试验九蛙心搏期外收缩和蛙类离心脏灌流试验报告

1、华南师范大学实验报告一、实验题目：蛙心搏的观察与描记、期外收缩与代偿间歇和蛙类离体心脏灌流二、实验仪器与材料：蛙3只；常规手术器械、蛙板、蛙心夹、毁髓针等；秒表（手机秒表）、两个针头（针灸针）、双针形露丝刺激电极、张力换能器、支架、滑轮、双凹夹、PowerLab生理实验系统、 蛙心插管（斯氏套管）、套管夹药剂：0.65%NaCl溶液，5%NaCl溶液，2%CaCl2溶液，1%KCl溶液，1:5000肾上腺素，1:10000乙酰胆碱溶液，300U/ml肝素溶液三、实验方法：（一）蛙的心搏观察1. 双毁髓，暴露蛙心脏：小心剪去心包膜。2. 观察蛙心脏结构3. 观察心搏过程，记录正常心跳次数4. 斯

2、氏第一结扎，观察记录静脉窦、心房和心室5. 斯氏第二结扎，观察记录静脉窦、心房和心室6. 重复步骤1制备另一个蛙心暴露，用于下面的心搏曲线实验（二）蛙的心搏曲线与心电图记录1. 连接实验装置：PowerLab刺激输出线接双针形刺激电极，张力换能器接通道 2,通道3生物电输入线接针形电极2. 用蛙心夹轻夹心尖连接张力换能器，可用滑轮，棉线适当延长点，角度放低3. 开机，打开chart软件，分别设置 ch2和ch3放大参数，设置刺激为单脉冲。4. 针形电极插入蛙上下肢皮肤，连接通道 35. 观察正常的蛙心搏曲线和心电图记录。（三）期外收缩与代偿间歇实验1. 在方法二的基础上，将刺激电极放到心室部位

3、，注意尽量不影响心脏的收缩舒张2. 分别在心室的收缩期，舒张早期、中期和晚期给予适当强度单脉冲（阈上刺激） 期外收缩和代偿间歇的发生。3. 保存数据4. 进入方法四，制备蛙的离体心脏灌流装置（四）蛙离体心脏灌流装置1. 双毁髓，暴露蛙的心脏，分辨连接蛙心脏的血管：动脉圆锥、左主动脉和右主动脉，静 脉与静脉窦2. 斯氏蛙心插管法：在左主动脉下穿线，离左右主动脉分支处（近动脉圆锥）2mm结扎左主动脉，在左右主动脉下再穿一线打活结备用，准备好蛙心套管（任氏液 +1滴肝素 溶液），在左主动脉的分支上部位剪一小斜口，将套管插入心室（收缩期），当看到血液冲进套管，液面上下移动，即可结扎动脉和套管。（五）离

4、体心脏灌流实验项目1. 记录正常心搏曲线，准备好加药标记，以下实验过程中保持chart连续不停的记录2. 滴加0.65%NaCl溶液并标记，观察到心搏明显变化后，吸去套管内溶液并同时做冲洗标记，用新鲜的任氏液清洗23次，待心搏曲线恢复正常。注意，换液时切勿碰套管，保持灌流液面一致。（以下实验同）。保持Chart连续采样直到实验结束。3. 滴加 5%NaCl26 滴。4. 滴加2%CaCl2溶液13滴实验5. 滴加1%KCl溶液12滴实验6. 滴加12滴肾上腺素溶液（1:5000）实验7. 滴加12滴1:10000乙酰胆碱溶液实验8. 实验结束，保存数据，回放记录，卸下实验装置，清理仪器、桌面卫

5、生，并关PowerLab 和电脑电源四、实验结果：（一）蛙的心搏观察从心脏的腹面可看到一个心室，其上方有两个：心房，房室之间有房室沟。心室右上方有一动脉圆锥，是动脉根部的膨大，动脉干向上分成左右两分支用蛙心夹夹住少许心尖部肌 肉，轻轻提起蛙心夹，将心脏倒吊，可以看到心脏背面有节律搏动的静脉窦。在心房与静脉窦之间有一条白色半月形界线，称为窦房沟。前、后腔静脉与左、右肝静脉的血液流人静脉窦。记录正常水平下，静脉窦、心房和心室的跳动频率如表一表斯氏结扎记录表（频率:次/1min )静脉窦心房心室对照525250第一结扎474141第二结扎423932（二）蛙的心搏曲线图一蛙的心搏曲线由图一可观察到本

6、实验所用的蛙心每收缩一次形成的波形有两个波峰，一个峰值较低， 而且上部较为钝圆，另一个峰较为高，上部较尖，则可以推测出本实验所记录的第一个较低 的波峰是由心房收缩而形成，第二个较高的波峰为心室收缩产生。（三）期外收缩与代偿间歇实验图二 蛙的期外收缩与代偿间歇曲线10文件102012-05-07 16:10:46.828期外收缩代偿间歇道通由图二可观察到在舒张早期以后，对心室给予一次刺激， 使心室在正常窦房结的冲动到达之前，因额外的刺激引起一次提前收缩，即期前收缩。心室在期前收缩之后出现较长的舒张时间，称为代偿间歇。（四）蛙离体心脏灌流实验图三滴加5%NaCl2溶液后蛙的心搏曲线图当任氏液中加入

