发酵法制备N乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用

1、百度文库 - 让每个人公平地提升自我海洋公益性行业科研专项经费项目子任务实施方案项目名称: 基于海洋微生物发酵的新产品开发技术争辩与应用子任务名称:发酵法制备n-乙酰氨基葡萄糖关键技术争辩与应用子任务编号:2-4项目担当单位:国家海洋局第三海洋争辩所项目子任务担当单位:浙江中医药高校国 家 海 洋 局23二一四年八月项目子任务信息表项目名称 基于海洋微生物发酵的新产品开发技术争辩与应用子任务名称发酵法制备n-乙酰氨基葡萄糖关键技术争辩与应用项目编号2子任务编号 2-4子单位名称浙江中医药高校任务通讯地址浙江省杭州市滨文路 548 号浙江中医药高校邮政编码310053承担单姓 名程汝滨处（室）药

2、学院职 务副争辩员位联系人联系电话5传 真6手 机信息电子信箱实施年限4 年财政拨款196 万元其他财政拨款单位自有货币资金其他资金万元万元万元项目起始时间项目完成时间项目子任务196 万元经费预算姓 名程汝滨诞生日期学 位博士 硕士 学士 其他性 别男子任务负责人职 称所在单位 身份证号码办公电话372328x5副争辩员专 业海洋药物浙江中医药高校手机号码参与人数 累计工作时间11 人。其中：高级 3 人，中级 2 人，初级人，其他 6 人；博士 6 人，硕士 5 人，学士 人，其他人。242 人月行业应用基础争辩行业重大公益性技术前期预研争辩类型行业有用技术争辩开发计量、检验检测技术争辩国

3、家标准和行业重要技术标准争辩创新类型自主创新集成创新引进消化吸取再创新预期成果与应用类型争辩内容形成专利形成国家标准和行业重要技术标准形成有用技术自主研发力量局部试点示范业务化运行较大范围推广应用争辩报告形成海洋开发与管理应用理论或公益技术论文论著建立稳定的 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关基因的异源表达和功能评价技术，从海洋生物中挖掘潜在的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；通过微生物遗传育种的方法，获得高产 n-乙酰氨基葡萄糖的（200 字以内）发酵生产菌株；在此基础上优化培育基组成、发酵温度和时间等条件，建立微生物发酵法生产 n-乙酰氨基葡萄糖的新工艺，在 100l 级的发酵罐中进行

4、中试争辩；以多种提取技术相结合，建立高效快速的 n-乙酰氨基葡萄糖的提取和纯化技术。1. 从海洋生物中克隆获得高效 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因2-3 个；2. 通过微生物遗传育种改良技术，获得n-乙酰氨基葡萄糖的高产菌株考核指标（200 字以内）4 株以上；3. 获得 100l 级 n-乙酰氨基葡萄糖发酵中试工艺技术，5d 培育获得 n- 乙酰氨基葡萄糖 30g/l 以上；4. 建立稳定高效的 n-乙酰氨基葡萄糖的分别提取和纯化技术，提取率达到 90以上；5. 获得纯度 90%以上的 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg；6. 申请创造专利 2 项。编写说 明1. 本实施方案由项目子任务担当

5、单位负责编写。2. 编写要求：（1） 总体目标、年度目标要完整、集中、明确、可考核，要充分考虑经济、技术等方面的可行性；（2） 争辩任务和内容重点突出，技术路线清楚，技术关键点与创新点明确；（3） 项目子任务的组织实施管理等符合项目的特点，配套条件要保障落实，措施具体；（4） 经费预算依据充分，符合规定。3报告涉及到外文缩写要注明全称。4方案文本接受 a4 幅面纸，小四号宋体字打印，标题用小四号黑体字打印，表格用五号宋体字打印，行距 25 磅，页码居中，按项目编号挨次附项目实施方案后合并装订，由项目担当单位和项目子任务担当单位盖章后报国家海洋局海洋科学技术司，同时报送电子版本。5、其他说明：（

