIA时明显，例：四环素，甲醇溶液，乙腈/水：（0.1%乙酸）30/70

31、，由开始时一个峰最后变为两个峰。另外保留时间也会改变，应充分冲洗管路。23 2011 AB SCIEX处理通信不上的处理通信不上的6个步骤个步骤1、Analyst 软件中Hardware configure重新deactivate,再activate2、用CTRL-ALT-DEL,Windows任务管理器结束任务,关掉Analyst 软件,然后重新打开Analyst3、关掉Analyst 软件，Stop Analyst service后重新打开Analyst软件4、重新启动控制仪器的电脑及HPLC,再activate hardware5、(API3000/4000/5000)同时按下电源旁边的

32、两个按扭reset 6、重新开关仪器总电源说明：一步不行，再使用下一步，不一定6步都需要做完24 2011 AB SCIEX如何延长分子泵的寿命如何延长分子泵的寿命1、喷口离orifice位置尽可能远2、样品尽可能干净3、机械泵油经常更换4、分子泵的散热尽量充分25 2011 AB SCIEX离子源喷口与离子源喷口与orifice的位置的影响：的位置的影响：影响分子泵的寿命；引起orifice堵塞、skimmer及Q0脏；并不能增加灵敏度，反而使稳定性下降； 太近:26 2011 AB SCIEX喷雾口与ORIFICE位置的确定方法(API3000/2000)1离子源位置先调偏2在Analyst中active带LC的Hardware Configuration3在Manual Tuning 中Temp设为0 ,离子源不加热3