生物安全检验培训课件

1、1生物安全实验室安全生物安全实验室安全技术要求与环节控制技术要求与环节控制 23l2010年12月，东北农业大学30名学生同在一个实验室实验，使28人被感染布鲁氏菌l实验室感染的发生率实验室感染的发生率(britain) 志贺菌实验室感染志贺菌实验室感染 0.322 沙门菌实验室感染沙门菌实验室感染 0.1374主要内容主要内容l生物安全的定义与概念l实验室的安全等级lbsl-2实验室的设施要求和管理规范lbsl与一般生物洁净室的不同lpcr实验室的要求5实验室生物安全实验室生物安全级别标准级别标准（美国（美国cdc）标准与准则标准与准则微生物和生物医微生物和生物医学实验室生物安全学实验室生物

2、安全通用准则通用准则（中华人民共和国（中华人民共和国卫生行业标准）卫生行业标准）6是指在一个特定的时空范围内，由于自然或人类活动引是指在一个特定的时空范围内，由于自然或人类活动引起的外来物种迁入，并由此对当地其他物种和生态系统起的外来物种迁入，并由此对当地其他物种和生态系统造成改变和危害；人为造成环境的剧烈变化而对生物的造成改变和危害；人为造成环境的剧烈变化而对生物的多样性产生影响和威胁；在科学研究、开发、生产和应多样性产生影响和威胁；在科学研究、开发、生产和应用中造成对人类健康、生存环境和社会生活有害的影响。用中造成对人类健康、生存环境和社会生活有害的影响。 7由动物、植物、微生物等生物体给

3、人类健康和自然由动物、植物、微生物等生物体给人类健康和自然环境造成的危害以及人们所采取的防范措施。环境造成的危害以及人们所采取的防范措施。广义的概念，它涉及三个方面：广义的概念，它涉及三个方面：1.1.外来物种迁入导致的原生态系统不良改变或破外来物种迁入导致的原生态系统不良改变或破坏；坏；2.2.人为造成的环境剧烈变化危及生物的多样性；人为造成的环境剧烈变化危及生物的多样性；3.3.科学研究、开发、生产和应用中，病原或变异科学研究、开发、生产和应用中，病原或变异生物体的泄露对人类健康或生存环境所造成的危生物体的泄露对人类健康或生存环境所造成的危害。害。8l生物安全是对生物危害的检测、评价、监测

4、、生物安全是对生物危害的检测、评价、监测、防范和治理的科学技术体系。防范和治理的科学技术体系。9l微生物气溶胶吸入（空气传播）微生物气溶胶吸入（空气传播）l刺伤、割伤刺伤、割伤l皮肤、黏膜污染（皮肤、黏膜污染（如hiv能通过眼结膜进入人体）l食入（经口传播）食入（经口传播）l感染的实验动物咬伤（蚊虫）感染的实验动物咬伤（蚊虫） 还有许多不明原因的实验室相关感染还有许多不明原因的实验室相关感染10lpike等对等对3 921例实验室相关感染统计分析结果发现，例实验室相关感染统计分析结果发现，已知原因的实验室感染只占全部感染的已知原因的实验室感染只占全部感染的18，不明原，不明原因的实验室感染却高

5、达因的实验室感染却高达82。l对不明原因的实验室感染的研究表明，大多数可能是对不明原因的实验室感染的研究表明，大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病的。内工作人员吸入了污染的空气感染发病的。11l飞沫核气溶胶飞沫核气溶胶l粉尘气溶胶粉尘气溶胶 两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害性，其程度取决于微生物本身的毒力、气溶胶的浓度、气性，其程度取决于微生物本身的毒力、气溶胶的浓度、气溶胶粒子大小、以及当时实验室内的微小气候条件。溶胶粒子大小、

6、以及当时实验室内的微小气候条件。 研究发现，粒径研究发现，粒径100 m的飞沫沉降很快，而粒径的飞沫沉降很快，而粒径50 m的飞沫在的飞沫在0.4s内就扩散开了；粒径内就扩散开了；粒径5 m的飞沫核能够被的飞沫核能够被呼吸道的粘膜捕获。呼吸道的粘膜捕获。 12l另外，一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空另外，一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空调或通风系统，污染了空调的冷却水，则可以形成更广泛的微生物调或通风系统，污染了空调的冷却水，则可以形成更广泛的微生物气溶胶污染。气溶胶污染。l除了实验室操作可以产生微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮除了实验室操作可以产生

7、微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶。毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶。l微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气。建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气。 13微生物的危险度等级微生物的危险度等级l分类：四，三，二，一分类：四，三，二，一l危害等级危害等级i, ii, iii, iv14l 危害等级危害等级i 低个体危害，低群体危害低个体危害，低群体危害 不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄

8、生虫等不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。生物因子。15l危害等级危害等级 (中等个体危害，有限群体危害中等个体危害，有限群体危害) 能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。16l危害等级危害等级 iii （高个体危害，低群体危害）（高个体危害，低群体危害） 能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经