6、1） 海洋公益性行业科研专项经费项目信息表“子任务担当单位信息联系人”指项目子任务担当单位科技处相关负责人。（2） 担当单位意见和项目子任务担当单位意见必需加盖法人单位公章，二级学院或重点试验室等盖章无效。（3） 子任务编号格式为“项目编号1”、“项目编号2”，依次顺延。项目子任务实施方案填报内容一、项目及项目子任务概述海洋公益性行业科研专项 “基于海洋生物发酵的新产品开发技术争辩与应用”面对海洋生物资源可持续利用产业进展需求，依托海洋生物发酵工程技术， 围绕海洋生物活性产物规模化制备关键技术，争辩开发新技术、新工艺和新制品， 提升我国海洋活性产物领域的技术创新力量和争辩水平，形成系列海洋活性

7、产物成套技术和产品。项目选择应用价值高、市场前景好的 s-腺苷甲硫氨酸、隐甲藻胞外免疫多糖、n-乙酰氨基葡萄糖、岩藻黄素、褐藻胶改性专用裂解酶和苹果酸脱氢酶等重要海洋功能产物，利用现有的种质遗传改良技术，对目标菌（藻） 株进行诱变育种和活性物质调控，从而有效提升海洋生物（微藻）活性产物的产量；建立活性产物生产菌（藻）株的种质改良、规模化发酵、分别提取和检测、活性把握、应用示范等共性关键技术研发链条；着力突破中试工艺技术瓶颈，实现从试验室研发到生产应用的连接，构建海洋生物（微藻）规模化发酵和分别提取的中试研发平台，实现目标产物高效、经济培育；建立目标产物分别提取和检测等关键技术，实现绿色清洁生产

8、；对开发的新产品进行功能、活性、质量和平安性评价，为其产业化生产奠定基础。形成市场前景宽敞、具有自主学问产权的成果，开发出多项产业化前景显著的高附加值产品。“发酵法制备 n-乙酰氨基葡萄糖关键技术争辩与应用”作为海洋公益性行业科研专项“基于海洋生物发酵的新产品开发技术争辩与应用”项目的子任务之一， 主要针对当前 n-乙酰氨基葡萄糖发酵生产过程中的共性问题，通过海洋生物中高效的氨基葡萄糖合成相关功能基因的挖掘技术、微生物遗传育种改良技术、发酵工艺的优化和把握和稳定快速的提取分别和纯化技术等多个环节的开发与应用，建立稳定的 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因的异源表达和活性评价体系，从海洋生物中挖

9、掘潜在的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；通过微生物遗传育种的方法，构建获得高产 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产菌株；在此基础上，通过葡萄糖流加和溶氧把握等技术，建立微生物发酵法生产氨基葡萄糖的新工艺，并在 100l 级的发酵罐中进行中试争辩；以分子蒸馏法、离子交换发和膜分别等技术有机结合，建立高效快速的氨基葡萄糖的提取和纯化技术；并最终获得 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg。，并申报创造专利 2 项。本子任务由浙江中医药高校牵头，国家海洋局第三海洋争辩所参与共同完成。子任务经费共 204 万元，投入工作量共 236 人月。二、必要性及需求分析1. 必要性n-乙酰氨基葡萄糖（glcna

10、c）在体内具有重要的生理作用，如参与肝肾解 毒，发挥抗炎、护肝的作用；作为抗菌消炎药物，治疗风湿性关节炎和胃溃疡等。目前主要的生产方法为甲壳素水解法。水解法消耗大量的酸碱，腐蚀设备，环境污染严峻，纯化工艺简单，产品有鱼腥味，存在过敏效应。相对于甲壳素水解法， 微生物发酵法生产不受资源限制，对环境污染小，产品无鱼腥味，不存在过敏效应。氨基葡萄糖作为一种市多年的骨保健产品，无疑会有良好的进展前景。glcnac 广泛存在于真菌细胞壁及虾蟹的外骨骼中，是甲壳素与壳聚糖的组成成分。在自然界中，细菌、酵母、真菌、植物及动物体内也广泛存在glcnac。glcnac 也是糖蛋白和蛋白聚糖的主要成分，在人与动物

