从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序

1、从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的 本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、 志贺氏菌检测等致病 菌检测 的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。二、适用范围： 本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、 志贺氏菌的分离、 鉴定及保 存的梯相关操作。三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在 BSL-2 生物安全实验室的生物安全 柜中进行。四、试剂及仪器设备试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸 盐磺绿增菌肉汤（SBG、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼 脂（XLD、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS、 三糖铁

2、（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、 志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法标本应为新鲜的或转移至 Cary-Blair 运送培养基的粪便或肛拭子， 最优标本是转移到 Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是 最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入 尿液、水和其他物质。肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛 拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门

3、内4-5cm处儿童约2-3cm）,同一方向轻轻旋转2-3周。以目测能见到粪便为准。插 入Cary-Blair 运送培养基。标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h;如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小 时内送检。六、检验程序七、操作步骤分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml 改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。用 1 个无菌拭子取少量标本（不要使拭子 粘得太多，尽量从可 见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区，接着把拭子放入 SBG曽菌液。再灭菌接种环在 XLD平板的其余区进行划线接

4、种。如果 是 Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增菌 液与平板。所有培养基均放入36C士 1C培养，SBG勺最佳增菌时间是16 18h（建议每天下午45时接种标本，第二天早上810时用增菌液划 平板）。观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。7.4.1 XLD 平板可疑菌落观察：志贺菌在 XLD平板上为粉红或无 色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径1-2mm而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规 则，直径2-3mm大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、 湿润、边缘整齐、圆形的菌落。 （图 2）742 YS平板可疑

5、菌落观察：74 3麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色 至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落，直 径2-3mm大多数沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒 沙门菌为无色菌落； 而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、 混 浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径 3-4mm。74 4 SBG肉汤增菌：SBG增菌1618小时后，划线接种XLE平 板或沙门显色平板，放入 36C 士 1C培养1824h。沙门显色平板可 疑菌落观察：典型的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落，直径 2-3mm7.4.4建议的初步筛查方案（初步生化特征见表 1）:表1 沙门菌、伤寒沙

6、门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征大部分 沙门菌伤寒 沙门菌志贺 氏菌大肠 杆菌枸橼酸杆菌变形 杆菌TSI （斜面）K （红色）K （红色）K （红色）A （黄色）A （黄色）K （红色）TSI （底面）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）TSI ( HbS)+ （黑色）小部分-+ （黑色）+ （黑色）TSI （产气）+ （气泡）-+ （气泡）+ （气泡）+ （气泡）MIU （动力）+ （弥漫 生长）+ （弥漫 生长）-（沿接种 线生长）+ （弥漫 生长）+ （弥漫 生长）+ （弥漫 生长）MIU （吲哚）-（黄色 圆环）-（黄色 圆环）-（黄色 圆环）

7、+ （加试剂 变红色）+ （加试剂 变红色）-（黄色 圆环）MIU （尿素）-（黄色）-（黄色）-（黄色）-（黄色）-（黄色）+ （红色）A :粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌f XLD分离接种TSI和MIUB:粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌一YS分离一接种TSI和MIUC:粪便（或肛拭子）-SBG或 SF增菌XtD 和麦康凯分离接种TSI*和MIUD粪便（或肛拭子）SBG或 SF增菌 YS 和沙门显色分离 接种TSI和MIUE:粪便（或肛拭子）->SBG或 SF增菌 XLD 和沙门显色分离接种 TSffi MIU生化初步鉴定每个平板挑取35个分离较好的单个可疑菌落，分别接种到三糖铁（

8、TSI）和动力-吲哚-尿素培养基（MIL）, 36C 士 1C培养1824h。 沙门菌和志贺菌的生化特征见表 2。系统生化试验沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单，取单个菌落进行系统生化鉴定（可以使用 APE20E或全自动生化鉴定系统进行）。血清学试验7.7.1志贺菌血清学试验7.7.1.1挑取生化反应实筛符合志贺菌的营养琼脂斜面， 首先用四 种多价血清做玻片凝集反应（4种多价包括：A群1、2型；B群和 D群）。凝集者则用B群多价、D群和A1、A2、血清分别凝集。7.7.1.2若多价血清不凝集，可能为 C群或A群的312型，应 进行C群的四种多价和A群另三种多价血清做玻片凝集。7.7.

9、2沙门菌血清学试验7.7.2.1挑取生化反应实筛符合沙门菌的营养琼脂斜面，首先用A-F群0多价血清做玻片凝集反应。7.7.2.2若凝集可按常见O因子检出频率，按照O4O1CHOSO7 f O8 O1A OP O11 顺序凝集。7.7.2.3 H 抗原凝集7.7.3 所有凝集阳性的菌落，都要同时用生理盐水做凝集试验， 只有不出现自凝时，才可以报告阳性结果。8 结果报告在初步生化鉴定符合后， 可以先将可疑菌落进行革兰氏染色， 最 后综合生化及血清学结果，可以报告检出（或未检出）沙门菌（或志 贺菌）。对于从业人员体检结果已经纳入检验软件管理的单位，可以直接 在检验软件中录入相应结果。其他单位可以设计专门的报告格式反馈给送检单位或送检科室， 检验报告中应至少包括姓名，性别，年龄，体检编号，检测结果。检测结果为阴性， 可以报告为未检出肠道沙门菌和志贺菌； 检测 结果为阳性，根据检