分子技术在流感病毒检测中的应用探讨

1、    分子技术在流感病毒检测中的应用探讨    陈小青【摘  要】流行性感冒是一种由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，流感病毒具有流行与不断复制重组的能力，不但传染性极大，传播速度也非常快，使得流感成为整个世界公共卫生的重大威胁。近年来，全球范围内流感频频爆发，快速控制并治疗流感的需求，要求对每一种流感病毒都能够快速检测的出来，而具有检测速度快，检测灵活敏感，并且特异性高的分子检测技术对预防与控制流感的传播和实验室检测工作而言，异常重要。【关键词】分子技术;流感病毒;检测;r372      a

2、      1672-3783（2019）01-0294-02流行性感冒主要由流感病毒感染引起，具有高传染性，且可以通过空气、污染物与人际接触传染，传播速度极快。感染了流感病毒后，往往很快就出现发热、高烧、全身乏力、疼痛等症状，并且呼吸道会出现病征，尤其是老年、婴幼儿与存在心肺疾病的患者极易并发肺炎等重病，甚至导致死亡，具有巨大的破坏性。流感病毒由分节段的单负链rna组成基因组，根据其核蛋白（np）和膜蛋白（mp）的不同，可分为甲（a）、乙（b）、丙（c）三种类型，尤其是甲型流感病毒易发生抗原变异，传染性大，非常容易造成大规模流行性疾病1。甲型

3、流感病毒根据抗原的不同还分为9个na亚型与16个ha亚型，这两种亚型抗原又可以通过转换形成新的亚型，而亚型新病毒极可能出现并引发更大型的流行性流感。因此，能否快速、精准的检测出流感病毒对于治疗与控制流感病毒的传播与疫情十分重要。分子生物学的快速发展，使得分子技术的应用日益广泛，在流感病毒的检测中也发挥这非常重要的作用。1 聚合酶链反应聚合酶链反应（pcr）对流感病毒的检测主要是通过在非常短暂的时间里增加大量的特定dna片段来实现的分子生物学检测技术，聚合酶链反应在进行病毒检测时仅仅需要少量的样本就可以实现检测，且其重复性好，检测速度快、敏感高效，从收集样本到最终检测出结果最少需要2小时，最多需

4、要24小时即可。聚合酶链反应法包括普通rt-pcr法、多重rt-pcr法与实时荧光定量法，其中，普通rt-pcr法主要是对na基因片段与ha基因片段进行检测，目前对未知流感病毒的基因片段进行兼并引物来进行扩增，进而达到分型的目的。多重rt-pcr法则可以一次只对一种病毒进行检测，也可以同时对多种病毒进行检测，但需要应用多对引物组合进行分型检测。其同样具有高度的灵敏度与特异性，检测高效，同时检测多种病毒成本更低，更适用于临床检测应用中。实时荧光定量检测法指将荧光基因加入到聚合酶链反应体系中，通过荧光信号在检测过程中的实时积累来进行检测，并以此来展开定量分析。该方法不但具有普通聚合酶链反应方法的强

5、特异性、高度敏感、具有重复性等优点，同时由于荧光因子能够更直观的检测到，大幅度降低了检测到假阳性的可能性1。2 依赖核酸序列的扩增法（nasba）依赖核酸序列的扩增法的检测灵敏度与特异性都比聚合酶链反应检测的高，且其扩增的效率更高，操作也相对简单，然而，该法在检测前必须优化引物，且在病毒检测中还存在某些病毒出现假阳性或灵敏度不足的现象。它主要由一对引物进行引导，以及一种连续的均一的特异单链rna做恒温的扩增产生反应的过程。依赖核酸序列的扩增法应用广泛，多应用于禽流感病毒检测、呼吸道病毒检测中，目前，医学研究界已经对nasba检测技术进行改进，现在的nasba检测技术已经可以实现实时检测，能够定

6、量检测，使其检测的特异性与灵敏性大大提高，目前已广泛应用于a、b两型流感病毒、呼吸道病毒的检测，能够快速分离出乙型、h3n2、h1n1流感病毒。3 环介导等温扩增法（lamp）环介导等温扩增法（lamp）简单的说就是一种扩增核酸的方法，通过应用4种具有特异性的引物，联合dna聚合酶置换作用，在恒温状态下，对靶基因的多个区域进行核酸扩张。该法的可操作性强、简单，也不需要特定的试剂与仪器，lamp只有两种结果，一是扩增，二是不扩增，只需要查看反应物染色后的颜色以及试剂的浑浊程度就能够进行结果判定。目前，lamp技术已非常成熟，以及研发出了多种针对性强的检测技术，比如針对新甲型h1n1流感病毒检测的

7、技术、针对季节性流感病毒的检测技术以及针对h3n2病毒的检测技术等。4 基因芯片基因芯片（genechip）（又称dna芯片、生物芯片），其测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针2。通过探针与样品进行杂交，再通过对杂交信号进行检测来判断生物样品数量的多少。基因芯片检测的稳定性高，具有良好的重复性与并行性，检测速度快，效率高，唯一缺陷是其操作繁琐，尤其对检测设备等条件的要求很高，难以适用于一般实验室的病毒检测，但用于调查流行病学与开展医学科学研究却效果显著。近年来，分子生物学的研究取得了长足的进步，对流行感冒

8、病毒的检测技术也更加成熟与多样了。本文主要介绍了聚合酶链反应检测法、依赖核酸序列的扩增法、 环介导等温扩增法与基因芯片检测技术，此外还有纳米技术、核酸探针技术、基因测序技术、原位杂交技术、质谱技术等3。但目前我国在预防与监控流感病毒上，应用得最多的还是聚合酶链反应检测法，其他检测方法较少使用，但随着分子技术的研究更加深入，检测技术与条件的更加完善，我国也将加大其他检测技术在日常流感病毒的预防检测工作中的应用，同样，这些技术也将在流感病毒防控工作中发挥重要作用。参考文献1   刘凤.分子技术在流感病毒检测中的应用j.现代预防医学，2014，41（12）：2249-2251.2   李勃，孙菲，李文悌，王晓春.分子技术在