11、的关节软骨组织中起着重要作用，并大量存在人类眼睛晶状体中。早在 20 个世纪 60 年月，glcnac 就已被大量用于骨关节炎的治疗。争辩表明，它能够有效作用于软骨组织治疗风湿性关节炎，其次对白血病癌细胞具有抑制作用，并有消炎护肝的功效。glcnac 在食品保健领域也有着广泛的应用，在一些欧美国家 glcnac 被视为自然无害的食品及保健品配料而得到大量推广，而目前国内相关产品较少。目前， 生产 glcnac 的方法主要有 3 种，即酸水解法、酶解法及微生物发酵法。前两种方法的生产原料基本上来源于虾蟹的外骨骼，即从虾蟹壳中提取甲壳素与壳聚糖，再经酸解或酶解获得 glcnac。高浓度的盐酸在肯定

12、的反应条件下能够将虾蟹壳中的甲壳素与壳聚糖降解为 glcnac，但由于浓盐酸的大量使用会带来严峻的环境问题，将逐步受到国家相关政策的限制；酶解法是利用壳聚糖酶对虾蟹壳进行降解，现在面临的最大问题是生产效率低下，表现为壳聚糖酶价格较高、转化时间较长及生产成本较高。且来源于虾蟹壳的 glcnac 在临床应用过程中会引起过敏体质患者的过敏反应。所以微生物发酵法生产 glcnac 得到了越来越多争辩者的关注。相较于酸水解法与酶解法，微生物发酵法生产 glcnac 具有以下优点：消 除了地域季节对原料来源的限制，产品无鱼腥味；生 产周期短，强度高；对环境污染较小；不产生过敏反应。目前， 国内外对微生物发

13、酵法生产 glcnac 的争辩相对较少，相关产业尚未形成工业化生产规模。本项目将通过海洋高效功能基因的挖掘、微生物遗传育种改良、发酵工艺优化和把握和提取分别和纯化技术的争辩，提高乙酰氨基葡萄糖的发酵产量，对乙酰氨基葡萄糖的发酵生产有肯定的指导和借鉴意义。2. 需求分析n-乙酰氨基葡萄糖存在于全部生物体中，在人体中是透亮质酸、硫酸软骨素及硫酸角质素等葡糖胺多糖的二糖单元前体。n-乙酰葡萄糖胺特异性地作用于关 节软骨，对于维持软骨的健康和正常的关节功能具有重要作用；n-乙酰葡萄糖胺可以增加皮肤中透亮质酸的含量；此外 n-乙酰葡萄糖胺还是合成 n-乙酰神经氨酸的前体物质。骨关节炎是目前格外普遍的一种

14、疾病，给人们健康生活质量带来了巨大危 害。n-乙酰氨基葡萄糖（ glcnac）具有人体关节软骨再生和润滑的作用， nih 项争辩发觉，glcnac 和软骨素复合物对于中度和重度的膝骨关节炎患者来说疗效显著。在欧洲和美国glcnac 被广泛用作减轻骨关节炎苦痛和残疾的药物。在美国，glcnac 及其复合物作为食品保健品拥有多达数十亿美元的市场；在欧洲， glcnac 作为处方药也具有同等大的规模。目前，glcnac 主要是以酸水解虾蟹类、贝壳类等外骨骼中几丁质的方法获得。传统方法一方面其严格的酸性环境并可能对葡萄糖环进行化学修饰，更为严峻的是贝壳类来源的 glcnac 可能会引起人们的过敏反应，

15、平安性值得考虑。另外，工业化大量生产还受到原材料等方面的限制。近几年，国内glcnac 消费需求量快速激增，建立一种低成本、平安、高效生产glcnac 的方法无疑具有宽敞的市场前景。与传统方法相比，微生物发酵生产glcnac 具有环境污染少、原料供应稳定和无致敏因素等诸多优势。目前 n-乙酰葡萄糖胺的化学法水解环境污染严峻，水解几丁质的酶合成量低，不利于工业化生产。微生物发酵因其发酵周期短、产量高引起了越来越多的关注。三、国内外技术现状、进展趋势n-乙酰氨基葡萄糖（glcnac）是一类重要的氨基单糖，氨基连接在葡萄糖环的 2 号位的 c 上，是黏多糖和几丁质的主要组成成分，广泛地分布于细菌、酵

