广西地方标准《葡萄中白藜芦醇含量的测定液相色谱法》

1、ICSDB45广西壮族自治区地方标准DB 45/T XXXXX2012葡萄中白藜芦醇含量的测定 液相色谱法Testing resveratrol of grape Liquid chromatography analysis（征求意见稿）2012-XX-XX发布2012-XX-XX实施广西壮族自治区质量技术监督局发布DB45/ XXXXX2012前言本标准根据GB/T1.1-2009要求进行编写。本标准由广西大型仪器协作共用管理委员会办公室提出并归口。本标准由广西壮族自治区分析测试研究中心起草。本标准主要起草人：周琳、陈秋虹、莫建光。本标准为首次发布。3葡萄中白藜芦醇含量的测定 液相色谱法1

2、范围本标准规定了液相色谱法测定白藜芦醇含量的方法原理，使用仪器与设备、测定方法及结果计算。本标准适用于葡萄中白藜芦醇含量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 JY/T 024 高效液相色谱法通则3 方法原理葡萄采用匀浆后加无水硫酸钠干燥处理，葡萄中的白藜芦醇经乙酸乙酯提取，旋转蒸干，用甲醇定容，高效液相色谱仪测定，根据保留时间和峰面积进行定性和

3、定量。4 试剂和材料4.1 一般规定 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682-2008中规定的三级水；流动相用水应符合GB/T 6682中一级水的规定。所述溶液如未指明溶剂，均系水溶液；所用制剂和制品按GB/T 603配制。4.2 试剂4.2.1 乙腈：色谱纯。4.2.2 甲醇：分析纯。4.2.3 乙酸乙酯：分析纯。4.2.4 无水硫酸钠：分析纯。4.2.5 乙酸：分析纯。4.2.6 乙酸溶液0.1 （V/V）：量取1 mL冰醋酸，加水至1 000 mL。4.2.7 白藜芦醇标准品（分子式C14H12O3）：含量99 。4.3 白藜芦醇标准溶液 精密称取白

4、藜芦醇标准品10.0 mg于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。制成1.00 mg/mL的标准储备溶液，白藜芦醇标准工作液临用前配置，用甲醇稀释至20.0 µg/mL。5 仪器与设备5.1 液相色谱仪带紫外检测器，其灵敏度及稳定性符合JY/T 024-1996第6章要求。5.2 液相色谱工作站或色谱数据处理机。5.3 微量进样器：25L或100L。5.4 均质分散器。5.5 恒温振荡器。5.6 旋转蒸发器5.7 分析天平：感量0.000 1g。6 测定步骤6.1 提取取新鲜葡萄用分散器搅成匀浆，精确称取样品5.000 0 g（精确至0.000 1g），加入无水硫酸钠研磨至

5、干燥均匀分散，置磨口三角瓶中用乙酸乙酯50 mL在40恒温下振摇提取30 min，反复提取三次。合并乙酸乙酯提取液，减压蒸干，用甲醇溶解残留物，至5 mL棕色量瓶定容。摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜(0.45m)滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别取供试品溶液与白藜芦醇标准工作液（4.3）各20µL注入液相色谱仪。6.2 液相色谱条件6.2.1 色谱柱：C18(4.6 mm×250 mm，5m)：或性能相当的色谱柱。6.2.2 柱温：25 。6.2.3 流动相：取0.1 （V/V）乙酸溶液750 mL加入250 mL乙腈6.2.4 流动相流速：1.0 mL/min。6.2.5 检测波长：306 nm。6.2.6 检测灵敏度：1 AUFS。6.3 测定 外标法分析测定。分别吸取10L标准溶液和样品溶液上机进行色谱分析。标准溶液及样品重复进样，所得峰面积（或峰高）平均偏差小于3 %。6.4 液相色谱图（见图1）7 结果计算和表达7.1 计算公式试样中白藜芦醇的含量X，以质量分数毫克每百克（mg/100g）表示，按照公式（1）计算： .（1）式中：V试样溶液定容体积，mL；As试样溶液对应的色谱峰面积响应值；Asd白藜芦醇标准溶液对应的色谱峰面积响应值；白藜芦醇标准溶液的含量，µg/mL；m试样的质量