第五章 蛋白质一(马)

1、。第五章第五章 蛋白质蛋白质( (Protein) ) 讲授提纲n蛋白质概述n氨基酸的一般结构与特性（重点） n肽 n氨基酸与蛋白质的分析分离（了解） n蛋白质的结构( 重点与难点）n蛋白质结构与功能的关系（重点与难点） 第一节第一节 概概 述述一、蛋白质的定义一、蛋白质的定义(Protein) 蛋白质：是一切生物体中普遍存在的，由天然氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子；其种类繁多，各具有一定的相对分子质量，复杂的分子结构和特定的生物功能；是表达生物遗传性状的一类主要物质。 结构 功能二、蛋白质在生命中的重要性二、蛋白质在生命中的重要性 早在1878年，思格斯就在反杜林论中指出：“生命是蛋白体

2、的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。” 可以看出: 第一，蛋白体是生命的物质基础； 第二，生命是物质运动的特殊形式，是蛋白体的存在方式； 第三，这种存在方式的本质就是蛋白体与其外部自然界不断的新陈代谢。 蛋白质占干重 人体中（成年人） 人体 45% 水55% 细菌 50%80% 蛋白质19% 真菌 14%52% 脂肪19% 酵母菌 14%50% 糖类1% 白地菌50% 无机盐7% 1、蛋白质是生物体内必不可少的重要成分蛋白质是生物体内必不可少的重要成分2、蛋白质的生物学功能蛋白质的生物学功能 催化：生命中所有的反应都是由酶催化的 调节：调节蛋白，生长激

3、素；胰岛素 运输: 血红蛋白，脂蛋白对脂的转运 运动: 肌肉收缩：肌动蛋白、肌球蛋白；游动：微管蛋白 贮存：卵清蛋白为鸟类胚胎发育提供氮源，母乳中酪蛋白 受体：接受、传递信息的受体 结构：毛发、角、指甲的a-角蛋白；腱、皮肤的胶原蛋白 防御和进攻：抗体，免疫球蛋白最近研究成果法发现免疫系统一特殊蛋白质法发现免疫系统一特殊蛋白质(启动或瘫痪启动或瘫痪）科学家发现存储记忆脑蛋白科学家发现存储记忆脑蛋白（关键作用）瑞士科学家发现两种大肠癌蛋白瑞士科学家发现两种大肠癌蛋白 （引发）美国科学家发现糖尿病相关蛋白质（引发）美国科学家发现糖尿病相关蛋白质（引发）日本发现蛋白质相互作用导致疑难病症日本发现蛋白

4、质相互作用导致疑难病症 日发现感光蛋白质日发现感光蛋白质 植物在光弱处能生存植物在光弱处能生存科学家首次完整测出古动物化石蛋白质科学家首次完整测出古动物化石蛋白质 三、三、蛋白质的元素组成蛋白质的元素组成 蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为： 碳 50 氢 7 氧 23 氮 16% 硫 03 其他 微 量 蛋白质含量的测定：凯氏定氮法蛋白质含量的测定：凯氏定氮法 (测定氮的经典方法) 优点：对原料无选择性，仪器简单，方法也简单 缺点：易将无机氮(如核酸中的氮)，都归入蛋白

5、质中, 不精确。 一般来说，蛋白质含氮量平均在16%，取其倒数100/16=6.25，即为蛋白质换算系数，其含义是样品中每存在1g元素氮，就说明含有6.25g 蛋白质。 蛋白质含量=氮的量6.25三、蛋白质的元素组成三、蛋白质的元素组成 1、按组成 单纯蛋白质：仅由氨基酸组成，水解为 -氨基酸，如球蛋白。 结合蛋白质=单纯蛋白质+辅基（非蛋白质部分称为辅基或配体）。2、根据物理特性与功能 纤维蛋白：一般不溶于水，线性结构，分子具有韧性，如-角蛋白。 球蛋白：大多是水溶性的，多肽链紧密折叠，形状近似球形或椭球形。 细胞中大多数可溶性蛋白，如胞质酶类。四四、蛋白质的分类蛋白质的分类五、蛋白质中的氨