9、济损失，但通常不能能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗的病原体。的病原体。17l危害等级危害等级 (高个体危害，高群体危害高个体危害，高群体危害) 能引起人类或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接或能引起人类或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接或间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传播的病原体。与动物间传播的病原体。18l每个国家（地区）微生物危险度等级：每个国家（地

10、区）微生物危险度等级：1、微生物的致病性。、微生物的致病性。2、微生物的传播方式和宿主范围。它们可能会受到当地人群、微生物的传播方式和宿主范围。它们可能会受到当地人群已有的免疫水平、宿主群体的密度和流动、适宜媒介的存在已有的免疫水平、宿主群体的密度和流动、适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响。以及环境卫生水平等因素的影响。3、当地所具备的有效预防措施。这些措施包括：通过接种疫、当地所具备的有效预防措施。这些措施包括：通过接种疫苗或给予抗血清的预防（被动免疫）；卫生措施，例如食品苗或给予抗血清的预防（被动免疫）；卫生措施，例如食品和饮水的卫生；动物宿主或节肢动物媒介的控制。和饮水的卫生；动

11、物宿主或节肢动物媒介的控制。4、当地所具备的有效治疗措施。这些措施包括：被动免疫、当地所具备的有效治疗措施。这些措施包括：被动免疫、暴露后接种疫苗以及使用抗生素、抗病毒药物和化学治疗药暴露后接种疫苗以及使用抗生素、抗病毒药物和化学治疗药物，还应考虑出现耐药菌株的可能性。物，还应考虑出现耐药菌株的可能性。19l狭义的等级划分仅适用于实验室工作。狭义的等级划分仅适用于实验室工作。l我们的什么工作需要我们的什么工作需要bsl实验室？实验室？20l在实验室工作中，应根据危险度评估结果将微生物因子归入某一生物安全水在实验室工作中，应根据危险度评估结果将微生物因子归入某一生物安全水平。在通过危险度评估工作

12、来确立适当的生物安全水平时，要考虑危险度等平。在通过危险度评估工作来确立适当的生物安全水平时，要考虑危险度等级以及其他一些因素。级以及其他一些因素。l例如，归入危险度例如，归入危险度2 级的微生物因子，进行安全工作通常需要二级生物安全级的微生物因子，进行安全工作通常需要二级生物安全水平的设施、仪器、操作和规程。但是，如果特定实验需要发生高浓度的气水平的设施、仪器、操作和规程。但是，如果特定实验需要发生高浓度的气溶胶时，由于三级生物安全水平通过对实验工作场所内气溶胶实施更高级别溶胶时，由于三级生物安全水平通过对实验工作场所内气溶胶实施更高级别的防护，所以更适于提供所必需的生物安全防护。的防护，所

13、以更适于提供所必需的生物安全防护。l因此，在确定所从事特定工作的生物安全水平时，应根据危险度评估结果来因此，在确定所从事特定工作的生物安全水平时，应根据危险度评估结果来进行专业判断，而不应单纯根据所使用病原微生物所属的某一危险度等级来进行专业判断，而不应单纯根据所使用病原微生物所属的某一危险度等级来机械地确定所需的实验室生物安全水平。机械地确定所需的实验室生物安全水平。21实验室的分类与分级实验室的分类与分级 共分四级共分四级 一级最低一级最低 四级最高四级最高两类：两类： 一般生物安一般生物安全防护实验室（全防护实验室（不使用实验脊椎不使用实验脊椎动物和昆虫）动物和昆虫） 实验脊椎动实验脊椎

14、动物生物安全防护物生物安全防护实验室实验室分类分类分级分级22l生物安全防护：指在实验室环境下处理和保存感染性物质的过程中采用的一系列的防护措施，包括一级防防和二级防护一级防护与二级防护一级防护与二级防护23一级防护与二级防护一级防护与二级防护l一级防护： 包括规范操作技术与规程，配置适当的安全设备，保护操作人员和室内直接环境免遭感染性物质的污染(包括a-生物安全柜和类似的设备，b-个人防护装备 )l二级防护： 包括合理的实验室设施设计和严格规范的操作流程，用以保护实验室外环境免受感染性物质污染24l实验室的安全等级实验室的安全等级基础实验室基础实验室一级生物安全水平一级生物安全水平基础实验室

15、基础实验室二级生物安全水平二级生物安全水平防护实验室防护实验室三级生物安全水平三级生物安全水平最高防护实验室最高防护实验室四级生物安全水平四级生物安全水平252627生物安全实验室生物安全实验室l通过规范的实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护通过规范的实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用（硬件）；实验人员严格遵从标准化的操作程装备的使用（硬件）；实验人员严格遵从标准化的操作程序和实行严格的管理规定（软件）等，确保操作生物危险序和实行严格的管理规定（软件）等，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受其污

16、染其污染,确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实验确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实验室。室。 28l病原微生物实验室安全管理条例病原微生物实验室安全管理条例；l实验室实验室 生物安全通用要求生物安全通用要求l微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 。l 社会、民众和政府对实验室的生物危险性愈加关注。如新加社会、民众和政府对实验室的生物危险性愈加关注。如新加坡、台湾和国家坡、台湾和国家cdc病毒所的病毒所的sars泄露事件。泄露事件。l医疗卫生行业的绝大多数实验室所涉及的病原体都是属于医疗卫生行业的绝大多数实验室所涉及的病原体都是属于或或危害等

