兽医临床检验学

1、实验室常规、技巧与注意事项一、器材的准备和使用二、化验室用水三、试剂的使用和管理四、溶液浓度及其计算五、试剂配制的有关问题六、样品测定有关策略七、血液样品的采取与保存1、 器材的准备和使用 吸管使用方法吸官的选择：大小规格，内径粗细，尖端孔径移取溶液时，先用所移取的溶液润洗吸管内壁 23次，以确保溶液浓度不变、量准确。 (洁净、烘干的吸管不必!)1、定量取液器使用方法1.要定期进行校准，失灵的误差很大;2.选择规格大小适宜的取液器；3.吸头应配匹，安装紧密；吸头的洁净问题。4.正确握持取液器;5.吸取时将顶杆揿至第一位(不能揿至第二位!)，将吸头尖端浸至被吸取液体的液面稍下，慢慢松开顶杆；6.

2、排液时，将吸头尖端靠在承接溶液器皿的侧壁，边将顶杆揿下经过第一位并直至第二位，边将吸头沿器皿壁轻轻上提；7.吸取黏滯性大的液体时，可将吸头尖端切去小部分；8.调节钮不得旋至超过最大允许容量；9.长时间不用时最好将调节钮调至最 大容量刻度处；10.取液器不用时垂直挂放(吸有机溶 剂，酸、碱溶液时更应注意）；11.不要像耍玩具一样来回抽动顶杆与旋转调节钮。2、容量瓶的使用何时应使用容量瓶？1.容量瓶选择规格、刻线2.可先用溶剂荡涤容量瓶数次3.固体试剂放在小烧杯内溶解后，再转移入容量瓶，用玻棒导引，也可用漏斗。4.溶质要充分溶解，必要时加热或撹拌；用溶 剂洗涤烧杯34次，一并转入容量瓶中。5.当溶

3、液盛至容积约3/4时，将容量瓶摇晃作初 步混匀，再加至刻度。 (最后逐滴加）6.观察刻度时，视线应与标线的最低点相切。7.盖好容量瓶塞，将溶液 充分混匀。8.从满的容量瓶中取用溶 液时，应先将颈段溶液倾去。注意:1.热溶液应在冷却至室温后，才能注入容量瓶中，否则会造成体积误差；2.不应将容量瓶作试剂瓶使用；3.量器不能高温烘干。3、电子天平使用注意天平应置稳定、洁净台 面上。环境干燥。天平不得经常移动，移动后应调节水平，并用标准缺码校正。向称量台放置秤量物品应轻拿轻放。所称物品（含器皿）不得超过天平最大秤量。(5)称取精度要求不高、量大的物品不要用精密 电子天平。(6)不得称量酸、減等腐蚀性、

4、挥发性物品(7)严禁样品与称里盘直接接触，不应将试剂、 样品洒落天平内（使用称量纸时尤应注意！）。(8)称量完毕，及时清理称量室称盘和天平周围遗留物。关好天平门。 4、玻璃器皿的洗涤方法新玻璃的清洗：1.因新玻璃器皿含有游离碱，应先放入2% 盐酸中浸泡数小时；2.取出后用自来水反复冲洗；3.再用温肥皂水浸泡、刷洗；4.用自来水冲干净；5.最后经蒸馏水冲洗3遍，烘干备用。用过的试管、离心管的清洗：1.试管用后及时倒去溶液， 用水冲洗，不能让其干涸。2.以温热洁净水或肥息水浸 泡.用试管刷刷洗。“上下两三次，到底扭一扭”3.用自来水冲洗，直至汰干净，一般可浸泡 数小时，其间多次（10次以上）换水。

5、4.用少量蒸馏水分多次洗涤，洗去所沾自来 水，晾干或烘干。5、超声波清洗器1.由超声波发生器发出高频信号，通过换能器转换成高频机械振荡而传播到介质一 一清洗溶剂中。（人听觉2020 000Hz，>20000HZ声波超声波）2.清洗原理：超声波疏密相间地向前辐射，使液体流动而产生数以万计50500m微小气泡，在负压区形成、生长，而在正压区迅速闭合“空化”效应。 气泡闭合连续不断地产生瞬间高压，就像一连串小“爆炸” 不断地冲击物件表面，从而达到清洗净化目的。3. 使用方法1 在清洗箱中加入水，使待清洗物品淹没, 加适量清洁剂能改善洗涤效果。加水亦不能过满，以免溢出，造成电子短路。2 将网架放