6、基酸是通过肽键连接的n肽键（酰胺键）n氨基酸残基肽键形成动画六、蛋白质的结构（构象和构型?）七、蛋白质的水解n常用常用6 6mol/L的盐酸或的盐酸或4 4mol/L的硫酸在的硫酸在105-105-110110条件下进行水解，反应时间约条件下进行水解，反应时间约2020小小时。时。n优点：不容易引起水解产物的消旋化；优点：不容易引起水解产物的消旋化； 缺点：缺点：色氨酸色氨酸被沸酸完全破坏。被沸酸完全破坏。n含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解；小部分被分解；天冬酰胺和谷氨酰胺天冬酰胺和谷氨酰胺侧链侧链的酰胺基被水解成了羧基。的酰胺基被水解成了羧

7、基。n一般用一般用5 5 mol/L氢氧化钠煮沸氢氧化钠煮沸10-2010-20小时。小时。n由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏，产率不高。度的破坏，产率不高。n优点：优点：色氨酸色氨酸在水解中不被破坏。在水解中不被破坏。n缺点：部分缺点：部分水解产物发生消旋化水解产物发生消旋化。n蛋白水解酶（蛋白水解酶（proteolytic enzyme）或称蛋白）或称蛋白酶（酶（proteinase）。）。n优点：不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。优点：不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。n缺点：产物为较小的缺点：产物为较小的肽肽段，水解不彻底。段，水解不彻底

8、。 第二节第二节 氨基酸氨基酸 氨基酸是蛋白质水解的最终产物，是组成蛋白质的基本单位。从蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种，除脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸在结构上具有共同特点。 一、氨基酸的结构一、氨基酸的结构(Pro(Pro除外）除外）-氨基酸基本结构通式-碳原子氨基酸的氨基酸的旋光性及立体异构体A、氨基酸都具有旋光性（Gly)。B、每一种氨基酸都具有D-型 和L-型两种立体异构体。 镜面二、氨基酸的分类（按侧链基团）二、氨基酸的分类（按侧链基团） （1）R为脂肪烃基的氨基酸（为脂肪烃基的氨基酸（5种）种）A、 R基均为中性烷基，R基对分子酸碱性影响很小，它们几乎有相同的等电点（6

9、 .00.03）。B、 Gly是唯一不含手性碳原子的氨基酸，因此不具旋光性（在蛋白质构象中起着独一无二的作用）。 C、从Gly至Ile，R基团疏水性增加。D、Ile 具有2个手性碳原子。（2）R中含有羟基和硫的氨基酸（共中含有羟基和硫的氨基酸（共4种）种）nSer的-CH2 OH基（pKa=15）在生理条件下不解离， 但在大多数酶的活性中心都发现有Ser残基存在。n Ser和Thr的-OH往往与糖链相连，形成糖蛋白。 nCys的R中含巯基（-SH），具有两个重要性质：n（1）在较高pH值条件，巯基离解。n（2）两个Cys的巯基氧化生成二硫键，生成胱氨酸。n Cys与结石nMet在生物合成中是一

10、种重要的甲基供体。（3 3）R R中含有酰胺基团（中含有酰胺基团（2 2种）种） 酰胺基中氨基易发生氨基转移反应，与其他极性氨基酸侧链上的原子形成氢健。 （4）R中含有酸性基团（中含有酸性基团（2种）种）nAsp侧链羧基pKa为3.86，nGlu侧链羧基pKa为4.25 n它们是唯一在生理条件下带有负电荷的两个氨基酸 ，这两个这两个aa经常出现在蛋白经常出现在蛋白表面。表面。n（5）R中含碱性基团（中含碱性基团（3种）种）Lys侧链氨基的pKa为10.53，生理条件下，Lys侧链带有一个正电荷（NH3+），侧链的氨基反应活性增大。 Arg是碱性最强的氨基酸，侧链上的胍基是已知碱性最强的有机碱，

11、pKa值为12.48，生理条件下完全质子化。 His是pKa值最接近生理pH值的一种（游离氨基酸中为6.00，在多肽链中为7.35 ） ，是在生理pH条件下唯一具有缓冲能力的氨基酸。His在酶的酸碱催化机制中起重要作用。 （6）芳香族氨基酸）芳香族氨基酸在280nm处，Trp吸收最强，Tyr次之，Phe最弱（260nm）。（7）杂环族氨基酸）杂环族氨基酸（1种）种）nPro的-亚氨基是环的一部分，具有特殊的刚性结构。n一般出现在两段-螺旋之间的转角处，Pro残基所在位置引进转折的变化* * 根据氨基酸的极性进行分类（根据氨基酸的极性进行分类（P125P125） 非极性非极性 不带电荷不带电荷

12、极极 性性 带正电荷带正电荷 带负电荷带负电荷 非极性氨基酸（非极性氨基酸（ 9种） 在维持蛋白质的三维结构中起着重要作用（蛋白质的疏水核心）。（2）不带电荷的极性氨基酸（）不带电荷的极性氨基酸（ 6种） 侧链都能与水形成氢键，因此很容易溶于水。（3）带负电荷的极性）带负电荷的极性aa(酸性酸性aa)（4）带正电荷的）带正电荷的aa(碱性碱性aa)* 营养学角度分类n 必需aa ：人体不能合成，必须由食物供给 非必需 aa ：人体可以合成n Ile Met Val Leu Trp Phe Thr Lys n 一 家 写 两 三 本 书 来完全蛋白：含必需aa 齐全，数量充足，比例适当（奶、蛋、

13、鱼、肉等)不完全蛋白：不能提供人体必需的全部aa，如胶原蛋白。n婴儿期：Arg和His （Tip MTV Hall)巧记氨基酸单字母符号 苯丙氨酸：笨FoolFn赖氨酸：赖皮砍（Kan）他Kn精氨酸：精子人（Ren）Rn色氨酸：色狼WolfWn酪氨酸：奶酪黄色（Yellow）Yn天冬氨酸：天地（Di）Dn谷氨酸： 谷子里面有很多酶EnzymeEn天冬酰胺：AsnNn谷氨酰胺：Gln QnAsp/Asn： 两个A加一块= BnGlu/Gln：总是低人一头，排老末吧：Zn在少数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸，通常称为不常见蛋白质氨基酸。NHHOCOOH4-羟基脯氨酸H2NCH2CHCH2CH2C

14、HCOOHOHNH25-羟基赖氨酸NH2CH3NHCH2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基赖氨酸HOIICH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 非蛋白质氨基酸（非蛋白质氨基酸（P129P129） 不组成蛋白质，但有生理功能（1）L-型氨基酸的衍生物 L-瓜氨酸、L-鸟氨酸是尿素循环的中间物。（2）D-型氨基酸 D-Glu、D-Ala（肽聚糖中）、D-Phe（短杆菌肽S）。（3）-、-、-氨基酸 -Ala（泛素的前体）、-氨基丁酸（神经递质）。 各种氨基酸的大小GlyAlaValLeuIlePheTyrTrpCysMetStryer (1995) Biochemistry (4e) p

15、.20总结：二十种氨基酸的结构特点总结：二十种氨基酸的结构特点 支链氨基酸：支链氨基酸：缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸 含羟基的氨基酸含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸丝氨酸、苏氨酸 含硫的氨基酸：含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、半胱氨酸（含巯基）、 甲硫氨酸（含硫甲基）甲硫氨酸（含硫甲基） 含苯环的氨基酸：含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 含胍基的氨基酸：含胍基的氨基酸：精氨酸精氨酸 含咪唑基的氨基酸：含咪唑基的氨基酸：组氨酸组氨酸 亚氨基酸：亚氨基酸：脯氨酸脯氨酸 含酰胺的氨基酸：含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺天冬酰胺、谷氨酰胺 含吲哚基

16、的氨基酸：含吲哚基的氨基酸：色氨酸色氨酸 含含-氨基的氨基酸：氨基的氨基酸：赖氨酸赖氨酸n作业：n1、写出20种AA的结构式（侧链分类）。n2、写出Ile、Thr 的立体异构体。 三、氨基酸的重要理化性质氨基酸的重要理化性质1 1、一般物理性质、一般物理性质 氨基酸都是白色晶体，其形状因构型而异。 (1) (1) 溶解性溶解性：一般都能溶于水一般都能溶于水，除胱氨酸除胱氨酸（Cys-Cys)、Tyr, 并能溶解于稀酸或稀碱中并能溶解于稀酸或稀碱中，但不能溶解于有机溶剂。但不能溶解于有机溶剂。 (2) (2) 熔点熔点：氨基酸的熔点极高，一般在氨基酸的熔点极高，一般在200以上。以上。（3 3）

17、味感味感：其味随不同氨基酸有所不同，有的无味、有的甜、其味随不同氨基酸有所不同，有的无味、有的甜、 有的味苦，谷氨酸的单钠盐有鲜味，是味精的主要成分有的味苦，谷氨酸的单钠盐有鲜味，是味精的主要成分。（4 4）旋光性旋光性：除甘氨酸外，氨基酸都具有旋光性，能使偏振光除甘氨酸外，氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或向右旋转，左旋者通常用（平面向左或向右旋转，左旋者通常用（-）表示，右旋者用）表示，右旋者用（+）表示。）表示。 n(5) 、光吸收：、光吸收：构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和

18、色氨酸有吸收光的能力。2、酸碱性质（重点）酸碱性质（重点）（1）兼性离子 思考:普通有机化合物如二苯胺,熔点只有53,而aa的熔 点很高,大于200 ？AA使水的介电常数升高？ 解释： A 兼性离子是AA在晶体和水溶液中的存在形式，作用力是强大的异性电荷之间的静电吸引。 B 是强极性分子（不溶于非极性溶剂），介电常数高。 （2）AA的两性解离与酸碱滴定曲线* 氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子（既起酸的作用，也起碱的作用）。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。COOHCHH3N+R-pK1+H+

19、H+C O O-CHH3N+RH+H+p K2-C O O-CHH2NR PH 1 7 10净电荷 +1 0 -1 正离子 两性离子 负离子 等电点pI 氨基酸的解离方程式* AA完全质子化时，可以看作是多元酸，侧链不解离的中性AA可看作二元酸，酸性和碱性AA可看作三元酸。AA的解离方程从完全质子化开始写。氨基酸的酸碱滴定曲线氨基酸的酸碱滴定曲线HA A- + H+n Ka =H+A-/HApH=pKa +LogA-HA Henderson-Hasselbach 公式（P133）。 根据所给的根据所给的pKa数据，可计算任一数据，可计算任一pHpH条件下一种氨基酸各种离子的比例条件下一种氨基酸

20、各种离子的比例。（3）AA的等电点（Isoelectric point)n溶液的带电状况与溶液的溶液的带电状况与溶液的pH有关有关，改变改变pH值可值可以使以使AA带上正电荷或负电荷带上正电荷或负电荷，也可以兼性离子状也可以兼性离子状态存在态存在。n在水溶液中，氨基酸或蛋白质净电荷为在水溶液中，氨基酸或蛋白质净电荷为0 0时溶液时溶液的的pH值即为氨基酸或蛋白质的等电点，简称值即为氨基酸或蛋白质的等电点，简称pI。n在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两性离子状态。即氨基酸处于两性离子状态。nGly的等电点：)21(21log2l

21、oglog2121pKpKpIRRpKpKpIRRpKpIRRpKpI等电点为等电兼性离子两侧pKa的平均值2.2.2.33RRpKNHpKapIapKCOOHpKapIaNHpKCOOHpKapIa碱性酸性中性作业1、求Asp、Ala、Lys的等电点（写出解离方程式）。2、思考题：某AA溶于水(pH=7)后溶液的pH值为6，问该AA的等电点等于6，大于6，还是小于6？3、氨基酸的化学性质nAA的化学反应是指其分子中的a-氨基和a-羧基以及R基团所参与的那些反应（P135），着重介绍几个生物化学中广泛应用的鉴定和测量AA的重要反应。(1)(1) 与茚三酮的反应与茚三酮的反应（氨基与羧基氨基与羧

