渝东北山区野葛中葛粉和总黄酮含量动态变化探究

1、渝东北山区野葛中葛粉和总黄酮含量动态变化探究摘要目的通过对渝东北山区野葛中葛粉和总黄酮含量测定，总结其成分在1年中随季节的变化规律，从而 确定每年最佳采收时间。方法2011年6月2012年5月 每月定期采集渝东北山区产野葛样本，切成23 mm薄片， 自然干燥。通过文献调研，方法稳定性考察确定采用组织捣 碎水沉淀法测定野葛葛粉含量；采用uv紫外分光光度法， 以葛根素为对照品，在波长250 nm处测定样品溶液吸收度, 计算出野葛总黄酮含量，从而得到渝东北山区产野葛在1年 里葛粉和总黄酮含量随季节的变化规律。结果经实验测 定，渝东北山区野葛葛粉和总黄酮含量全年变化趋势基本一 致，变化规律为葛粉含量在

2、8. 9%25. 3%之间，从11月次 年2月最高，3、8、9、10月其次，47月最低；总黄酮含 量在2. 13%11. 6%之间，11月次年3月高于9%, 810月约6%, 47月较低在2%左右。结论 渝东北山区野葛最 佳采集时间在11月次年3月。关键词野葛；葛粉；总黄酮；含量测定中图分类号r629 文献标识码a 文章编号1673-7210 (2014) 02 (c) -0087-03study on the regulation of starch and total flavone dynamic content in pueraria lobata (willd. ) ohwi fro

3、m northeast mountain wild of chongqingtan xiaoyanl li dabin2 lin zhongxiangl huang jing3 jia hani wang liqingl1.chongqing three gorges medical college , chongqing 404020, china ；2. wuxi county people，shosp it al, chongqing 405800 , china； 3. wes t china. school of pharmacy , sichuan university , sic

4、huan province, chengdu 610041, chinaabstract objective to provide scientific basis for determining the optimum harvest time, by assaying and summarying the content of starch and total flavone in pueraria lobata (willd. ) ohwi from northeast mountain wild of chongqing and the change regulation with t

5、he season in a year methods pueraria lobata samples were collected every month from june 2011 to may 2012 in northeast of chongqing area on schedule samples were sliced into 2-3 mm, and dried at room temperature according to literature, tissue smash and water sedime nt met hod was used to determine

6、the content of pueraria st arch the total concentration of f lav one in pueraria lobata samples could be evaluated by uv-visspectrum at 250 nm, using puerarin as controls, which can infer the change regulation of starch and flavone in pueraria lobata samples along with the alternating of seasons res

7、ults the experimental determination showed that the content of starch and flavone in pueraria lobata remained a constant trend throughout a year. generally , starch maintained between 8. 9%25 3% ,and kept most high from november tofebruary, then march, august, september and october. the lowest conte

8、nt was from april to july. flovone went similarity, which kept between 2.13%-11.6%. it went higher than 9% from november to march, remained 6% during august and october and lower than 2% from april to july. conclusion the best time for collecting pueraria lobato (willd. ) ohwi from northeast mountai

9、n wild of chongqing should be from november to march next year.key words pueraria lobata (willd)ohwi； starch； total flavone； determination野葛pueraria lobata (willd. ) ohwi为豆科葛属植物， 茎叶可作饲料，根和花可入药。野葛的干燥块根为常见中药, 具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解 酒毒的功能1。野葛根中富含的黄酮类成分具有多种药理作用2-5,而葛粉又是很好的保健食品，畅销国内外6-9 o野葛从根、藤到花、叶在工

10、业、农业、医药方面都有很高的 研究利用价值。渝东北山区野葛资源丰富10-11,但从未 被开发利用，因此本研究以渝东北山区的开县城口巫溪交界 地带产野葛为样本，采用组织捣碎水沉淀法和uv法测定一 年中每月采收野葛根中葛粉和总黄酮含量，对含量动态变化 进行分析，以期确定最佳采收时期，为该区野葛根的开发利 用提供科学依据。1材料与方法1.1材料mettler toledo pl1501-s电子秤（梅特勒-托利多中国 地区）、电热恒温鼓风干燥箱dhg-9140a型（上海一恒科技 有限公司）、高速中药粉碎机hx-500a型（浙江省永康市溪 岸五金药具厂）、低速自动离心机ld25-2. u-2800分光光

11、度 计（uv2300）、特殊减压抽滤装置（四川大学华西药学院天 然药物系自主设计）、水、95%乙醇（分析纯）、葛根素对照 品（批号：110753-200912,中国药品生物制品检定所）。试验样本采自重庆开县谭家乡。从2011年6月2012 年5月，每月9日（或前后2 0）选取生长年限一致，粗细 相近的野葛根采挖，然后洗净泥沙，切成23 mm薄片，自 然干燥。1. 2方法文献报道一般利用组织捣碎水沉淀法12或酶解-蔥酮比色法13测定葛根中葛粉含量，而且酶解-蔥酮比色法是 最常用的淀粉含量测定方法。但因本实验目的在于通过测定 野葛中葛粉含量，从而确定野葛的最佳采集时间，再用于提 取葛粉的工艺中，为