16、母菌、丝状真菌、植物和动物体内。在人体内，氨基葡萄糖是糖胺聚糖的二糖单位前体，而这些糖胺聚糖是组成黏膜分泌物、结蹄组织、皮肤、肌腱、软骨和韧带等必不行少的成分。glcnac 在保健食品和医药领域具有广泛应用，如能特异性地作用于关节软骨，有效治疗风湿性关节炎；可抑制白血病细胞 k562 的生长；可参与肝肾解毒，发挥抗炎、护肝的作用等。在日本和美国，glcnac 作为食品配料得到广泛应用。但目前国内上市的 glcnac 产品还比较少，因此相关产品的开发空间和潜力巨大。相对于水解法和生物转化法，微生物发酵法具有以巨大的优势。在微生物体内 glcnac 合成代谢途径现在争辩已经较为明确。首先以葡萄糖作

17、为地物，进入细胞内的葡萄糖在磷酸葡萄糖异构酶（pgi）的催化下转化成 6-磷酸葡萄糖，后者在氨基葡萄糖合成酶（glms）催化下生成氨基葡萄糖（glcn），氨基葡萄糖乙酰化酶（gna1）催化 glcn 转化成乙酰氨基葡萄糖（glcnac）。乙酰氨基葡萄糖（glcnac）经弱酸的处理后会得到氨基葡萄糖。由于 glcnac 依靠甘露糖磷酸转移系统（mannose pts，ii man，由 manxyz 操纵子编码）和葡萄糖磷酸转移系统（glucose pts，ii glc，由pstg 基因编码）对其进行磷酸化后从胞外向胞内进行转运， glcnac 依靠排出胞外的氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖经过manx

18、yz 转运途径进入到胞内 ii man和乙酰氨基葡萄糖磷酸转移系统（glcnacacpts，ii nag，由基因 nage 编码）对其进行磷酸化后从胞外向胞内转运，导致氨糖产量降低。因此，要想在胞外积累高浓度的 glcnac 或 glcn， 就必需减弱或阻断 glcnac 或 glcn 从胞外到胞内的转运。氨基葡萄糖合成酶（glms）和氨基葡萄糖乙酰化酶（gna1）作为 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的重要调控基因，其表达水平和活力对氨基葡萄糖的发酵产量具有重要影响。在大肠杆菌中，由谷氨酰胺作为氨基供体，6-磷酸果糖在氨基葡萄糖合成酶(glms)的催化作用下，生成 glcn，该步是 glcn

19、ac 合成途径中第一个限速反应。glms 属于变构酶，作为细胞壁合成途径的关键酶， glms 存在于几乎全部的原核和真核细胞里，在原核生物如大肠杆菌中，该酶呈同型二聚体结构，而在真核生物细胞中，该酶呈四聚体结构。glms 严峻受该合成途径代谢产物如氨基葡萄糖-6-磷酸(glcnac6p)和 udp-乙酰化氨基葡萄糖的反馈抑制，因而 glcnac 在正常的代谢合成中不能大量积累。glms 和gnal 作为n-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的关键限速功能基因，其来源多位为传统的大肠杆菌、酵母菌和陆生真菌，其催化的效率不高。在海洋生物中存在大量的新颖高效的功能基因，且葡萄糖胺的含量在海洋生物中比陆生生

20、物的要高，提示可能存在高活性的氨基葡萄糖生物合成的相关功能基因。本项目通过对海洋生物中高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因的挖掘和功能评价，通过微生物遗传育种的方法建立高产氨基葡萄糖的发酵菌株，并对其发酵条件和提取工艺进行优化，提高 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵产量、提取率和产物纯度。四、项目子任务争辩目标及主要争辩任务1. 项目子任务争辩目标1） 总体目标通过转变 n-乙酰氨基葡萄糖的制备途径，开发微生物发酵法生产 n-乙酰氨基葡萄糖的关键技术，克服当前传统制备方法的环境污染严峻、原料来源限制和过敏反应等问题，达到降低 n-乙酰氨基葡萄糖的生产成本、削减环境污染和爱护海洋生态的目标。2）

21、 年度目标筛选获得具有潜在 n-乙酰氨基葡萄糖合成功能基因的海洋生物 30 株以上； 依据基因的保守序列，设计氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶的简并引物，完成 pcr 扩增条件的优化和race 技术，获得海洋生物来源的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因 6 个以上；建立完善的氨基葡萄糖合成酶和乙酰化酶功能评价体系，完成克隆获得的海洋功能基因的功效测定，筛选获得高效的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因 2 个以上；通过微生物遗传育种改良技术，获得高产 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵菌株 4 株以上；通过葡萄糖的流加工艺和溶氧条件等发酵条件的把握，优化 n-乙酰氨基葡萄糖工程菌株的发酵工