22、基共同参与的反应）共同参与的反应） 茚三酮在弱酸中与-氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨脱氨，脱羧脱羧反应，最后，茚三酮与反应产物氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质（max=570nm）。 Pro与茚三酮反应不释放氨气,直接生成黄色化合物(max=440nm)。(2)(2) 与与AAAA的氨基反应的氨基反应 （鉴定鉴定PrPr和多肽和多肽N-N-末端末端AAAA) )A 2，4一二硝基氟苯（DNFB或FDNB），也叫桑格试剂。n首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构。nDNP-氨基酸（溶于乙酸乙酯，可用乙酸乙酯抽提出来），黄色化合物，层析法鉴定，该反应可用来测定多肽的N末端氨基酸。 桑格寄

23、语中国青年n科学研究最大的乐趣之一就是你总是可以进行一些不同的尝试，它从来不会使人厌倦，有些人在遇到困难时就泄气，但我在遭受挫折时从来不着急，我会开始设计下一次实验，整个探索的过程都充满了欢乐。 B 丹磺酰氯（DNS-Cl，5二甲基氨基萘-1-磺酰氯）n与AA反应生成荧光性质强和稳定的丹磺酰衍生物DNS-AA，检测灵敏度高检测灵敏度高。C 苯异硫氰酸酯（PITC)，Edman 降解苯异硫氰酸酯（PITC)，Edman降解n此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。n肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽。n环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-

24、氨基酸和少一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸。n分离PTH-氨基酸。n层析法鉴定（AA自动分析仪）。 （3）a-羧基的反应A 与醇作用生成酯与醇作用生成酯 (P138) ) 保护AA的a-羧基，这时氨基的化学反应性能 得到加强或说氨基被活化。B B 被还原为a-氨基醇（硼氢化锂） 鉴定C-末端AA残基的一种方法。 （4）R基的反应A 巯基（-SH）与二硫键（-S-S-） 二硫键在稳定蛋白质的构象上起着很大的作用。二硫键在稳定蛋白质的构象上起着很大的作用。 氧化剂和还原剂都可以打开二硫键。氧化剂和还原剂都可以打开二硫键。 过甲酸：定量打开二硫键，生成磺基丙氨酸。 巯基乙醇、二

25、硫苏糖醇等。 第三节第三节 肽肽 肽键形成动画一、肽键及肽链一、肽键及肽链肽键肽键：肽键中的肽键中的C-NC-N键具有部分双键性质，不能自由旋转键具有部分双键性质，不能自由旋转。肽肽：AA以酰氨健（肽键）相互连接而成的化合物。以酰氨健（肽键）相互连接而成的化合物。由两个AA 组组成的肽称为二肽，由多个成的肽称为二肽，由多个AAAA组成的肽则称为多肽组成的肽则称为多肽。AA残基残基：在在AAAA缩合的反应中失去了一分子水，相连的缩合的反应中失去了一分子水，相连的AAAA成分。成分。命名命名：根据组成的根据组成的AAAA残基来确定，从残基来确定，从N-N-末端开始末端开始 Ala-Gly Leu-

26、Ala-Tyr-Gly-Ser 肽键的特性NCHC肽键虽是单键却有双键性质O肽键周围六个原子在同一平面上 前后两个氨基酸的-carbon 在对角 (trans)C肽键中的肽键中的C-NC-N键具有部分双键性质，不能自由旋转。键具有部分双键性质，不能自由旋转。在大多数情况下，以反式结构存在（除在大多数情况下，以反式结构存在（除X-ProX-Pro）。）。n多肽仍然有游离的多肽仍然有游离的-氨基和氨基和-羧基。羧基。 少少于于10AA成为成为寡肽寡肽，多于，多于10AA成为成为多肽多肽或聚肽。或聚肽。n蛋白质与多肽蛋白质与多肽并无严格的界限并无严格的界限，通常是，通常是将分子量在将分子量在6000

27、6000道尔顿以上的多肽称为道尔顿以上的多肽称为蛋白质。蛋白质。二、肽的理化性质1、酸碱性质 主要取决于游离末端a-氨基，游离末端a-COOH以及侧链R基上的可解离基团。2、化学性质（同AA）：肽的-羧基，-氨基和侧链R基上的活性基团都能发生与游离氨基酸相似的反应。 双缩脲反应：是肽和蛋白质特有的反应，游离氨基酸无此反应。凡具有肽键结构的化合物在碱性溶液中能与硫酸铜反应而生成紫红色或蓝紫色复合物的反应。可用于定量分析。三、天然存在的活性肽n在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。n但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽。n如

28、：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。脑啡与其受体結合后可以产生镇痛效果麻啡可以模拟脑啡的作用因此有类似的效用牛頓雜誌 (1991) 第 164 期, p.48-49 谷胱甘肽（谷胱甘肽（GluCysCysGly）参与氧化还原过程，清除内源性过氧化物和自由基，维护蛋白质活性中心的巯基处于还原状态，对许多酶具有保护功能。 肽类激素（P167）C y sT y rI L eGl nA s nC y sP r oL e uGl yN H2SS牛催产素C y sT y rGl nA s nC y sP r oSSP h eA r gGl yN H2牛加压素 催产和促催产和促 排乳作

29、用排乳作用。升高血压，升高血压，减少排尿减少排尿。短杆菌肽（抗生素）短杆菌肽（抗生素） 由短杆菌产生的10肽环（环肽）。抗革兰氏阳性细菌，临床用于治疗化浓性病症。 n L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Valn n L-Orn L-Ornn n L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leun n 短杆菌肽短杆菌肽S(S(环十肽环十肽) ) 由细菌分泌的多肽，有时也都含有由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-D-氨基酸和一些不常见氨基酸和一些不常见氨基酸，如鸟氨酸氨基酸，如鸟氨酸（Ornithine, , 缩写为缩写为 Orn）。 第四节 氨基酸与蛋白质 的分离分析 讲授提纲n一、AA的分析

30、分离。n二、蛋白质的分析分离。一、AA的分析分离 为了测定蛋白质的为了测定蛋白质的AA组成或从蛋白水解液中制组成或从蛋白水解液中制备备AA，需要对，需要对AA混合物进行分析分离混合物进行分析分离。1、层析层析（Chromatography)也称为色谱，其基本原理是分析样品作为流动相流过固相时，样品中的各个成分与固相进行不同程度的相互作用，使得样品中的各个成分在固相中的迁移率产生差别，从而达到分离样品的目的。2、层析的种类：根据固相与样品中各个成分之间的相互作用的种类不同，可分为离子交换层析，分子筛层析，纸层析，薄层层析等。 3、离子交换层析可将各种AA（Pr）分开n 是一种用离子交换树脂作支持

31、剂的层析方法。 阳离子交换树脂：解离出阳离子在酸性环境中分离AA。 阴离子交换树脂：解离出阴离子在碱性环境中分离AA。* AA与树脂结合的牢固程度主要取决于它们之间的静电吸引以 及AA侧链与树脂之间的疏水相互作用。磺酸型阳离子交换树脂（P152）纸层析（纸层析（ P151P151）n固定相：滤纸纤维素上的吸附水n流动相：丁醇、醋酸、水n基本步骤：点样、展层、显色、定性（定量）n在流动相中分配系数越大，移动越快。二、蛋白质的分析分离 研究蛋白的分子结构、组成和某些研究蛋白的分子结构、组成和某些物理化学性质，需要纯的、均一的甚至物理化学性质，需要纯的、均一的甚至是结晶的蛋白质。分离和纯化蛋白质的是

32、结晶的蛋白质。分离和纯化蛋白质的各种方法主要是利用蛋白质之间各种特各种方法主要是利用蛋白质之间各种特性的差异，例如大小、形状、酸碱性质、性的差异，例如大小、形状、酸碱性质、溶解度和对配体分子的特异亲和力溶解度和对配体分子的特异亲和力。1、蛋白质的主要性质（P299） 蛋白质的两性性质和等电点（等电点沉淀）。 蛋白质分子直径在1-100nm之间，在水溶液中具有胶体溶液的通性（布朗运动，丁达尔现象，不能通过半透膜）。相对稳定：A 蛋白质表面极性基团形成的水化层。B 非等电状态时，同种电荷的互相排斥。C 质点大小在1-100nm，可以进行布郎运动。 蛋白质的沉淀（稳定性破坏）P300A 盐析法: 大量的中性盐（NH4）2SO4、Na2SO4、Na