常用pH缓冲液配置方法及注意事项

1、.常用 ph缓冲溶液的配制和ph值序号溶液名称配制方法ph值1氯化钾 -盐酸13.0 ml 0.2 mol/l hcl 与 25.0 ml 0.2 mol/l kcl混合均匀后，加水稀释至100 ml1.72氨基乙酸 -盐酸在 500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g ，加 480 ml 浓盐酸，再加水稀释至1l2.33一氯乙酸 -氢氧化钠在 200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g naoh ，溶解完全后再加水稀释至1 l2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把 25.0 ml 0.2 mol/l 的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/l hcl混合均匀，加水稀释至100 m

2、l3.65邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/l的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/l naoh混合均匀，加水稀释至100 ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在 200 ml 水中溶解六亚甲基四胺40 g， 加浓 hcl 10 ml，再加水稀释至1 l5.47磷酸二氢钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/l的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/l naoh 混合均匀，加水稀释至100 ml6.88硼酸 - 氯化钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/l的硼酸 - 氯化钾与 4.0 ml 0.1 mol/l naoh 混合均

3、匀，加水稀释至100 ml8.09氯化铵 -氨水把 0.1 mol/l 氯化铵与0.1 mol/l 氨水以 2：1 比例混合均匀9.110硼酸 - 氯化钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/l 的硼酸 - 氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/l naoh 混合均匀，加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸 -氯化钠 - 氢氧化钠把 49.0 ml 0.1 mol/l 氨基乙酸 - 氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/l naoh混合均匀11.612磷酸氢二钠 - 氢氧化钠把 50.0 ml 0.05 mol/l na2hpo4与 26.9 ml 0.1 mol/l na

4、oh 混合均匀，加水稀释至100 ml12.013氯化钾 -氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/l kcl 与 66.0 ml 0.2 mol/l naoh混合均匀，加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，guaranteed reagent ，g r）、分析试剂（antalytical reagent ， a r ） 化学纯（chemical pure， c p ） 和实验试剂（laboratory reagent ，lr）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化

5、钙等。.2药品称量要精确。3 配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50 万欧姆以上， ph在 5.57.0之间才可应用， 在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二） 0.067 （1/15 ）mol/l 磷酸缓冲液11/15mol/l磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（kh2po4，ar） 9.08g ，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml 容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。21/15mol/l磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（na2hpo4，

6、a.r. ）9.47g （或者na2hpo42h2o 11.87g ）用蒸馏水溶解后，放入1000ml 容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。3按附表的比例，配制成不同ph值的缓冲溶液。附表 1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）ph1/15mol/l na2hpo41/15mol/l kh2po4ph1/15mol/l na2hpo41/15mol/l kh2po45.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.3

7、22.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0（三） 0.15mol/l pb液附表 2 0.15mol/lpb液配制法ph0.15mol/l na2hpo4（ml）0.15mol/l nah2po4（ml）6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.02

8、8.0.7.481.019.07.687.013.0na2hpo42h2o分子量 =175.05 0.15mol/l溶液含 26.7g/l 。na2hpo412h2o分子量 =358.22 0.15mol/l溶液含 53.7g/l 。nah2po4h2o分子量 =138.00 0.15mol/l溶液含 20.7g/l 。nah2po42h2o分子量 =156.03 0.15mol/l溶液含 23.4g/l 。（四） 0.2mol/l pb缓冲液附表 3 0.2mol/l pb缓冲液配制法ph0.2 mol/l na2hpo4（ml）0.2mol/l nah2po4（ml）5.88.092.06

9、.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2mol/l na2hpo42 h2o溶液 35.61g/l na2hpo412 h2o溶液含 71.64g/l 0.2mol/lnah2po4h2o溶液含 27.60g/l nah2po42 h2o溶液含 31.21g/l 欲配 0.1mol/l pb缓冲液则在0.2mol/l pb缓冲液的基础上加h2o稀释 1 倍即可。欲配制 pbs液时，则在溶液中加0