6、入清洗箱中，将待洗物品放入网 架内。若物品直接放入、接触仪器底部，不仅影响洗涤效果，还会损坏仪器！3 将电源插头插入 220V/50HZ电源插座，打开电源开关，指 示灯亮。4 仪器设置:(1)按“确认”键，“状态”指示灯闪跳;(2)按“功能”键至所需设定的功能（如时间、 温度及功率），则该功能指示灯变红；(3)按“确认”键至要调节的数字位闪动，调节 “< >”键至所需设定参数值；(4)以（2)、（3)相同步骤设定功率（50% 100%)、温度（580)等参数；(5)按“停止”键，设定完成。5 一般工作条件：清洗或脱气超声频率40KHz (100%);清洗一般物品，工作时间20min

7、左右；温度一般不超过50 °C(超声过程中温度会升 高，洗不耐温物品时温度不能设太高)。（可根据物件大小和污垢状况合理设定，必要时 作预试确定。）6 按“运行”键，仪器开始工作。运行中需要停 止工作时可按“停止”键。7 超声清洗结束后，应将物品及时取出，用流 水冲洗。清洗箱内水应经常更换。8 切勿将强酸、强碱及其它腐蚀箱体的化学品 放入或接触本清洗器。不得将水进入仪器内 部及有关操作键。9 清洗器不能长时间工作（绝不要超过30min), 在保证清洁前提下尽可能缩短时间，必要时 采取间断性工作。6、高速冷冻离心机使用注意事项1、 使用规格相同的离心管，严格配对配平。 离心管盖、套管应统

8、一配平，用密度相同的液体做配平管。2、离心管内液体不能装得太满，以免溢出3、正确设定所选用的离心转头。4、设定离心温度、速度和时间， 或选择已储存的离心程序。5、 转速不能超过所用转头的限定转速。*24x1.5ml角转头18750 r/min (33016xg)*8x50ml角转头14000 r/min (21255xg)*4x200ml水平转头 4400r/min( 3074xg )6、使用完毕应将机仓和转头内可能沾有的污物 擦干净，敞开仓盖让水汽蒸发;仓内已干燥、 长时间不用时关上仓盖。7、 （旧）机械定时器不能回转8、 （旧）调速开关旋钮应缓慢旋转加速9、不需冷冻、转速不高的勿使用冷冻离

9、心机!勿以流氓、土匪方式野蛮操作仪器!7、铬酸洗液处理玻璃器皿洗液配制：取工业重铬酸钾l000g，加热水 l0000mL，搅拌助溶，冷后向其中缓缓加 入浓硫酸2 000mL(速度不能过快，以免产 热而使容器破裂，更不能反过来加)。储放：以耐酸陶瓷缸配制和贮存，也可用耐热塑料容器配制，冷后移入并酔存于玻盖玻璃瓶(缸）中备用。特点：具有很强的氧化性，对有机物和油污的去除能力特别强。注意事项:1 如玻璃器皿太脏，须先用自来水和毛刷洗刷倾尽水后再入洗液浸泡，以免洗液被稀释。2 以温热的格酸洗液浸泡，洗涤效率更佳(难)3 洗液浸泡后的器皿,应先用自来水彻底冲净 (尤其培养用器m),再用蒸馏水润洗23次4

10、 铬酸洗液吸水性强，应随时把容器盖严，以 防吸水而降低去污能力。当出现绿色时，不能继续使用。5 洗液腐蚀性极强，易灼伤皮肤及损坏衣物，配制和使用时应注意安全。6 本洗液不适于金属、有机玻璃及沾污有钡 盐、铅盐的器皿。7 废弃的洗液不能随意乱倒，以免锈蚀下水管，并污染环境。塑料器皿的洗涤1 小吸头、小离心管较难洗净，除非逐个洗、冲、漂2 塑料培养皿不能用毛刷子刷，用后立即用水冲，防止干涸。试用脱脂柔软纱布。3 以2%氢氧化钠浸泡过夜，水冲；4 以5%盐酸浸泡30min;5 以自来水、蒸馏水洗漂、浸泡数遍，晾干，备用。橡胶制品的洗涤1 新的橡胶制品带有滑石粉，需先用自来水漂洗干净；2 用2%氢氧化

11、鈉煮20min，水冲洗56次;3 再用1. 3%盐酸煮30min;4 分别用自来水、蒸馏水漂洗，晾干，包装、灭菌。(不能烘烤，高压时控制10 lbf)二、化验室用水蒸馏水器使用注意事项：1 进、出水管和阀要用聚乙烯制成，需用橡皮管的也要尽量短些。冷却水可用胶管。2 用市售的蒸馏水作再蒸馏，比直接用自来水作蒸馏效果要好3 使用一段时间后，蒸馏瓶内水要换新，贮水容器要清洗；4 冷却水保持一定压力；若停自来水且热敏保护器失灵有爆裂危险5 调节进水管流速，防止蒸德瓶内水蒸干或过满；发现蒸馏瓶内水过少应立即切断电源，不能马上进水。特别注意：重蒸馏水器、高压灭菌锅、高温烘箱、电炉等使用中要有人看护，记住按

