(完整版)第十四章特异性抗体的制备技术

1、第十四章特异性抗体的制备技术Chapter 14Preparati on of Specific An tibody第一部分教学内容和要求一、目的要求掌握：特异性抗体的类型、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理；熟悉：常用颗粒性和蛋白质抗原制备的方法、多克隆抗体制备的的影响因素，常用佐剂种类；了解：抗血清的鉴定，基因工程抗体的类型。、教学内容常见免疫原的种类和制备及佐剂。免疫血清的制备，抗血清的鉴定与保存。 单克隆抗体制备技术。基因工程抗体技术。第二部分测试题D.卡介苗+氢氧化铝+羊毛脂E.卡介苗+液体石蜡+羊毛脂12. 要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到A.10 个

2、以上B.15 个以上 C.20 个以上D.50 个以上 E.100 个以上1.2.3.4.一、选择题（一）单项选择题（A 型题）1.配制绵羊红细胞免疫原一般细胞浓度为A.102/mlB.104/mlC.105/ml2.细菌鞭毛免疫原常规的制备方法A . 0.5%甲醛处理B . 100C加温 2h 处理氯肪处理3. 细菌的菌体免疫原常规的制备方法A. 75%乙醇处理B. 100C加温 2h 处理E.2%氯肪处理D.106/mlE.108/mlC. 1%氯化钙处理D.C. 0.5%甲醛处理4.要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法A.盐析法B.凝胶过滤法C. 离子交换层析法D

3、.免疫亲和层析法E.免疫电泳法5.制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体A.免疫球蛋白B.人甲状腺球蛋白C .人血清白蛋白D.牛血清白蛋白E.葡萄球菌 A 蛋白6.蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫A . 710 天 B. 1020 天 C. 2030 天 D. 3060 天7.鉴定抗体的效价，最好采用下列哪一种方法A.间接凝集试验B.单向免疫扩散法D.免疫亲和层析法E.聚丙烯酰胺凝胶电泳法8.纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体A.盐析法B.凝胶过滤法D.免疫亲和层析法E.免疫电泳法9.根据抗原分子所带电荷不同进行分离纯化的方法称为A.盐析法B.凝胶过滤法

4、D.免疫亲和层析法E.免疫电泳法10. 单克隆抗体目前效果较好的纯化方法Ao亲和层析法Bo凝胶过滤法11.完全佐剂的组成C 离子交换层析法E.三个月C.双向免疫扩C.离子交换层析法C.离子交换层75%乙醇处理 E.2%D。超速离心法D.1%氯化钙处理E盐析法液体石蜡+卡介苗+氢氧化铝13.颗粒性抗原免疫接种方法一般采用静脉注射A .淋巴结注射B .14。免疫小鼠采血通常采用A.心脏采血或断尾法D.摘除眼球或断尾法C.皮内注射D.皮下注射E.肌肉内注射B.颈动脉放血或断尾法E.耳静脉采血或摘除眼球.颈静脉或摘除眼球采血15 .较长时间（45 年）保存抗体，通常采用A . 4C保存 B . -10

5、C保存C . -20C保存.-30 C 保存E .真空干燥保存16 在 HAT 选择培养基中可长期存活者是A 细胞多聚体C .融合的瘤细胞与瘤细胞E.未融合的脾细胞17。单克隆抗体目前效果较好的纯化方法A。 亲和层析法B。 凝胶过滤法B 融合的脾细胞与瘤细胞D.未融合的瘤细胞C 离子交换层析法超速离心法E。 盐析法（二）多项选择题（ X 型题）1.从组织细胞中提纯某可溶性抗原，一般需经过下列哪些步骤A. 破碎细胞B. 选择性沉淀D. 与载体偶联E. 纯度鉴定2.可用于破碎组织细胞制备可溶性抗原的方法有A. 超声破碎法B. 冻融法D.酶处理法E.表面活性剂处理法3.提取蛋白质免疫原所用的沉淀法包

