SFRP过表达对结肠癌细胞株HCT基因表达谱的影响实用教案

1、研研 究究 背背 景景第1页/共20页第一页，共21页。研究(ynji)背景CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179 结直肠癌的发病率第2页/共20页第二页，共21页。研究(ynji)背景Wnt信号(xnho)通路 第3页/共20页第三页，共21页。分泌(fnm)型卷曲相关蛋白SFRP 一组分泌型糖蛋白家族 SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达 定位于(wiy)染色体8p 1211.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外）研究(ynji)背景第4页/共20页第四页，共21页。分泌型卷曲(jun q)相关蛋白

2、SFRP通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号 研究(ynji)背景第5页/共20页第五页，共21页。研研 究究 目目 的的检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化(binhu)，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。 第6页/共20页第六页，共21页。技术(jsh)路线pcDNATM重组(zhn z)质粒基因芯片(j yn xn pin)检测（Pathway分析）双酶切鉴定WB鉴定SFRP4表达转染HCT116后筛选稳定表达株第7页/共20页第七页，共21页。结果(ji gu)pcDNATM质粒的构建(u

3、 jin)及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果第8页/共20页第八页，共21页。载体大小(dxio)为5500bp，SFRP4基因片段大小(dxio)为1056bp EcoRI和HindIII双酶切重组(zhn z)质粒后凝胶电泳图 第9页/共20页第九页，共21页。Western Blot 检测(jin c)pcDNATM质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为空载体(zit)，1和2道为 第10页/共20页第十页，共21页。pcDNATM质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析(fnx)RT-PCR验证部分基因芯片的结果第11页/共20

4、页第十一页，共21页。GenBank ID Gene nameCommentsInduction-fold NM_001040056MAPK3丝裂素活化蛋白激酶34.3NM_001006617MAPKAP1丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白15.0NM_002756MAP2K3MAPKK32.3NM_007181MAP4K1MAPKKKK12.8NM_021970MAP2K1IP1MAPKK1相关蛋白12.3NM_021284MEK蛋氨酸脑啡肽3.0上调的MAPK家族(jiz)基因 第12页/共20页第十二页，共21页。下调(xi dio)的TNF家族基因GenBank ID Gene nameCom

5、mentsInduction-foldNM_006291TNFAIP2肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白20.25NM_006290TNFAIP3肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白30.38NM_014350TNFAIP8肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白80.25NM_003844TNFRSF10A肿瘤坏死因子受体超家族10A0.44NM_003840TNFRSF10D肿瘤坏死因子受体超家族10D0.5第13页/共20页第十三页，共21页。凋亡相关(xinggun)基因的改变GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_000875IGF1R胰岛素

6、样生长因子受体4.9NM_000043FASTNF受体超家族成员62.6NM_006538BCL2L11Bcl2-L110.13第14页/共20页第十四页，共21页。pcDNATM质粒的构建(u jin)及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果第15页/共20页第十五页，共21页。1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。-actin作为(zuwi)对照。 RT-PCR验证基因芯片(j yn xn pin)结果第16页/共20页第十六页，共21页。讨论(toln) 我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p3

7、8MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤(zhngli)细胞的作用机制。第17页/共20页第十七页，共21页。讨论(toln) MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导(yudo)凋亡，有较强抗肿瘤的作用 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。 第18页/共20页第十八页，共21页。谢谢谢谢(xi xie)！第19页/共20页第十九页，共21页。感谢您的观看(gunkn)！第20页/共20页第二十页，共21页。NoImage内容(nirng)总结研 究 背 景。研 究 背 景。CA Cancer J Clin. 2008。包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz