乙肝丙肝核酸检测的新平台临床

1、会计学1乙肝丙肝核酸检测的新平台临床乙肝丙肝核酸检测的新平台临床第1页/共38页自动化程度 1992 1996 1998 2001 2003 2006 MWPCOBASAMPLICOR COBAS AMPLIPREP COBASAMPLICORMONITOR罗氏分子诊断标准化标准化自动化自动化重复性重复性COBAS TAQMAN 48COBAS TAQMAN 96一直以来，罗氏分子诊断对临床一直以来，罗氏分子诊断对临床核酸检测市场提供完善可靠和创核酸检测市场提供完善可靠和创新性的产品及解决方案新性的产品及解决方案第2页/共38页问题的根源在哪里？问题的根源在哪里？第3页/共38页第4页/共38

2、页第5页/共38页HBV DNA监测的临床应用HBV治疗路线图 Keeffe E. Clin Gastro Hepatology 2007;5:890-897. 侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治疗疗方案方案优优化，中国肝化，中国肝脏脏病病杂杂志志第6页/共38页第7页/共38页第8页/共38页第9页/共38页治疗应答名称治疗应答名称描述描述快速病毒学应答（快速病毒学应答（RVR）4周时未检测到HCV RNA早期病毒学应答（早期病毒学应答（EVR）- 完全早期病毒学应答完全早期病毒学应答（cEVR）未RVR，但12周时未检测到HCV RNA- 部分早期病毒学应答部分早

3、期病毒学应答（pEVR）未RVR，12周时HCV RNA拷贝数下降2log10，但仍检测到HCV RNA没有应答没有应答12周时HCV RNA拷贝数下降2log10治疗结束（治疗结束（EOT）治疗结束未检测未检测到HCV RNA持续病毒学应答（持续病毒学应答（SVR）治疗结束后24周，未检测到HCV RNA反弹反弹治疗期间曾有HCV RNA低于检出限，但尚未停药即出现HCV RNA重新升高复发复发治疗期间HCV RNA低于检出限，但治疗结束（停药）后HCV RNA重新升高第10页/共38页慢性HCV治疗方案用药用药12周早期病毒学反应周早期病毒学反应HCV RNA下降下降2log继续治疗至继续

4、治疗至48周周继续治疗至继续治疗至24周周考虑停药考虑停药第11页/共38页第12页/共38页第13页/共38页全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统真正实现真正实现 “样品进，结果出样品进，结果出” 全球安装超过全球安装超过 2,000台，国内安装超过台，国内安装超过 40台台COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 系统系统COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan48系统COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan

5、96系统（带连接系统）COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 96系统（无连接系统）第14页/共38页COBAS AmpliPrepCOBAS AmpliPrep仪器简介仪器简介全自动系统，自动进行核酸提取纯化和PCR反应体系配制 基于MGPMGP磁珠磁珠分离技术，确保高质量的核酸提取纯化最多72个样品可以同时上机，运行中可连续装载上架，提高工作效率 包括耗材、样品、试剂均可以连续上样第15页/共38页DNA或者RNA1.裂解、稳定和去蛋白2.核酸捕获病毒或细胞3.冲洗4.洗脱37C孵育室温80C孵育第16页/共38页CAPCAP机械臂介绍机械臂介绍样本管/反应管结构第1

6、7页/共38页COBASCOBAS TaqMan/COBAS TaqMan 48TaqMan/COBAS TaqMan 48分析仪简介分析仪简介检测通量可达4*24测试独立的24孔热循环仪 TaqMan 48有2个模块，TaqMan 96有4个模块 最多可同时进行4个不同的分析检测 操作简单，核酸扩增和检测全部自动完成实时定量PCR检测技术，卓越的检测性能，灵敏度高和特异性好，动态范围宽第18页/共38页HBV-DNA定量测试用于药品FDA注册试验通用名商品名 FDA批准日期关键的HBV-DNA测试Interferon alfa-2b-2b 干扰素 INTRON A1991N/ALamivud