12、与提取工艺相结合，故选取组织捣碎水 沉淀法来测定葛粉含量。野葛中总黄酮的含量测定采用uv 分光光度法14-20 o2结果 2.1野葛葛粉含量测定将12份试验样本各称取1血，粉碎后过40目筛，将药 材用1 ： 8倍量冷水（w/v）浸泡1 h,然后物理搅拌，让葛 粉充分混入水液中，用纱布过滤，将滤渣加入7倍量水，搅 拌均匀后再过滤，滤渣再重复清洗1遍，合并3次的滤液胶 浆，再用细纱布过滤1遍，去除微粒杂质。将葛粉浆液离心 或放置沉降，待沉降完全（溶液变澄清）倒掉上清液，再加5倍量清水搅匀葛粉，再沉降，重复3次后得葛粉，将其恒温4（fc减压干燥葛粉。葛粉干燥后，用电子天平称重。根据试验结果表明，1年

13、12个月野葛葛粉含量从11月第2年2月最高，3、8-10月其次，47月最低，具体测 定结果见表lo2.2野葛总黄酮含量测定2. 2. 1标准曲线制备 准确称取葛根素对照品0. 0155g, 用70%乙醇溶解，于100 ml容量瓶中定容，得0. 155 mg/ml 浓度的葛根素对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液0. 0、 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 于 10 ml 容量瓶中，加 70%乙 醇定容，得系列对照品溶液。用1. 0 ml 70%乙醇溶液作空白 对照，在250 nm波长处测定吸收度。所得结果见表2和图1。根据标准曲线求回归方程为a=74. 288c+0. 0091,

14、r二 0. 9999 o2. 2.2供试样品总黄酮含量测定 将每个月野葛样本粉 碎成粉末，分别精密称取2 g置250 ml圆底烧瓶中，各加 70%乙醇100 ml,称量，恒温8(tc回流1.5 h,放冷，再称 量，并加70%乙醇补足减少重量，摇匀，滤过，用移液管精 确量取滤液1 ml于25 ml容量瓶，加70%乙醇稀释定容得待 测液，用1.0 ml 70%乙醇溶液作空白对照，在250 nm波长 处连续3次测定吸收度，结果取3次之平均值，通过标准回 归方程即可计算出待测液浓度，再乘以稀释倍数，然后换算 成总黄酮质量，最后用质量除以称取的粉末重量可得该月野 葛样本的总黄酮含量。具体含量见表3,根据

15、数据显示11月 第2年3月总黄酮含量高于9%, 810月稍高，约6%, 47 月含量较低，在2%左右。2.3全年野葛葛粉和总黄酮含量变化趋势根据"2.1”、“2.2”项下测定的一年中每月在渝东北 山区采集野葛中葛粉和总黄酮含量结果(即表1、表3中数 据）制定葛粉和总黄酮含量随时间变化的趋势曲线图，见图 2o由图2可见渝东北山区野葛的葛粉和总黄酮含量随季节 变化趋势基本一致，从10月起开始呈含量上升趋势，11月 份达第一峰值，12月份略有下降，次年1月份达第二峰值， 之后含量开始呈下降趋势，到次年4月份含量降到最低，4 10月一直处于含量低水平时期。总体显示在11月次年3 月期间葛粉和

16、总黄酮含量都相对较高。3讨论葛粉和总黄酮含量测定方法皆参考文献报道并结合实 际提取葛粉和总黄酮的工艺而确定，故未再做方法的稳定 性、重复性等考察。根据图2的渝东北山区野葛葛粉和总黄酮含量随季节变 化趋势曲线显示在11月次年3月期间葛粉和总黄酮含量 都相对较高。因此认为最佳采集时间为11月次年3月， 采集时间段较长，将有利于野葛的加工生产。根据研究测定结果发现渝东北山区一带所产野葛葛粉 含量变化在8. 9%25. 3%,总黄酮含量在2%12%,总的来 看，葛粉含量比粉葛类低，若利用其提取葛粉产率不及粉葛 21,但总黄酮含量较高，异黄酮类成分丰富，药用价值更 高。如果能对该区野葛的葛粉和总黄酮进行

17、连续提取综合利 用，定能提高其利用价值和经济效益。此部分研究不但确定了该区野葛采收时间段，更为后续关于综合连续提取野葛葛 務和总黄酮的工艺研究奠定了理论基础。参考文献1国家药典委员会中国药典s. 部北京：中国医 药科技出版社，2010： 312-313.2赵新芳，边文贵，张俊卿葛根素治疗心血管疾病 的药理和临床研究j陕西中医，2006, 27 (8)： 1018-1020.3吴慧轩葛根素注射液治疗高血压(肝阳上亢症) 临床研究j天津中医药，2004, 21 (2)： 15-17.4秦文，董兴兵，杨勤葛根素的临床应用新进展门中国药业，2004, 13 (7)： 75-76.5王林丽，向明凤.葛根

18、及其制剂的药理作用及临床 应用j中国药业,2004, 13 (8)： 78-79.6中国预防医学科学院营养与食品研究所.食物成分 表m北京:人民卫生出版社，1992： 45.7杜先锋葛根的开发研究和综合利用j.食品研究 与开发，1998, (1)： 49-50.8毛富春，赵伯善.野生葛藤的研究利用现状及其开 发前景j.西北林学院学报,1995, 10 (3)： 88-92.9邵兰兰，赵燕葛根异黄酮、淀粉的提取及葛产品 开发研究进展j食品工业科技，2012, 33 (6)： 452-455.10万县中草药编写组.万县中草药m.万县：四 川省万县地区卫生局，四川省万县地区科委，内部发行，1977： 928-92911 沈力三峡中草药资源m.北京：中国