BRMS1-HDAC1-VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及意义

1、brms1hdac1vegf-c在乳腺癌组织中的表达及意义摘耍冃的探讨brms1. hdac1及vegf-c蛋白在乳腺癌、乳房纤维瘤及正常乳腺组 织的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法随机检测60例乳腺癌组织标木brmsk hdac1、 vegf-c蛋口的表达,随机收集乳房纤维瘤组织及其旁正常乳腺组织各20例作为对照组，结合 临床病理资料分析其临床意义。结果brms1在乳腺癌组织小表达率为60%,在乳房纤维瘤组 织中表达率为85%,在正常乳腺组织中表达率为95%,乳腺癌组织中的brms1的表达明显低于乳 房纤维瘤和正常乳腺组织(p0. 05)。11dac1在乳腺癌组织屮表达率为91. 7%

2、,在乳房纤维瘤组 织屮表达率为55%,在正常乳腺纽织屮表达45%, hdac1在乳腺癌纟r织屮的表达明显高于乳房纤 维瘤和正常乳腺组织(p0. 01),乳腺癌中vegf-c的表达58. 3%高于乳房纤维瘤25%和正常组 织20%(p<0. 05) o结论brms1、hdac1和vegf-c共同参与了乳腺癌的转移，联合检测brms1. iidac1及vegf-c的表达有助于判断其预后。关键词brms1; hdac1; vegf-c;乳腺癌;免疫组织化学中图分类号r737.9 文献标识码a 文章编号1673-9701(2010)09-10-03expression and significa

3、nce of brms1,hdac1 and vegf-c in breast cancerxia genyu chen binyijishan hospital of wannan medical college, wuhu 241001,chinaabstract objectiveto investigate the expression and cl inical significsnce of breast cancer metastasis suppressor 1(brms1)protein,histone deacetylase 1 (hdac1) and vascular e

4、ndothelial cell growth factor-c(vegf-c) protein in breast cancer. methodsthe expression of brms1 protein, hdac1 and vegf-c was detected by using immunohistochemical technique in 60 cases of breast cancer, 20 cases of breast fibroids and 20 cases of adjacent normal breast tissue as control and the cl

5、 inical significance was analyzed with histopalthological records. resultsthe positive rate of brms1 expression was 60% in breast cancer tissue, 85% in breast fibroids and 95% in normal breast tissue, showing the positive rate of brms1 in breast cancer was much 1ower than that in breast fibroids and

6、 normal breast tissue(p<0. 05). the positive rate of hdac1 expression was 91.7% in breast cancer, 55% breast fibroids and 45% in normal breast tissue, showing the positive rate of hdac1 in breast cancer was obviously higher than that in breast fibroids and normal breast tissue(p0. 01). the positi

7、ve rate of vegf-c expression was 58. 3% in breast cancer, 25% in breast fibroids and 20% in norma i breast tissue(p<0. 05). cone 1 us i onbrms1, hdac1 and vegf-c might synergistically promote the metastasis of breast cancer. therefore,the combined detection of the expression of brms1 hdac1 and ve

8、gfc may be helpful in the determination of the prognosis of breast cancer.key wordsbrms1; hdac1; vegf-c; breast cancer; immunohistochemistry肿瘤转移抑制基因(brms1)是抑制肿瘤转移和扩散的一个重耍的途径。brms1是近年新发 现的基因，定位于人染色体llql3.广13.2,与乳腺癌发生的关系密切，木文采用免疫组化法探 讨brms1的病理特征和转移的关系,brms1表达与组蛋口去乙酰化酶1 (hdac1)、血管内皮住长 因子-c(vegf-c)的相互作用