12、时关闭！杜绝事故发生！(二）离子交换水1 离子交换法制得化验用水，称去离子水或离子 交换水。能除去原水中绝大部分盐、碱和游离酸，但不能完全除去有机物和非电介质。2 离子交换柱若长期不用，会荤生细菌，污染离 子交换柱。3 离子交换树脂使用一定时间后会失去交换能 力。阳（阴）离子交换树脂可分别用酸(碱)再 生处理，重复使用。(三）超纯水制备装置使用与注意事项:1 以蒸馏水、去离子水作为制备超纯水的水源，可延长纯化柱寿命。2 超纯水器不使用时置“OFF”状态，也定时自动循环，因此电源要常接通。3 保持贮水桶内有一定水量，防止空气进 入及纯化柱脱水。4 较长时间不使用时，贮水桶内水也要定期更换，防止源

13、水变质。5 取水枪头勿接触接水容器口，防止污染。6 冬天防冻。7 超纯水成本很高，不得作 普通蒸馏水和双蒸水使用三、试剂的使用和管理1、称取前核实所取试剂是否有误，进口试剂往往要对英文名称，以防差错。生化试剂要注意同分异构体，左旋或右旋，氧化型或还原型等。2、注意试剂含结晶水的多少，要查对分子量 再计算试剂用量。3、试剂规格是否符合要求4、在某些要求较高或特殊的分析中，不仅要考虑试剂的等级，还应注意生产厂家、产品 批号等。必要时应作专项检验和对照试验。5、注意试剂有否变质6、用清洁的牛角勺或不绣钢匙从试剂瓶中取出试剂，一药一匙。7、所有试剂、溶液以及样品的包装瓶上必须有标签，脱落的要及时补上。

14、8、根据试剂的毒性、易燃性、腐蚀性和潮解性等不同特点，以不同方式妥善保管。9、优先使用已开瓶的试剂，杜绝浪费，私藏。试剂安全使用：(1)剧毒试剂应专人严格保管、谨慎操作;(2)会产生有害气体的应在通风橱中操作;(3)易燃溶剂加热时，必须在水浴或沙浴中进行，避免使用明火；(4)操作腐蚀性强的试剂（如高氯酸、硫酸、蛋白酶k、胶原酶等）应戴防护手 套、防护眼镜； (5)试剂绝不可用舌头品尝，更不得食用， 也不作药用。不用茶杯、食具盛装试 剂，更不要用烧杯等当茶具使用。 (6)不能使用的化学试剂、废液要慎重处 理，不能随意乱倒。 (7)装过强腐蚀性、可燃性、有毒或易爆物品的器皿，操作者应亲自洗净或处理

15、掉。(8)化验室中应备有急救药品、消防器材和劳保用品。四、溶液浓度的表示及其计算常用的表示方法有：百分浓度、质量浓度 、物质的量浓度、体积比浓度、相对密、质量摩尔浓度等，其中百分浓度、质量浓度、物质的量浓度最常用。（1） 百分浓度1.质量百分浓度：即100g溶液中所含溶质的克数。*符号为“ (m/m)”或Am。市售液体试剂浓度一般都以此表示。2. 体积百分浓度：物质B的体积分数，常用(V/V)表示。3. 质量体积百分浓度：以100mL溶液中所含固体溶质的克数表示，即 (m/V)如 0.9%NaCl、10%TCA 等。目前多用g/L取代。（2） 质量浓度即质量体积浓度，指单位体积（1L）溶液中所

16、含物质的质量（g）。质量浓度=10*质量体积百分浓度(三）物质的量浓度*指单位体积溶液中含溶质B物质的量，即1L 溶液中所含溶质的量(摩尔，mol)。*常用单位：mol/L、mmol/L、 mol/L等，可简化为M、mM、 M，正式使用不要简化。量浓度的计算方法：量(g)=量浓度(mol/L) ×摩尔质量(g/mol) ×体积(L)eg：溶质为固体时例：如何配制0.5mol/L Na2C03溶液500 mL?(Na2CO3 的 MW为 106)解：m(Na2CO3)=0.5 × l06 ×500 ÷ 1000=26.5(g)称Na2CO3 26

17、.5g溶于适量水中并定容至500 mLeg：溶质为溶液(液体)时例：如何配制0.5mol/L H3P04溶液500mL?(H3P04 MW为98，浓磷酸比重1.69、浓度85%)解：m(H3PO4)=0.5 x 98 x 500 ÷ 1000=24.5(g)V0=24.5 ÷ 1.69÷85% 17 (mL)量取浓磷酸17mL,加水稀释并定容至500mL。(四）溶液稀释原理：稀释前后溶质的总量不变。C1×V1=C2×V2例：用 2mol/L 的 H2SO4溶液配制 500mL 15mmol的H2SO4溶液，怎样配制？解：V1=C2×V

