紫外分光光度计的应用

1、紫外分光光度计的应用分光光度法的特点v1.灵敏度高v2.准确度高v3.适用范围广v4.操作简便快速、应用范围广吸收光谱的分类v远紫外线 波长范围：10200nm 分析方法：真空紫外光度法v近紫外线 波长范围：200380nm 分析方法：紫外光度法v可见线 波长范围：380780nm 分析方法：比色及可见光度法吸收光谱的分类v近红外线 波长范围：0.782.5um 分析方法：近红外光谱法v中红外线 波长范围：2.55.0um 分析方法：中红外光谱法v远红外线线 波长范围：5.01000um 分析方法：远红外光谱法溶液颜色与光吸收的关系v互补色 两种颜色的光按适当强度比例混合时，可以形成白光，这两

2、种色光就称为互补色。 黄 绿 青 | / 橙 白光 青蓝 / | 红 紫红 蓝溶液颜色与光吸收的关系v白光通过溶液时，溶液没有吸收的，该溶液呈无色透明状。v白光通过溶液时，溶液全部吸收的，该溶液呈黑色。v白光通过溶液时，溶液选择性吸收的，该溶液呈现被吸收波长光的互补色。 如：KMnO4溶液，吸绿色而呈紫红色光的吸收曲线v将不同波长的光通过一定浓度和厚度的有色溶液，分别测出它们对各种波长的吸光度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标画出曲线，称为光的吸收曲线。v光吸收程度最大处的波长称为最大吸收波长。光的吸收定律v朗伯-比耳定律 光的吸收与溶液的厚度与溶液的浓度成正比。 A=kbc A-吸光度 b-溶

3、液的厚度 c-溶液的浓度 k-比吸收系数光的吸收定律v透光率 透光率用T表示 透光率的到数的对数为吸光度 A=lg1/Tv比吸收系数含义 入射波长一定时，溶液浓度1%，液层厚度为1cm时的吸光度。 光的吸收定律的适用范围v各种有色的均匀溶液，一定的浓度范围。v超过一定的浓度范围，曲线会发生正偏离或负偏离。v偏离的原因v1.入射光非单色光v2.溶液中的化学反应v3.比耳定律的局限性 溶液浓度小于0.01mol/L的稀溶液目视比色法v工作原理 朗伯-比耳定律 : A=kbc 其中A、k、b相同，c必定相同。v优点v1.仪器简单，操作简便v2.液层较厚，灵敏度较高v3.在特定条件下，不符合朗伯-比耳

4、定律的溶液，仍可测定。v缺点 准确度较差紫外可见分光光度计v主要部件 光源、单色器、吸收池、检测器、测量系统v部分性能v 721分光光度计 波长范围360800nm 玻璃棱镜 读数方式：指针式 v 754分光光度计 波长范围200800nm 光栅 读数方式：指针式 紫外可见分光光度计vCary-50分光光度计 波长范围1901100nm 光栅 读数方式：微机 具有扫描功能分光光度计的检验与维护v分光光度计的检定周期: 一年v环境要求 1.室温应保持在1528。 2.相对湿度应在4565%,不应超过75%。 3.防尘、防震、防电磁干扰。 4.防腐蚀。分光光度计的检验与维护v保养和维护方法 1.不

5、用时不要开光源灯。 2.不要拆开单色器，单色器是仪器的核心部分。 3.吸收池用后，立即洗净，防止擦伤。 4.光电器件应避免强光照射和受潮积尘。 5.仪器的工作电压应保持在220v10%，必要时配备温压器。分光光度法v分光光度法两种形式v利用物质本身对紫外或可见光的的吸收进行测定v生成有色化合物即“显色”以后测定显色反应v显色反应分为两类v络合反应v氧化还原反应v其中络合反应是主要的显色反应显色反应的要求v选择性好v灵敏度高v有色化合物的离解常数要小v有色化合物组成要恒定v显色剂有颜色时，要求有色化合物与显色剂的颜色差别要大，以减小试剂空白v显色反应的条件要易于控制显色剂v无机显色剂 硫氰酸盐、

6、钼酸铵、过氧化氢v有机显色剂 邻菲罗琳、双硫腙、铬天青S等反应条件的选择v显色剂的用量 显色剂应是过量的，保证显色反应的完全。但是显色剂过量太多，容易引起副反应，造成结果偏差。反应条件的选择v溶液的酸度 1.溶液的酸度不同，显色化合物的组成和颜色可能不同。 2.溶液的酸度变化，显色剂的颜色可能发生变化。 3.溶液的酸度过高，降低配合物的稳定性。溶液的酸度过低，会引起金属离子水解。反应条件的选择v温度的影响 室温进行显色的、加热显色 温度对光的吸收和颜色的深浅都有影响v显色时间 1.立即显色，放置后颜色稳定 2.放置一定时间后，进行比色 3.立即显色，放置后颜色逐渐褪去反应条件的选择v溶剂 有机

7、溶剂常会降低有色化合物的离解度，从而提高显色反应的的灵敏度 常用溶剂的波长下限（10mm池） 水205nm 乙醇 95% 204nm 乙晴 190nm 苯280nm甲醇205nm 乙醚215nm 氯仿245nm 四氯化碳245nm丙酮330nm共存离子的干扰v与试剂生成有色化合物v干扰离子本身有颜色v与试剂反应，生成配合物无颜色，消耗大量显色剂，使被测离子显色反应不完全v与被测离子结合成离解度小的另一种化合物，使被测离子与显色剂不反应干扰的消除方法v控制溶液酸度v加入掩蔽剂v利用氧化还原反应改变干扰离子的价态v选择适当的参比溶液v选择适当的波长v采用适当的分离方法除去干扰离子v利用导数光谱法、

8、双波长法等新技术参比溶液的选择v参比溶液的作用：用于分光光度计的吸光度调零v溶剂参比 水或有机溶剂v试剂参比 不加试样的试剂v试液参比 不加显色剂的试液v其他参比 试样+掩蔽剂+显色剂+其他试剂测定条件的选择v入射光波长的选择 入射光波长的选择从灵敏度和选择性两个方面来选择。 灵敏度最高应是最大吸收波长 选择性最高应是干扰最小的吸收波长测定条件的选择v吸光度范围的控制 最适宜吸光度范围0.20.8 透光率为（15%65%）v调节最适宜吸光度的方法 1.调节溶液浓度 2.使用厚度不同的吸收池 定量分析v工作曲线法 4个以上的浓度，以空白溶液为参比，在选定的波长下，分别测定吸光度，以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵座标，绘制工作曲线。 工作曲线为 y=a+bx x为标准溶液浓度，y为吸光度，b为直线斜率，a为直线截距，a和b称为回归系数工作曲线法v工作曲线的好坏可以用相关系数r来表示v相关系数越接近1线形关系越好。v一般的光度分析方法r0.999v曲线强制过原点时曲线演变为 y=bxv当更换标准溶液、试剂重配时应重新绘制标准工作曲线标准对照法v即采用一个标准溶液，与原点构成工作曲线v计算公式为v c样= A样/A标 c标v注意标准样品的吸光度应控制在0.40.8以内较好吸收系数