9、及对乳腺癌转移过程的影响。1材料与方法1.1临床资料收集弋矶山医院2006年1刀2007年4刀病理科乳腺癌腊块标本60例,均有完整的病 理资料，术前均未行放化疗、内分泌及生物靶向治疗，患者年龄3179岁，屮位年龄50. 1岁， 其中年龄m50岁28例，50岁32例，肿瘤直径2cm 39例;肿瘤直径w2cm 21例，无淋巴结转 移者20例;有淋巴结转移者40例;根据tnm分期，i期9例，ii期27例，iii期21例，iv3例 er 阳性 32 例,er 阴性 28 例,pr (+) 44 例，pr (-) 16 例，her-2 (-)(+) 41 例,her-2 (2+)(3+) 19 例，随机

10、收集良性乳房纽织经病理证实均为乳房纤维腺瘤20例，随机收集乳房纤维腺瘤旁 0. 5cm外的正常乳腺组织20例作为对照。1.2标木采集和石蜡切片制备乳腺癌和乳房纤维腺瘤蜡块均来口病理科，收集我院门诊乳房纤维瘤旁止常乳腺组织(距 纤维瘤0. 5cm以上)，以10%卬醛固定，石蜡包埋后制成蜡块，全部蜡块以4 u m连续切片，行常 规he染色，选取形态典型标本行免疫组化染色。1.3主要实验试剂brms1兔抗人单克隆抗体，工作浓度1: looohdacl鼠抗人多克隆抗体，即用型。即用型sabc 免疫组化染色试剂盒，均购白武汉陳士徳公司。vegf-c兔抗人单克隆抗体和dab显色试剂盒， 购自北京中杉金桥牛

11、物技术有限公司。1.4制片检测正常乳腺组织收集后经福尔马林液固定,24h内取材，常规脱水、透明、浸醋、 包埋，切片(厚度为4ym),制作成石蜡切片。免疫组化(sabc法)严格按试剂盒说明操作。设阳 性对照和阴性对照，以已知的乳腺癌阳性片为阳性对照，以pbs代替一抗的乳腺癌组织免疫组 化染色结果为阴性对照。阳性判定:染色主要位于细胞胞浆或(和)胞核内，阳性表达标准参照kurose kl和李治 的报道,根据阳性细胞数和着色深度(与背景着色相对比)计分。先将阳性细胞染色强度评 分(a),无色或基本不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;再按阳性细胞 所占的百分比评分(b),每例随机计

12、数5个高倍镜(x400)视野，确定其每个视野的阳性率，取 平均数阳性细胞比例10%为0分,10%50%为1分,50%以上为2分。将两者得分相加,a+b3 分计为阴性，23分为阳性。1.5统计学处理实验资料的统计学处理通过spss11.5统计软件包进行。率的比较采用x 2检验,多个率 的比较采用rxc表x 2检验,两两比较采用x 2分割法，相关性分析采用spearman等级和关 分析。p值0. 05时认为两组之间有差异。p值0. 01有显著差异。2实验结果乳腺癌组60例患者均为女性，年龄3179岁,中位年龄50. 1岁。其中50岁32例，250 岁28例；肿瘤玄径w2cm 21例，肿瘤玄径2cm

13、 39例；无淋巴结转移20例,有淋巴结转移40例; 乳腺癌临床分期根据国际抗癌协会制定的乳腺癌txm分期标准，i期9例，ii期27例,iii期21 例，iv期3例;pr阳性44例,pr阴性16例;er阳性32例，er阴性28例;her-2(-)(+)41 例,her-2 (2+)(3+)19 例。60例乳腺癌组织标本及乳房纤维瘤、正常乳腺组织brms1. hdac1、vegf-c蛋口的衣达。 见表12。3讨论3. 1 brms1在乳腺癌中的表达及临床意义肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因，在肿瘤转移过程中除存在原癌基因的激活、抑癌基 因的失活、细胞间的黏附异常以及金属蛋白酶及其抑制剂表达失控外，