22、艺；完成 100l 级的中试发酵争辩；建立快速稳定的 n-乙酰氨基葡萄糖提取分别和纯化技术；获得纯度在 90%以上的 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg；撰写专利申请和争辩论文。3）考核指标a) 从海洋生物中发掘高效 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关基因 2-3 个；b) 通过微生物遗传育种获得 n-乙酰氨基葡萄糖的高产菌株 4 株以上；c) 获得 100l 级 n-乙酰氨基葡萄糖发酵中试工艺技术，5d 培育获得 n-乙酰氨基葡萄糖 30g/l 以上；d) 开发出 n-乙酰氨基葡萄糖的分别提取和检测技术，提取率 90以上；e) 获得纯度 90%以上的 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg；f) 申请创造专利

23、2 项目。2. 主要争辩任务挖掘海洋生物来源的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成的关键调控功能基因，构建微生物基因工程菌株发酵生产目标产物，重点争辩内容如下：(1) 海洋生物来源的 n-乙酰氨基葡萄糖的功能基因挖掘以 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的关键调控基因氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶为争辩对象，依据基因的保守序列设计间并引物，从高产甲壳素的海洋生物中挖掘潜在的氨基葡萄糖合成酶基因；建立稳定的氨基葡萄糖合成酶异源表达和功能评价体系，筛选获得 2 个以上的海洋生物来源的高效的氨基葡萄糖合成酶基因。(2) 高产 n-乙酰氨基葡萄糖发酵基因工程菌株的构建将获得的海洋来源的功能基因氨基葡萄糖合

24、成酶基因导入微生物工程菌株中，并对其稳定性、表达效率和发酵产量进行系统评价，改良和优化 n-乙酰氨基葡萄糖发酵基因工程菌株。(3) n-乙酰氨基葡萄糖的中试发酵技术争辩在 100l 发酵平台中优化工程菌株的发酵条件和工艺，提高微生物发酵法生产 n-乙酰氨基葡萄糖的产量。(4) n-乙酰氨基葡萄糖的提取和分别技术以分子蒸馏法、离子交换发和膜分别等技术有机结合，建立发酵法生产 n- 乙酰氨基葡萄糖的提取分别和纯化技术；获得纯度在 90%以上的 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg。3. 技术路线4. 项目的技术关键，包括技术难点、创新点1. 技术难点（1） 高产 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因的

25、海洋生物筛选技术；（2） 高效 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因的克隆技术；（3） 高产 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵菌株的基因工程育种和改良技术；（4）n-乙酰氨基葡萄糖的高效经济的分别提取和纯化技术；2. 创新点（1） 通过对富含几丁质和甲壳素的海洋生物的种质筛选，依据n-乙酰氨基葡萄糖生物合成功能基因的保守序列设计简并引物克隆获得功能基因的全长序列，并对其功能进行评价，获得高效的海洋生物来源的 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因。（2） 通过发酵法获得的n-乙酰氨基葡萄糖游离于发酵液中，传统的提取分别手段会成环境污染，且纯度在 80%一下，本项目将接受分子膜过滤和离子色谱郊环法相结合的

26、手段，建立一种高效经济的 n-乙酰氨基葡萄糖分别提取和纯化技术。五、预期成果及技术、经济效益分析（1） 预期成果21 世纪是海洋世纪，海洋生物资源的开发和利用已成为世界各海洋大国竞争的焦点之一，其中基因资源的争辩和利用是重点。随着社会、经济的进展和人类活动的干预，海洋环境正在不断的恶化，海洋生物多样性正遭到破坏，海洋生物基因资源的爱护和利用，显得更加紧迫。发掘海洋生物基因，有利于爱护海洋生物资源，从海洋生物的功能基因入手，有助于培育出优质、高产、抗逆的海洋生物新品种，从根本上解决发酵工程菌种“质”和“量”的问题，同时还有助于开发具有我国自主学问产权的海洋基因工程新药，部分解决海洋药源问题。本项