18、2÷C1=0.015 × 500÷2=3.75(mL)取2mol/L的H2SO4溶液3.75mL,加水稀释，使总体积为500mL，即成。五、试剂配制的有关策略I、根据需用量配制，可略多些，不应配得太多而浪费，贵重试剂尤应特别注意节约。2、有些试剂要现配现用，如GSH-Px测定用的底物、H2O2等，只能配当天的用量。3、有些试剂可较长时间保存，则可预计一定 时间内的用量配制。有些溶液可配成数倍浓 1度贮存液，用前稀释。4、如何准确配制少量试剂？5、 根据试剂的性质和量选择试剂瓶：耐碱、 避光、耐低温、大小。瓶盖应密闭性好。6、试剂瓶上应贴标签，标明试剂名称、浓度、用

19、途、配制日期、保存方法及使用者等。7、同一实验室内普通公用试剂不要重复配制。8、需冻藏的溶液，应分装后冻存，每次取出一瓶解冻使用，不宜大包装、反复冻融。9、试剂溶液要定期清理。放置整齐，用后归还原处。重要试剂、样品的处置要慎重！六、样品测定的有关策略1、考虑项目中哪些试剂的配制、加量要求十分准确。一般而言，标准液、测定底物剩余量 项目的底物其配制和加量要求严格。2、试剂配好后，正式测定样品前，要作少量 预试。尤其样品量少、难重复采集的。3、待测成分稳定时间短的项目优先做，合 理分工协作巧安排。4、每批测定最好B、S作双份或3份，防止因B或S管的误差影响所有U的准确性。样品较多时，要在前、末及中

20、段设S。5、有些项目的空白管OD变化较大，除用B调 “0”外，可用DW调“0”，ODU-ODB。6、大数量样品的分批测定，保证准确性前提 下每批完成最多数量样品：保证加样和作 用时间的相等，保证颜色或浊度的稳定。*反应作用时间要求准确；显色或浊度稳定时间短的，每批样品数不宜多，如1020 个，例GSH-Px、1分钟胆红质测定。*作用时间不十分要求严格；显色或浊度稳 定的，每批样品可适当多，如30 ( 个试管 架）或60个（两个试管架）。7、注意加样或加试剂及比色过程的一致性。 如加底物和样品是按从前至后的顺序，加 终止反应试剂仍应按此顺序，不能颠倒。确保时间一致。8、使用标准曲线计算测定结果的

21、项目，如 ALP、ALT等，应定期校正标准曲线，特别仪器大修后应重新制标准曲线。9、按原试验组排序测定样品，有利于减小组内 差异，但可能造成人为差异，可打乱分组排序或倒序测定。双盲编号？10、对照组结果直接影响试验分析，应保证条 件一致，样品不被沾污。测定临成样品时取 好有健康动物样品同时做。11、已测样品应保留一定时间，以备核查。但 过期样品应及时、妥善处理。12、如何衡量某测定方法的可靠性及操作 者的技术熟练程度？（1）重复性试验：每个样品作23个平行管， OD<0.015;不同时间、人员，OD<0.03。（2）多次重复测定结果的误差（精密度）应在5% 以内，最大不超过10%。

22、（3）作回收试验，加一定量标准液后测定，回收率符合要求。（4）加0.5x、lx、l.5x及2x样品进行测定，计算结果是否相符。(5)插入参考或定值血清进行测定。（6）显色反应以普通分光光度计（如721型） 测定的OD在0.10.8之间最佳。（7）使绝大多数测定样品在线性范围内，线 性范围满足健康和病理样本。（8）部分测定样品结果太高或太低，应将样 品作稀释或加量。七、血准样品的采取与保存符合要求的样品是获得正确结果的基础、保 证：量够、新鲜，不浑浊、不溶血、无凝 块、无污染，有标签、有记录。1、采取量：最大采样量，试验需用量小白鼠BW25g,总血量22.5mL,心脏穿 刺可采血0.7 mL*大白鼠BW 325g,可采血9mL(占体重1/36, 最多可收集到体重5%8%的血量）。*豚鼠BW 480g,可采血19mL左右（占体重 4%，血液总量占体重4.5% 8.1%)。*成年兔每次可采血20mL。切断颈静脉放血 可得到体重1/45的血液。 2、常规采血途径:鼠从尾尖、眼球、心脏穿 刺，以及麻醉、剖腹后从 腹主动脉采血；*兔从耳静脉或心脏木血；*猪可从耳静脉及前腔静脉采血; *羊及大动物从頭静脉采血。*奶牛尾部血管采血法*操作者左手抬起牛尾，在 尾内侧、离肛门415cm*用510mL次性注射器、9号针头于正中凹陷处刺入38mm，有时刺过血管，要抽出少许， 能采血35mL