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1、会计学1实验中常用蛋白检测方法实验中常用蛋白检测方法Western Blot免疫荧光免疫荧光ELISA免疫组化免疫组化第1页/共14页原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色、化学发光或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。n特点：组织、细胞来源均可；半定量第2页/共14页异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性

2、。第3页/共14页胞或组织培养上清液，需将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。第4页/共14页蛋白检测方式蛋白检测方式免疫组化法免疫组化法Western blotWestern blot法法ELISAELISA试剂盒法试剂盒法相同点相同点抗体-抗原结合反应不同点不同点样品类型样品类型组织或细胞组织或细胞血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液分析方式分析方式定位、定性及定量的研究(主要是定位，定位敏感性远远高于Western blot法)可以用于定性和半定量，定量较免疫组化法准确多用于定量分析，其灵敏度非常高观察结果观察结果

3、免疫组化图（膜阳性、质阳性和核阳性）电泳图（着色的位置和着色深度）蛋白浓度应用范围应用范围组织标本，细胞中蛋白交互作用以及信号通路。检测蛋白质特性、表达的一种最常用的方法。组织、细胞。分泌性蛋白检测3种蛋白检测水平的比较种蛋白检测水平的比较第5页/共14页第6页/共14页第7页/共14页第8页/共14页第9页/共14页目前多用proreinA预先结合固化在琼脂糖微珠上，Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体的Fc区结合，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，琼脂糖微珠上的proreinA/G与抗体Fc特异性结合，由于抗体抗原特异性，沉淀蛋白X；溶液中有和蛋白X相互作用的物质，就能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。第10页/共14页第11页/共14页把其中一个蛋白

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