27、目利用海洋生物特殊的生长环境，从中筛选获得性能高效稳定的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因，建立微生物基因工程菌株发酵法生产 n- 乙酰氨基葡萄糖，并优化其发酵的条件和提取纯化技术，建立 100l 级的发酵中试争辩。项目的完成可进一步提高发酵法生产 n-乙酰氨基葡萄糖的产量，降低生产成本，提高发酵法生产 n-乙酰氨基葡萄糖的市场竞争力，生产过程避开了大量的有机溶剂的使用，降低环境污染，为 n-乙酰氨基葡萄糖的生产供应了环境更加友好、生态效益显著的新型制备方法。（2） 技术、经济效益分析n-乙酰氨基葡萄糖（glcnac）是生物细胞内很多重要多糖的基本组成单位， 尤其是甲壳类动物的外骨骼含量

28、最高。它是合成双歧因子的重要前体，在生物体内具有很多重要生理功能。它在临床上是治疗风湿性及类风湿性关节炎的药物。它也可以作为食品抗氧化剂及婴幼儿食品添加剂，糖尿病患者甜味剂。主要用于临床增加人体免疫系统的功能，抑制癌细胞或纤维细胞的过度生长，对癌症和恶性肿癌起到抑制和治疗作用；对于各种炎症，能起到有效的治疗，对骨关节炎及关节苦痛也有治疗作用。甲壳质酸水解得到氨基葡萄糖，再经过乙酰化得到 glcnac。由于收率低， 蟹壳等原材料来源有限导致 glcnac 产量有限。为了克服此缺点，开发重组基因工程菌发酵法生产 glcnac 有着良好的进展前景。以葡萄糖为主要原料发酵生产glcnac 具有生产成本

29、稳定，不受原材料供应限制的优点。海洋生物中普遍含有丰富的甲壳素和几丁质等物质，含有潜在的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关的功能基因。本项目通过海洋生物的种质挖掘、功能基因的全场序列克隆和功能评价，获得高效的海洋生物来源的 n-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因；并在此基础上，构建高产 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产工程菌，通过发酵工艺的优化和分别提取技术的改进，提高 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵产量和纯度，为氨基葡萄糖发酵产业规模的扩大奠定了基础，并为 n-乙酰氨基葡萄糖工程菌株的构建供应了新的功能基因来源，为相关产业的产量供应了肯定的借鉴意义，有利于整个海洋发酵产业规模的扩大。六、实施年限和年度工

30、作方案（1） 实施年限本项目实施年限为 4 年。（2） 年度工作方案建立稳定的 n-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因的异源表达和活性评价体系，获得海洋生物来源的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；通过微生物遗传育种的方法，构建获得高产 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产菌株；通过葡萄糖流加和溶氧把握等技术，建立微生物发酵法生产氨基葡萄糖的新工艺，并在 100l 级的发酵罐中进行中试争辩；以多种提取技术相结合，建立高效快速的氨基葡萄糖的提取和纯化技术；获得 n-乙酰氨基葡萄糖样品 2kg；申请创造专利 2 项。七、经费预算及来源渠道项目子任务经费预算表序号预算科目名称1 一、经费支出2 （一）

31、直接费用金额单位：万元合计专项经费 自筹经费3 1、设备费4 （1）购置设备费5 （2）试制设备费6 （3）设备改造与租赁费7891011121314151617181920212223242526272、材料费3、测试化验加工费4、燃料动力费5、差旅费6、会议费7、国际合作与沟通费8、出版/文献/信息传播/学问产权事务费9、劳务费10、专家询问费11、其他（二）间接费用1、现有仪器设备及房屋、水、电、气、暖消耗2、管理费用补助支出3、绩效支出4、二、经费来源1、申请从专项经费获得的资助2、自筹经费来源（1） 其他财政拨款（2） 单位自有货币资金（3） 其他资金专项经费拨付进度申请金额比例第

32、1 年第 2 年第 3 年第 4 年%该担当单位/协作单位的间接费用占本项目总间接费用的比例%八、前期基础、组织措施及实施方式1. 前期基础（项目子任务担当单位已有科研条件和配套条件落实状况） 项目主要依托浙江中医药高校中药资源工程重点试验室和国家中医药管理局中医临床血液病争辩基地进行，平台仪器设备先进，拥有高内涵药物筛选系统、lc-ms 联用检测系统、荧光定量pcr 仪、荧光显微镜、共聚焦显微镜、蛋白电泳仪、多功能酶标仪、紫外分光光度仪、凝胶显微成像系统、流式细胞仪、常规pcr 仪、恒温细胞培育箱、低温离心机等，为本项目的顺当完成供应了保证。团队负责人程汝滨副争辩员长期致力于传统的中药和海洋