14、染色体发生杂和性缺失 (loh)与恶性肿瘤转移的关系十分密切，乳腺癌转移抑制基因1 (breast cancer metastasis suppressor 1, brms1)是2000年宾夕法尼亚州立大学hershey医学中心welch dr研究组发现 的一种转移抑制基因。brms1可通过多种途径发挥抑制肿瘤转移作用，上要集屮在两方面,一 方而brms1对胞外基质变化的彩响以及癌细胞与胞外基质关系的变化,samant rs3用brms1 转染的mda-mb-435和mda-mb-231乳腺癌细胞仍能继续生长，把浸润生长的肿瘤注入无胸腺 小鼠乳房组织，显苦减少往肺和局部淋巴结的转移，并推测br

15、ms1能恢复细胞间的缝隙连 接.brms1不上调具他肿瘤转移抑制基因如nm23, kail, kissk另一方面是brms1对癌细胞的 自身运动能力变化的影响,brms1可通过磷脂肌醇途径调节肿瘤转移4及下调骨桥蛋白(0pn) 加强诱导凋亡，抑制乳腺癌的转移5。本研究通过60例乳腺癌,20例乳房纤维瘤,20例正常乳腺组织，进行brms1的蛋白检测， 结果表明，乳腺癌的表达率明显低于正常乳腺和乳房纤维瘤的表达(p0. 01),而乳房纤维瘤和 正常乳腺组织表达无统计学的差异(p>0. 05),在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移 组,tnm分期iii+iv低于i +11组,er (+)组表达

16、率低于er组(p<0. 05), pr(-)组低于pr(+)组 (p<0. 05),而与年龄、肿瘤大小和her-2状态无关。从表中可以看出，无淋巴结及冇淋巴结转 移组差异较为明显(p0. 05),可以推测brms1的缺失是造成乳腺癌转移的因素之一，与乳腺癌 的侵袭和转移相关，尤其与乳腺癌的淋巴结转移密切相关,brms1可作为乳腺癌预后的一个独 立指标。防止brms1的缺失，提高其在乳腺癌的表达是预防乳腺癌发病和治疗乳腺癌的一种手 段,brms1可调控多个基因抑制肿瘤转移，但要准确判断是否有转移，还要结合其他相关指标 及是否与其他生物学指标冇相互作用。3.2 hdac1在乳腺癌中的表

17、达及临床意义组蛋白去乙酰化/脱乙酰化陆与基因转录的调控有密切的关系。hdac1既可直接抑制基因 转录，又与转录共抑制子msin3、rb等相互作用介导他们的功能6。hdac1作为一种基因调 控因了，在乳腺恶性肿瘤屮可能抑制er的表达7。hdac1拮抗剂是抗乳腺癌的新途径8。 hdac1拮抗剂功能的一个方面是hdac1参与组成的多蛋口复合体完整性受损从而影响该多蛋 白复合体的功能，使其甲基化功能受损。同时hdac1表达减少可通过pzi和bd-2的ax这一通 路引起细胞凋亡增多和细胞周期受阻而使增殖减少。统计学结果显示,hdac1蛋口在乳腺癌表达率是91. 7%,乳房纤维瘤蛋口表达率是55%,正 常

18、乳腺组织表达率是45%,hdac1在乳腺癌表达明显高于乳房纤维瘤和正常乳腺组织 (p<0. o1),hdac1在乳房纤维瘤和正常乳腺组织的表达无统计学意义(p0. 05)。hdac1的表达 与淋巴结转移、tnm分期、er的表达相关(p<0. 05),与年龄，肿瘤大小、pr、her-2受体状态 无和关性(p>0. 05) o值得注意的是淋巴结转移和txm分期与乳腺癌的侵袭和转移密切和关， 两者均有显著差异(p<o.o1),i1dac1阳性帘提示乳腺癌预后不良，因此i1dac1是乳腺浸润和转 移的一个因素，与乳腺癌发病及转移相关，是乳腺癌预后的一个指标。3.3 vegf-c