7、Na+后，蛙的心搏曲线的基线明显下降，说明 Na+对蛙类心 脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。图四 滴加2%CaCl2溶液后蛙的心搏曲线图图五滴加2%CaCl2溶液后加入新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图艾件1空0g1:Kl：a1:40土”由图四、五，可观察到当任氏液中加入Ca2+后，心搏曲线的基线上移。当加入新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图渐渐恢复正常，心搏曲线基线逐渐下移恢复正常水平。图六滴加1%KCl溶液溶液后蛙的心搏曲线图文件1如图六所示，当任氏液中加入 K+后，蛙的心搏曲线呈下降趋势，说明K+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用， 使心脏的收缩力降低。同时心搏曲线由密变疏，说明心率减慢。当加入

8、 新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图渐渐恢复正常，心搏曲线基线逐渐下移恢复正常水平。五、分析与讨论（一）蛙的心搏观察1. 斯氏第一结扎后，房室搏动都减慢原因在于斯氏结扎第一次是分离静脉窦与心脏之间的传递，心脏的自律性完全靠静脉窦来提供， 如果截断静脉窦与心脏之间的传递， 因为静 脉窦对异位起博点有抑制作用， 则心脏会停止跳动一段时间， 而后异位起博点开始起跳， 应 该是房室交界处开始搏动， 因为房室交界的自动频率与静脉窦的频率之间的差距最小，但它比静脉窦的搏动频率要慢，所以心跳减慢。2. 斯氏第二结扎后，房室搏动频率减慢，而且比斯氏第一结扎更慢，原因是斯氏结扎第二次是阻断方式交界处，那则由浦肯野纤维

9、开始搏动进行异位起博，他的搏动频率比房室交界更慢，所以心脏跳动会更加缓慢。（二）蛙的心搏曲线在蛙心材料和实验条件理想的条件下，蛙的理想的心搏曲线如图七，出现三个峰值，分别是窦房结的搏动、心室的搏动以及心房的搏动。相比此次实验的结果（图一），窦房结的搏动波峰没有出现，可能原因是：1、实验仪器的灵敏度不足，未能测出窦房结的搏动；2、由于蛙心暴露在空气中已久，在解剖过程中损伤较大，窦房结搏动受到影响。图六蛙的心搏理想曲线心房的搏动心室的搏动窦房结的搏动（三）期外收缩与代偿间歇实验心肌兴奋后，兴奋性会发生周期性的变化，其有效不应期特别长，相当于整个收缩期和舒张早期。因此，在心脏的收缩期和舒张早期内，任

10、何刺激均不能引起心肌兴奋与收缩，但在舒张早期以后，对心室给予一次阈上刺激，使心室肌在正常窦房结的冲动到达之前，因额外的刺激引起一次提前收缩，即期前收缩。期前收缩也有自己的有效不应期，如果正常的窦房结的冲动到达心室时，正好落在心室期前收缩的有效不应期内，因而不能引起心室的兴奋和收缩，需等到正常的窦房结的冲动再次到达时，心室才能产生收缩。心室在期前收缩之后出现较长的舒张时间，称为代偿间歇。若窦性心律较慢，下一次窦房结的兴奋也可在期前兴奋的有效不应期结束后才传到心 室，在这种情况下，代偿间歇将不会出现。（四）蛙离体心脏灌流实验1. 由图三可以看出，当任氏液中加入 Na+后，蛙的心搏曲线的基线明显下降

11、，说明Na+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。同时心搏曲线由密变疏，说明心率减慢。原因：心肌细胞的兴奋 -收缩偶联在很大程度上依赖于胞外内流的Ca2+,而当Na+浓度升高时，由于Na+与Ca2+竞争性地与肌钙蛋白结合，使得Ca2+与肌钙蛋白的结合能力降低，从而使得钙内流减少，因此心肌收缩力减弱，同时也使心率变慢。2. 如图四、五所示，当任氏液中加入Ca2+后，蛙的心搏曲线的基线明显上升，说明 Ca2+对蛙类心脏的收缩性起促进作用，使心脏的收缩力增强。而心搏曲线疏密程度变化不大，说明对心率的影响不大。原因：心肌兴奋 -收缩偶联的媒介与骨骼肌一样也是 Ca2+,但 是钙的来源不同，由于心肌细胞的终末池很不发达，所贮存的Ca2+极少，因而胞内的 Ca2+主要来源于细胞外液，即心肌细胞的兴奋 -收缩偶联在很大程度上依赖于胞外内流的 Ca2+, 故细胞外液中的 Ca2+浓度对心肌收缩力的影响较大。在一定范围内，细胞外液中的Ca2+浓度升高时，兴奋过程中 Ca2+内流量增多，心肌收缩力就强；反之，心肌收缩力就弱。3. 如图六所示，当任氏液中加入K+后，蛙的心搏曲线呈下降趋势，说明K+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。同时心搏曲线由密变疏，说明心率减慢。原因：当K+浓度升高时，由于K+与Ca2+竞争性地与肌钙蛋白结合，使得Ca2+与肌钙蛋白的结合能力降低