33、生物资源中靶向 抗肿瘤药物筛选和活性评价争辩，近三年共发表论文 20 余篇，其中以第一作者发表 sci 论文 6 篇，以通讯作者发表 sci 论文 3 篇，其他中文核心期刊多篇。目前主持国家自然科学基金一项，浙江省科技厅公益性项目一项，其他厅局级课题多项，作为主要完成人参与浙江省自然科学基金 2 项，国家自然科学基金 1 项，申请创造专利 3 篇。项目负责人近年来在海洋微藻的基因工程改造和功能基因挖掘方面取得了肯定得成果，成功的建立了dha 高产藻株裂壶藻的基因遗传转化体系，将功能基因成功转入裂壶藻体内后提高了其生物量和油脂含量，为dha 的工业化生产供应了优良藻种，并成功克隆了高效的脂肪酸合

34、成功能基因mcat，这些工作为本项目的开展奠定了坚实基础。团队长期致力于抗肿瘤药物， 尤其是白血病治疗药物的研发工作。目前已成功建立了多种血液病细胞株的抗肿瘤药物筛选模型；建立了基于高内涵技术的高通量荧光示踪筛选体系用于 hsp90 和 stat3抑制剂的筛选；建立了基于 lc-ms 系统的分子抑制剂的快速发觉和分别系统，从传统的中药资源和海洋生物资源中筛选潜在的肿瘤治疗药物和小分子抑制剂。团队已成功分别获得多个具有 stat3和hsp90 抑制功能的活性化合物， 并对其抗肿瘤的功能和机制进行了深化争辩。团队以青年科研人员为主，人员组成合理，分工明确，已具备从大规模海洋生物资源中高通量筛选抗肿

35、瘤药物的技术和力量，为本项目的顺当实施奠定了良好开端。项目参与单位国家海洋局第三海洋争辩所在海洋生物自然活性物质与海洋药物的应用争辩方面，已开发出了重组基因鱼生长激素、对虾病毒检测试剂盒、高纯河豚毒素（ttx）制备及其在戒毒新药领域的应用争辩、药用壳聚糖、“海洋宝”系列产品、“深海鱼油”等多项自主学问产权和具有市场前景的科研成果。项目主要依托国家海洋局海洋生物资源综合利用工程中心和国家海洋局海洋生 物活性物质重点试验室开放工作，平台研发团队目前拥有的相关试验室共 20 多间，面积达 1500 平方米，拥有微生物微藻发酵中试生产线、海洋药用生物繁育和养殖中试基地、活性产物筛选平台等。项目负责人林

36、祥志长期从事海洋生物学科争辩工作，主要包括海洋微藻异养发酵技术生产不饱和脂肪酸和功能性色素的争辩、海洋生物的基因工程和改良技术争辩、海洋活性产物的药理功能性评价和相关功能性保健品开发工作。海洋三所林祥志争辩院团队主要负责 n-乙酰氨基葡萄糖的发酵工艺优化和 100l 级的发酵罐中的中试工艺争辩，两家单位之间互补性强，沟通机制舒适，为项目的实施和顺当完成供应了良好的开端。2. 组织管理的措施争辩项目以课题负责人组织实施，其主要职责包括总体争辩方案的编制，争辩过程的监督与协调，争辩成果的汇总等。在项目负责人的组织领导下，对项目经费依据有关规定严格管理，专款专用。从组织上、技术上、条件上以及经费上保证本项目的高质量、高水平完成。参与项目研发的人员，依据其担当的不同职责，应具备相应的专业技术水平，对争辩项目的相对独立专题进行任务分工，在实施过程中实行合同制管理。（1） 建立健全质量体系，规范项目各项管理。加强试验团队的管理，建立和健全质量体系，确保每一步工作都完成预定目标，最终实现项目的高质量完成。实行项目负责制和质量监督制，对每个阶段进行把握。成果汇编过程中由相关人员进行校核、修订，保证