崔树和大学本科方案设计书初稿1

1、吉林农业科技学院学士学位论文论 文 题 目：吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查年级专业：09动物医学学生姓名：崔 树 和学号：0908601105指导教师：呼 显 生评阅教师：完成日期：吉林农业科技学院吉林地区临床健康猪群链球菌带菌情况调查学生:崔树和专业 :动物医学指导教师 : 呼显生摘要本研究旨在调查吉林地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况。随机采集吉林地区7个区县 ( 市) 定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体960 份，进行增菌培养后采用PCR 方法进行猪链球菌种型鉴定并用血清凝集实验复检，对采集的病料进行检测分析。结果：从吉林地区 9 个区县 ( 市) 采集的 900 份猪扁桃体样品中共检

2、出46 株猪链球菌，检出率为 5.11%，其中 15 株为猪链球菌 2 型 (32.6%) ，8 株为猪链球菌 7 型（ 17.3%）， 3 株为猪链球菌 9 型（ 6.5%）， 20 株未定血清型（ 43.5%）。结论：吉林地区表观健康猪群平均带菌率为 5.11%，猪链球菌 2 型为主要血清型。关键词：临床健康猪；猪链球菌；流行病学调查；扁桃体Clinical investigations into healthy swine streptococcus pathogen in JiLin AreaName: Cui ShuheMajor: Veterinary MedicineTutor:

3、 Hu XianshengAbstractThis study aims to survey the apparent healthy swine streptococcus suis in jilin area study. Random collection of seven counties (cities) in jilin area designated slaughterhouses apparent healthy pigs palatine tonsil, 960 after enrichment culture using polymerase chain reaction

4、(PCR) to streptococcus suis type of identification and serum agglutination test the re-inspection, the collection and analysis of the epidemic materials for testing. Results: from the nine districts in jilin area (city) acquisition of check out of a total of 900 samples of pig tonsil46 strains of st

5、reptococcus suis, detection rate was 5.11%, including 15 strains of streptococcus suis type 2 (32.6%), 8 strains of streptococcus suis type 7 (17.3%), 3 strains of streptococcus suis type 9 (6.5%), 20 strains of undetermined serotype (43.5%). Conclusion: the apparent in jilin area healthy swine path

6、ogen rate was 5.11% on average, streptococcus suis type 2 as the main serotype.Key Words: Clinical healthy pigs。 Streptococcus suis。 Epidemiological investigation。 The amygdala目录摘要 IAbstractII正文 1前言 11 材料与方法 11.1 材料 1样品采集 1菌株与抗血清1主要试剂 11.2 实验方法 2样品的细菌培养2猪链球菌种型的鉴定2血清凝集实验22 实验结果 22.1 不同地区猪链球菌分布情况22.2

7、血清凝集实验结果33 讨论与分析 3结论 4参考文献 4致谢 4正文前言猪链球菌 ( Streptococcus suis) 属链球菌属，按照荚膜抗原的差异，可分为35个血清型 (1-34 、1/2) 1 。其中猪链球菌 2 型( Streptococcus suis serotype2，SS2) 在世界上流行最广，致病性最强，同时能引起人的感染，是一种重要的人畜共患病病原。近年在亚洲、欧洲和美洲多个国家出现暴发流行，不仅危及公共卫生安全，而且给世界养猪业造成巨大损失。猪链球菌可以在健康猪和病猪的腭扁桃体定居1年以上 2 ，亚临床症状的带菌猪常会引起猪和人的发病。我国于 1998年和 2005

8、年分别在我国江苏、四川和香港发生过严重的猪链球菌 2型疫情以及人感染死亡事件，但健康猪带菌现象未得到重视。为了了解吉林地区临床健康猪群中猪链球菌的带菌情况，于 2011年10月采集屠宰场临床健康猪的扁桃体进行链球菌的分离和检测，为吉林地区猪链球菌的诊断和防控工作提供数据支持。（批注：前言太少了，要有猪链球菌的危害，在国内主要流行情况，吉林地区的主要流行情况概述）1 材料与方法1.1 材料样品采集健康猪扁桃体的采集：从吉林市各县区屠宰场在 10d 内随机采取本地区猪源的猪腭扁桃体样品共 900 头份。采集样品 4保存。菌株与抗血清猪链球菌 1 型、 2 型、 7 型、 9 型、 1/ 2 型和

9、14 型的标准抗血清和参考菌株由加拿大蒙特利尔大学引进。主要试剂rTaqDNA 聚合酶 ( 5 U/ L)、 DL 2000DNAMarker 、 10PCRbuffer ( 含 MgCL 2) 、 dNTPs ( 2.5 mmol/ Leach) 等购自宝生物工程有限公司， 5%绵羊血平板， THB 肉汤培养基购自美国 BD 公司。1.2 实验方法样品的细菌培养无菌操作挑取样品接种于绵羊血平板， 37培养 1820h，挑取单个呈浅灰色针尖大小溶血菌落，经涂片进行革兰氏染色、镜检，可见链状革兰氏阳性球菌，采用葡萄糖肉浸液肉汤液体培养基接种纯化增菌培养， 37培养 18 20 h 收取菌液备用。

10、猪链球菌种型的鉴定用 PCR 方法对疑似猪链球菌的 DNA进行猪链球菌种 ( gdh) 鉴定 3 ，阳性者再进行猪链球菌 1 型、 2 型或 1/2 型、 7 型、 9 型鉴定。依据 GenBank 中的猪链球 cps1J( Gen-Bank 登录号 AF155804) 、cps2J ( GenBank 登录号 AF118389) 、cps7H ( GenBank 登录号 AF164515)、 cps9G( GenBank 登录号 AF155805) 、gdh( GenBank 登录号 AF229683)5 个基因设计了 5 对引物 ,引物由上海生工生物工程技术服务公司合成4 。由上海生工5D

11、NA模板为阳性对照，金黄色葡萄球菌的DNA模板为阴性对照，水为空白对照。血清凝集实验PCR 鉴定为猪链球菌 1 型的分别用猪链球菌 14 型和猪链球菌 1/2 型标准抗血清作进一步鉴定， PCR 鉴定为猪链球菌 2 型的用猪链球菌 1/2 型标准抗血清作进一步鉴定。血清凝集实验具体方法为 : 将已知抗体的诊断血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分钟后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应。同时设生理盐水和菌体对照。2 实验结果2.1 不同地区猪链球菌分布情况从吉林地区 9个区县 ( 市) 采集的 900份猪扁桃体样品中共检出46株猪链球菌，检出率为 5.11%，其中 15株为猪链球菌 2型，

12、8株为猪链球菌 7型， 3株为猪链球菌 9型， 20株未定血清型。 15个采样点中 9个采样点检出猪链球菌，其他 6个采样点未检出猪链球菌，如表 1所示。表 2-1 吉林市屠宰犬压片镜检法检出情况地区腭扁桃猪链球菌数检出率S.S. suiS.S.S. sui未定型Region体数量量/ %suis1s1/ 2suis2suis7s9 型数量PalatineStreptococcusDetection型型型型S. suisUntypedtonsilsuisrateS. suisS. suisS. suisS. suistype9type1type1/2type2type7永吉120108.330

13、03304舒兰12075.83002023桦甸1201310.83002209蛟河12000000000磐石18042.22003001昌邑6000000000船营60711.67003202丰满6000000000龙潭6058.33002111合计900465.11001583202.2 血清凝集实验结果对6株定型分离株用玻片血清凝集实验复检发现:猪链球菌 2 型菌体只与猪链球菌2型抗血清发生凝集，不与猪链球菌 1/ 2 型抗血清发生凝集，因此判定为猪链球菌 2 型。猪链球菌 7型和 9型菌体分别和猪链球菌 7型、 9型抗血清发生特异性凝集反应。所有结果与 PCR鉴定结果一致。3 讨论与分析

14、本次调查采用屠宰场随机采样的方法对表观健康猪的猪链球菌带菌情况进行监测，并采取屠宰猪的扁桃体，该方法具有简易方便、易操作的优点，且本次所检测猪均为当地的普通育成猪，调查结果具有吉林地区特点。猪链球菌自然存在于上呼吸道，猪群中的感染，多是由腭扁桃体带有病原体的表观健康猪引起 6 ，而存在于腭扁桃体上的猪链球菌的血清型也是多样的。从病猪分离的菌株的血清型主要是 2型,其余还有 1/2 、 3、 4、 6、 7、 8 和9 型7 ；本文仅检测了 PCR方法能够定型的 6 个血清型 , 部分分离株 (43.5%) 未定血清型 , 所得结果与已报道的健康猪带菌的优势血清型情况基本相符。而猪链球菌 2型菌

15、为 15株(32.6%), 这一数据说明吉林地区为猪链球菌 2型发病高危地区，应加强本病的重点防控。由于猪链球菌病流行的优势血清型具有一定的地域性, 因而查清一个地区的流行情况 , 是有效控制猪链球菌病的关键。作者在吉林地区对表观健康猪猪链球菌带菌状况进行调查 , 并对流行的优势血清型进行研究 , 对进一步的预防和监测 ,有效控制传染源和传播途径具有重要意义。结论通过对吉林市不同地区九家猪屠宰场随即抽取的 900 份猪的扁桃体样品进行链球菌检测，查到吉林地区表观健康猪群平均带菌率为 5.11%，猪链球菌 2 型为主要血清型 , 说明被检测的九家猪屠宰场生产的肉猪有链球菌感染。参考文献1 Rea

16、ms RY,Glickman LT,Harringtgon DD,et al. Strep tococcus suis infection in swine:aretrospectivestudy of256cases.Part .Clinicalsigns ， grossandmicroscopiclesions and coexisting microorganismsJ.J Cli Diagn Invest,1994,6(3):326-334.2Higgins R,GottschalkM,Mittalkr,etal.Streptococcus suisinfectioninswine.A

17、six teenmonth study J. CanJ Vet Res,1990,54(1):170-173.3PersaudJ S,ReddyPG.Cloningand characterizationofthegeneencodingtheglutamatedehy drogenaseofStreptococcussuisserotype2J.ClinDiagnLabImmunol,2001,8(2):251- 257.4 王楷宬, 熊忠良,尚延明, 等.重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测.畜牧兽医学报 ,2010,41(5):594- 599.5蔡振鸿 . 中国部分地区猪链球菌遗传背景及

18、进化关系研究D.南京农业大学 ,2007.6CliftIon-hadeu F A, AlexanderT J.Tecarriersiteandcarrierrate ofStreptococcus suis type2 in pigs J. Vet Rec, 1980, 107( 2) : 40- 41.7Morereau A,Higginsr,Bigras-poulinM,etal.Rapiddetectionof Streptococcussuisserotype2in weaned pigJ. Am J Vet Res,1989,50(10):1667- 1671.致谢本论文是在我的导师呼显生副教授的亲切关怀和悉心指导下完成的，非常感谢呼老师能在百忙之中抽出时间来给我指导论文。呼老师严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风