19、在乳腺癌中表达及临床意义vegf-c是vegf的新成员，又称淋巴管生长因子，肿瘤细胞通过合成vegf-c诱导内皮细胞 生长并形成新的淋巴管，在乳腺癌淋巴结转移中有重要作用。vegf-c能改变淋巴管内皮的黏 附特性，影响其分泌的细胞因子和趋化因子9。但vegf-c不能诱导口发的淋巴管生成，其发 挥作用依赖于原有的淋巴系统，它可以是诱导孤立的淋巴岛连接成网，也可以是以发岀丝状伪 足的方式萌芽10。本研究显示:vegf-c在乳腺癌表达的阳性率是5& 3%,纤维瘤阳性率是25%,正常乳腺组织 是20%,差异冇统计学意义(p<0.01),vegf-c在乳腺癌表达率与乳房纤维瘤相比较，有统计

20、学 意义(p0. 05),乳腺癌与正帘乳腺纽织比较，有显著差异(p0. 01),乳房纤维瘤和正帘乳腺组 织vegf-c的表达无显著的区别(p>0. 05), vegf-c表达在冇淋巴结转移和无淋巴结转移组冇就 著性差异(p<0.01),与乳腺癌的淋巴结转移密切相关，而与肿瘤大小、年龄、er、pr、tnm分 期及her-2受体状态无关(p>0. 05)。提示vegf-c可能参与乳腺癌的侵袭和转移，与乳腺癌转 移和预后相关，尤其与淋巴结转移密切相关，因此vegf-cnj作为预后的指标，抑制vegf-c在乳 腺癌组织的表达是防治乳腺癌的一个有效的途径。3.4 brms1. hdac

21、1与vegf-c的相关性及可能存在的作用机制spearman等级和关分析表明，乳腺癌屮brms1少hdac1呈负相关(r =-0. 406, p<0. 01), brms1 的表达与 vegf-c 的表达呈负相关(r =-0. 262, p<0. 05), hdac1 的表达 与vegf-c的表达呈正相关(r =0. 312, p<0. 05),这说明三者可能共同参与了乳腺的侵袭和转移, 而且存在着相互作用机制,brms1使hdac1下调,hdac1能上调vegf-c,产生血管和淋巴管，产 生淋巴管通过与vegfr-3结合,通过多种途径，最终在细胞外基质成分及淋巴管内皮细胞周

22、围 形成新生淋巴管。综上所述,我们的实验结果是在乳腺癌中可能存在这样的一条通路:brms1可 卜调hdac1的表达，使vege-c的表达减少，从而达到抑制肿瘤的转移，我们针对brms1的转移 机制进行靶向治疗，可抑制乳腺癌的转移，延长生命,改善生存质量及预后，为我们防癌抗癌提 供了一个新的途径。参考文献1 kurose k, gilley k, matsum oto s, et al. frequent soma tic mutations in pten and tp53 are mutually exclusive in the stroma of breast careinomasj.

23、nat genet, 2002, 32 (3): 355-357.2 李治，帅晓明，黄韬mmp-2、mmp-9在乳腺癌转移中作用的研究j.华西医 学,2006,21 (1):43-44.3 samant rs, seraj mj, saunders mm, et al. analysis of mechanisms underlying brms1 suppression of metastasisj. clin exp metastasis, 2000, 18(8):683-693.4 dewald db, torabinejad j, samant rs,et al. metastasis

24、 suppression by breast cancer metastasis suppressor 1 involves reduction of phosphoino- si tide signaling in mda-mb-435 breast carcinoma cellsj. cancer res, 2005, 65(3):713-717.5 hedley bd, welch dr, allan al, et al. downregula tion of osteopont in con tributes to metastasis suppression by breast cancer metastasis suppressor 1j. int j cancer, 2008, 123 (3): 526-534.6 yang l, mei q, zielinska-kwiatkowska a,et al. an erg(ets-related gene) -associated his tone methyl transferase i nteracts with histone deacetylases 1/2 and transcription corepressors msin3a/bj. bioch