10、.85 的 nacl 溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（pbs ）（0.15mol/l ph 7.2）nacl 8.0g kcl 0.2g na2hpo4 1.15g （如为 na2hpo412h2o ，则为 2.89g ）kh2po4 0.2g .将上述试剂依次溶于1 000ml 去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在 4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以与洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（borate saline buffer）1硼酸（3bo3）0.2mol/l硼酸：硼酸12.37g 加水至 1 000ml 。2硼砂（ na2b4o7）0.05

11、mol/l硼砂：硼砂19.07g 加水至 1 000ml 。附表 4 不同 ph的 0.2mol/l硼酸缓冲液配制法ph 0.05mol/l硼砂（ ml） 0.2mol/l硼酸（ ml） ph 0.05mol/l硼砂（ ml） 0.2mol/l硼酸（ ml）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥缓冲液1ph8.2 离子强度0.05mol/l巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g 蒸馏水 3 000ml 1.17n hcl 55.0ml （1.17 n hcl=193ml浓 hcl 加

12、 1 807ml 蒸馏水） 将 4.76g 巴比妥钠溶于3 000ml 蒸馏水。 加 1.17 n hcl 55ml。 用 hcl 调节 ph到 8.2 ，并加蒸馏水至4 265ml 。2ph8.4 0.06mol/l巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml 3ph8.6 0.06mol/l巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml （八） 0.2mol/l醋酸盐缓冲液见表附表5 附表 5 0.2mol/l醋酸盐缓冲液配制法ph0.2mol/l0.1mol/lph0.2mol/l0.1mol/l.233

13、7tris （ml）hcl（ ml）2337tris （ml）hcl（ml）9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（tris hcl 缓冲液）不同 ph，0.05mol/l 25ml0.2mol/l三羟甲基氨基甲烷加ml0.1

14、nhcl，加水稀释至100ml（见下表）附表 6 trishcl 缓冲液配制法ph0.2mol/ltris(ml)0.1nhcl(ml)ph0.2mol/ltris(ml)0.1nhcl(ml)233723379.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.2

15、38.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷（tris ）分子量 =121.14 0.2mol/l三羟甲基氨基甲烷：tris24.23g，加水至1 000ml 。0.1nhcl：取 hcl8.6ml ，加水至1 000ml 。（十） 0.5mol/l ph9.5碳酸盐缓冲液nahco3 3.70g na2co3 0.60g 溶于 600.00ml 蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使ph下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制 ph8.0 磷酸缓冲液0.1mol/l na2hpo4 94.50ml .0.1n na

16、h2po4 5.50ml 混合即可29 份甘油与1 份 ph8.0 磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二） hank s 液1贮存液nacl 80.00g kcl 4.00g na2hpo412 h2o 1.52g kh2po4 0.60g 葡萄糖 4.00g 0.4 酚红液 50.00ml 双馏水加至 100.00ml 115高压灭菌15min，冰冻保存。2工作液贮存液 1 份双馏水 9 份115高压灭菌15min。 临用时用灭菌的5.6 nahco3液调 ph值至 7.2 左右 （溶液呈橙红色） 。（十三）萘（钠）氏试剂（nessler s reagent ）

17、配方 1：氯化汞 6.0g 碘化钾 12.4g 20 naoh 30ml 加蒸馏水至 100ml 配方 2：碘化汞 11.5g 碘化钾 8g 蒸馏水 50ml （完全溶解后）过滤，加20naoh 50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（ alsever s）液葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.80g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml 溶解后，以10% 柠檬酸调节ph至 6.1 ，过滤，分装，10 磅 10min 灭菌， 4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称s p 液或双抗液）青霉素（ 40 万 u） 5 支.链霉素（ 200 万 g） 1 支分别溶于100ml 灭菌无离子水中或共同溶于200ml 灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置- 10 - 20冰箱保存备用（1 万单位 g/ml ）。临用时，按 1% 的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100u/ml ， 链霉素 100ug/ml 。（十六）洗液（清洁液）配方 1：重铬酸钾 150g 蒸馏水 300ml 浓硫酸 3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边