7、ine拉米夫定EPIVIR-HBV1998杂交研究解决方案 1Adefovir dipivoxil阿德福韦酯 HEPSERA2002Amplicor Monitor 2Entecavir恩替卡韦BARACLUDE2005Cobas Amplicor 3Peginterferon alfa-2a聚乙二醇干扰素-2aPEGASYS2005Cobas Amplicor 4Telbivudine替比夫定TYZEKA2006Cobas Amplicor 5Tenofovir替诺福韦VIREAD (HIV)Phase 3Cobas TaqMan 6 (Lamivudine) package insert

8、GlaxoSmithKline, Research Triangle park, NC 3. (Adefovir dipivoxil) package insert Gilead Sciences. Foster City, CA Pegasys (Peginterferon alfa-2a) package insert. Hoffmann-La Roche Inc. Nutley, NJ 5. Abstract 63, Dec 9-13 2007, Lahaina, HI第19页/共38页第20页/共38页国产国产HBVHBV试剂试剂CAP/CTM HBVCAP/CTM HBV灵敏度灵敏度

9、 (LOD)(LOD)500 IU/mL？12 IU/mL12 IU/mL检测范围检测范围1045107 IU/mL54 54 - 1.1- 1.110108 8 IU/mL IU/mL定量方法定量方法外标法定量内标法定量内标法定量其它其它对部分发生HBV病毒突变的病人无法准确检测涵盖亚型: A-G加强加强pre-corepre-core突变检测突变检测注：注：国产试剂国产试剂1 IU/mL= 1 copy/mL第21页/共38页国产国产HCVHCV试剂试剂CAP/CTM HCVCAP/CTM HCV灵敏度灵敏度 (LOD)(LOD)500 IU/mL？15 IU/mL15 IU/mL检测范围

10、检测范围1045107 IU/mL43 43 6.9 6.910107 7 IU/mL IU/mL定量方法定量方法外标法定量内标法定量内标法定量其它其它未知1-6 型 (能区分 0.5 log浓度变化)第22页/共38页第23页/共38页定量原理内标定量Internal Quantitation Standard(CAP/CTM)内标是已知拷贝数的人工构建核酸，加入每一反应管，与靶核酸竞争扩增，管内定量可提示反应是否存在反应抑制，避免假阴性结果充分考虑管间反应效率的差异，得到可靠精确的结果 第24页/共38页COBAS AmpliPrep/COBAS TaqManCOBAS AmpliPrep

11、/COBAS TaqMan系统系统封闭样品管输入，封闭封闭样品管输入，封闭PCRPCR管输出管输出 标准化，标准化，重复性重复性纯化好纯化好的核酸的核酸主反应液主反应液PCRPCR反应体系的配制反应体系的配制试剂、样品和耗材的装载上机样品处理单元K-枪头K-管样品试剂第25页/共38页第26页/共38页1. 原料严格把关3. GMP生产2. 原料质检4. GMP生产6. 成品质检5. 试剂盒成品7. 资料入档第27页/共38页COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan全自动荧光定量分子诊断系统的应用 抗病毒治疗评估和监测（HBV/HCV），为临床医生和病人提高更准确的结果，指导

12、用药。可针对疑难病例、低病毒载量、长期用药或高端病人 肝移植的术前术后监控 全国药物、诊断试剂临床评估实验基地 CAP室间质评时有与国际接轨的平台，评价更科学 基础研究的工具，文章可信度大大增加第28页/共38页省份省份用户用户主要检测项目主要检测项目仪器类型仪器类型北京北京大学人民医院肝炎所（魏来）HBV/HCVCAP/CTM 48北京北京大学基础医学院（庄辉）HBV/HCVCAP/CTM 48北京北京友谊医院（贾继东）HBV/HCVCAP/CTM 48浙江浙江大学附属第一医院（李兰娟）HBV/HCVCAP/CTM 48广东南方医院（侯金林）HBV/HCVCAP/CTM 96北京北京大学第一