6、括A. 盐析法B.D. 核酸沉淀法E.4.提取蛋白质免疫原的技术有A. 选择性沉淀D.离子交换层析5.免疫血清制备的过程A. 选择免疫动物E. 抗血清的鉴定6.单克隆抗体纯化的方法A。亲和层析法B .凝胶过滤法7单克隆抗体制备的流程A.抗原的免疫和细胞融合BD.单克隆抗体的批量生产EC. 亲和层析C. 超速离心法高分子聚合物沉淀法醋酸沉淀法C.有机溶剂沉淀法B.E.超速离心亲和层析免疫方法C.凝胶层析C . 动物采血. 离子交换层析法 D. 抗体初筛与克隆化 C. 单克隆抗体的纯化与鉴定8用于抗血清的免疫球蛋白片段的主要制备方法A.分离非共价键法B .分离共价键法解法9目前认为佐剂增强免疫应答

7、的机理A. 增加抗原的表面积和改变抗原构型C. 增强巨噬细胞的吞噬作用D.活 B 细胞产生抗体溴化氰裂解法B. 佐剂与抗原结后直接激活免疫血清的纯化超速离心法 E . 盐析法杂交瘤细胞的冻存与复苏D .酶裂解法乙醇裂佐剂与抗原结合改变抗原的物理性状NK 细胞发挥效应E.直接激2 抗血清鉴定的主要内容包括、和等四个方面。3 制备特异性免疫血清时，常用和两种方法去除杂抗体。4 HAT 培养基中三种关键成分是、和。5。 单克隆抗体的批量生产方法主要有两种和。二、填空题1 .根据抗体制备的技术方法不同进行区分，人工制备的抗体可分为_ 、_ 和_ 三大类型。三、名词解释1单克隆抗体 (monoclona

8、l antibody ， McAb)2.佐剂(adjuvant)3基因工程抗体 (genetic engineering antibody)4。嵌合抗体( chimeric antibody )5。改形抗体( reshaped antibody ， RAb)6。双特异性抗体( bispecific antibody ， BsAb )四、问答题1简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。2 试述免疫血清应如何进行纯化。3叙述杂交瘤技术的基本原理第三部分 参考答案与题解、选择题（一）单项选择题（A 型题）411.E 12.A.C5. D 6. B13。 B 14. D157 . C8 。 D. E16.

9、B1.D2.A9. C103.B.A（二）多项选择题（X 型题）1 . ABCE 2. ABDE 3.ABCD4.ABCDE5. ABCDE6. ABCE 7. ABCDE 8. ABCD9.ABC二、填空题5. 多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体2. 抗体效价、抗体特异性、抗体纯度、抗体亲和力3. 亲和层析法、吸附法4. 次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶5.小鼠体内诱生法、体外增殖培养法三、名词解释1单克隆抗体：是指仅识别单一抗原表位的B 细胞杂交瘤产生的同源抗体，具有特异性强、效价高、生物活性单一、理化性状高度均一等特点。2佐剂：是指先于抗原或与抗原一起注入机体， 能够增强机体对该抗原的免疫

10、应答或改变免疫应答类型的 物质。3 基因工程抗体：是指应用 DNA 重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配， 经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体，主要包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融 合蛋白等类型。4嵌合抗体：又称人 -鼠嵌合抗体，是从杂交瘤细胞中分离出鼠源单抗功能性V 区基因，经基因重组与人抗体 C 区基因连接成嵌合基因后， 插入适当的表达载体中，再共同转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体分子。 嵌合抗体保留了单抗对抗原的特异亲和性，又含有人抗体C 区的成分及其功能。5.改形抗体：是应用基因工程技术在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗C

11、DR 以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。6.双特异性抗体（又称双功能抗体） ：它不同于天然抗体，其两个抗原结合部位具有不同的特异性，可以 同时与两种不同特异性的抗原发生结合。四、问答题1.单克隆抗体是应用 B 细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制 备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。2.免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG 并去除无关的杂抗体。提纯 IgG 类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG 时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白 A 交联 Sepharose 4B 制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价 特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂， 以吸附免疫血