6实验三 酵母菌死活细胞的鉴别和计数

1、食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林实验三实验三 酵母菌死活细胞鉴别和计数酵母菌死活细胞鉴别和计数任务一任务一 鉴别酵母菌细胞死活鉴别酵母菌细胞死活任务二任务二 血球计数板进行酵母菌计数血球计数板进行酵母菌计数食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林实验原理实验原理1 1、酵母菌死活鉴别：活细胞中含有脱氢、酵母菌死活鉴别：活细胞中含有脱氢酶，把还原性美兰（蓝色）氧化成氧化性酶，把还原性美兰（蓝色）氧化成氧化性美兰（无色），故呈无色；死细胞因不含美兰（无色），故呈无色；死细胞因不含脱氢酶而呈蓝色。脱氢酶而呈蓝色。 食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术

2、上海农林上海农林实验原理实验原理2 2、计数：微生物常用的计数方法有两种，、计数：微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。前者利用血即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。后者是到数值，但死活细胞都计数在内。后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。本实验是利用血球计数板进但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计数。计数前需对样品做适当稀释，行直接计数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及计算公式运算后，即可得按照规定方法及

3、计算公式运算后，即可得出实际数值。出实际数值。食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林任务一任务一 鉴别酵母菌细胞死活鉴别酵母菌细胞死活盖盖玻片盖盖玻片先后滴加菌液、美蓝染液各一滴先后滴加菌液、美蓝染液各一滴1.1.酵母菌液美蓝染色酵母菌液美蓝染色食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林2.2.显微镜观察显微镜观察3.3.结论结论 活细胞中含有脱氢酶，把还原性美兰（蓝色）氧化成活细胞中含有脱氢酶，把还原性美兰（蓝色）氧化成氧化性美兰（无色），氧化性美兰（无色）， 故呈无色；死细胞因不含脱氢酶故呈无色；死细胞因不含脱氢酶而呈蓝色。而呈蓝色。 食品微生物与检测技

4、术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林任务二任务二 血球计数板进行酵母菌计数血球计数板进行酵母菌计数1.1.认识血球计数板认识血球计数板食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林血球计数板的分区与分格血球计数板的分区与分格例一例一 例二例二 1 1大格大格=16=16中格中格 1 1大格大格=25=25中格中格 =16 X =16 X 2525小格小格 =25 X 16=25 X 16小格小格 =400=400小格小格 =400=400小格小格 *#食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林1.1.操作方法操作方法1 1）准备稀释）准备稀释1010倍酵母菌悬液

5、。倍酵母菌悬液。2 2）将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用）将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。的盖玻片。3 3）将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边）将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。使酵母菌全部沉降到血球计数室内。4 4）计数）计数16 16 2525规格数左上、右上、左下、右下规格数左上、右上、左下、右下4 4个中格；个中格；25 25 1616规格数规格数左上、右上、左下、右下左

6、上、右上、左下、右下和（中间）和（中间） 5 5个中格。个中格。食品微生物与检测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林2. 2. 菌数计算菌数计算(1)16(1)16格格2525格的血球计数板计算公式：格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数酵母细胞数ml=ml=（100100小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数100100）40040010104 4稀释倍数稀释倍数(2)25(2)25格格x16x16格的血球计数板计算公式：格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数酵母细胞数ml=ml=（8080小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数8080）40040010104 4稀释倍数稀释倍数食品微生物与检

7、测技术食品微生物与检测技术 上海农林上海农林3. 3. 注意事项注意事项1 1）测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。）测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。2 2）活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，）活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1 1个个酵母细胞。酵母细胞。3 3）位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线）位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体上的菌体4 4）血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，）血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用9595的乙醇、无水乙的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。洗直到