13、医院HBV/HCVCAP/CTM 48北京北京协和医院HBV/HCV/HIVCAP/CTM 48上海上海瑞金医院（张欣欣）HBV/HCVCAP/CTM 48四川华西医科大学附属华西医院（唐红）HBV/HCVCAP/CTM 96湖北武汉同济医院HBV/HCVCAP/CTM 48广东广州第八人民医院HBV/HCV/HIVCAP/CTM 48上海上海公共卫生中心HBV/HCV/HIVCAP/CTM 48重庆西南医院(毛青) (装机中)HBV/HCVCAP/CTM 48重庆重医大附二院(任红，张大志) (装机中) HBV/HCVCAP/CTM 48国内用户现已超过40家第29页/共38页血清学指标特征

14、血清学指标特征构成比（构成比（CAP/CTM HBV阳性阳性/国产试剂国产试剂HBV阴性）阴性）HBsAg+, HBeAb+, HBcAb+ (小三阳)8/13HBsAg+, HBeAg+, HBcAb+ (大三阳)2/3HBsAg+, HBcAb+1/1HBsAg+, HBeAg+, HBcAb+, HBeAb+1/1HBsAb+, HBcAb+0/2HBsAb+, HBcAb+, HBeAb+0/1第30页/共38页第31页/共38页We Innovate Healthcare第32页/共38页自动化程度 1992 1996 1998 2001 2003 2006 MWPCOBASAMPL

15、ICOR COBAS AMPLIPREP COBASAMPLICORMONITOR罗氏分子诊断标准化标准化自动化自动化重复性重复性COBAS TAQMAN 48COBAS TAQMAN 96一直以来，罗氏分子诊断对临床一直以来，罗氏分子诊断对临床核酸检测市场提供完善可靠和创核酸检测市场提供完善可靠和创新性的产品及解决方案新性的产品及解决方案第33页/共38页HBV DNA监测的临床应用HBV治疗路线图 Keeffe E. Clin Gastro Hepatology 2007;5:890-897. 侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治疗疗方案方案优优化，中国肝化，中国肝

16、脏脏病病杂杂志志第34页/共38页第35页/共38页国产国产HBVHBV试剂试剂CAP/CTM HBVCAP/CTM HBV灵敏度灵敏度 (LOD)(LOD)500 IU/mL？12 IU/mL12 IU/mL检测范围检测范围1045107 IU/mL54 54 - 1.1- 1.110108 8 IU/mL IU/mL定量方法定量方法外标法定量内标法定量内标法定量其它其它对部分发生HBV病毒突变的病人无法准确检测涵盖亚型: A-G加强加强pre-corepre-core突变检测突变检测注：注：国产试剂国产试剂1 IU/mL= 1 copy/mL第36页/共38页国产国产HCVHCV试剂试剂C

17、AP/CTM HCVCAP/CTM HCV灵敏度灵敏度 (LOD)(LOD)500 IU/mL？15 IU/mL15 IU/mL检测范围检测范围1045107 IU/mL43 43 6.9 6.910107 7 IU/mL IU/mL定量方法定量方法外标法定量内标法定量内标法定量其它其它未知1-6 型 (能区分 0.5 log浓度变化)第37页/共38页省份省份用户用户主要检测项目主要检测项目仪器类型仪器类型北京北京大学人民医院肝炎所（魏来）HBV/HCVCAP/CTM 48北京北京大学基础医学院（庄辉）HBV/HCVCAP/CTM 48北京北京友谊医院（贾继东）HBV/HCVCAP/CTM 48浙江浙江大学附属第一医院（李兰娟）HBV/HCVCAP/CTM 48广东南方医院（侯金林）HBV/HCVCAP/CTM 96北京北京大学第一医院HBV/HCVCAP/CTM 48北