17、级以上的，必须在危害等级以上的，必须在bsl-2或或bsl-3、4以上的防护水平以上的防护水平实验室操作。实验室操作。lbsl-3、4属国家严格控制和特殊审批的实验室。属国家严格控制和特殊审批的实验室。lbsl-2是系统建设和改造的普遍方向。是系统建设和改造的普遍方向。2930313233bsl1实验室适用范围和基本要求实验室适用范围和基本要求适用范围适用范围结构、设施、安全操作规程、安全设备适用于结构、设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。如大肠埃希氏于教学的普通微生物实验室等。如大肠埃希

18、氏菌、枯草芽孢杆菌等。菌、枯草芽孢杆菌等。安全设备安全设备个体防护个体防护无需生物安全柜；人员应穿工作服、戴防护眼无需生物安全柜；人员应穿工作服、戴防护眼镜。皮肤有破损或皮疹时应戴手套镜。皮肤有破损或皮疹时应戴手套设计建造设计建造特殊要求特殊要求应设洗手池；表面易于清洁；地面防滑不得铺应设洗手池；表面易于清洁；地面防滑不得铺地毯；台面不透水，耐腐蚀、耐热；家俱应牢地毯；台面不透水，耐腐蚀、耐热；家俱应牢固，与设备之间有间隙，易于清洁；有生物废固，与设备之间有间隙，易于清洁；有生物废弃物容器；纱窗。弃物容器；纱窗。34lbsl1不需要特殊的一级和二级屏障、除需要洗手池外，依靠标准的微生物操作即可

19、获得基本的防护水平。35bslbsl2 2实验室实验室l二级生物安全防护水平微生物操作必需在一级生物安全防护水平的基础之上，增加生物安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或面罩等。361. 无特殊选址要求，实验区与办公区分开，实验室内易划分污染无特殊选址要求，实验区与办公区分开，实验室内易划分污染区与清洁区。区与清洁区。2. 实验室应设在耐火等级不低于二级的建筑物内。实验室应设在耐火等级不低于二级的建筑物内。3. 实验室的能开启的窗户必须安装防昆虫进入的纱窗，下水道和实验室的能开启的窗户必须安装防昆虫进入的纱窗，下水道和排风管道应安装防啮齿类动物进入的铁网。排风管道应安装防啮齿类动物进入的

20、铁网。4. 应有充足的空间以使实验室工作安全进行。应有充足的空间以使实验室工作安全进行。5. 实验室要有限制进入设施，实验室的门宜带锁、可自动关闭，实验室要有限制进入设施，实验室的门宜带锁、可自动关闭，门上有观察窗，出口应有发光指示标志。门上有观察窗，出口应有发光指示标志。6. 墙壁、天花板和地板要光滑且易于清扫，对液体要有防渗透性，墙壁、天花板和地板要光滑且易于清扫，对液体要有防渗透性，对实验室日常应用的化学药品及消毒剂要有抗腐蚀性。地面应对实验室日常应用的化学药品及消毒剂要有抗腐蚀性。地面应防滑、无缝隙、不得铺设地毯和瓷砖。防滑、无缝隙、不得铺设地毯和瓷砖。7. 实验台表面应不透水、耐腐蚀

21、、耐热。实验台表面应不透水、耐腐蚀、耐热。378. 实验室内要配备二级生物安全柜和高压灭菌锅。实验室内要配备二级生物安全柜和高压灭菌锅。9. 应就近设置洗眼和淋浴装置应就近设置洗眼和淋浴装置.10.实验室内要求安装紫外线消毒灯。实验室内要求安装紫外线消毒灯。11.每个实验室宜在靠近出口处设置洗手池。每个实验室宜在靠近出口处设置洗手池。12.提供充足的照明，光线不要眩目，也不应产生倒影。提供充足的照明，光线不要眩目，也不应产生倒影。13.实验室水源和饮用水源不应有交叉连接，应有防倒流装置保护公共实验室水源和饮用水源不应有交叉连接，应有防倒流装置保护公共供水系统。供水系统。14.应该有可靠的和充分

22、的电力供应及紧急照明以便安全撤离，为了一应该有可靠的和充分的电力供应及紧急照明以便安全撤离，为了一些特殊设备的正常使用，最好有备用的发电机组。些特殊设备的正常使用，最好有备用的发电机组。15.如实验室有特殊的通风方面的要求，应安置风向向内的、无回流的如实验室有特殊的通风方面的要求，应安置风向向内的、无回流的机械通风系统。机械通风系统。3839l1、在处理危险度、在处理危险度2 级或更高危险度级别的级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志（图的生物危害警告标志（图1）。）。l2、只有经批准的人员方可进入实验室工作、只有经批准的

23、人员方可进入实验室工作区域。区域。l3、实验室的门应保持关闭。、实验室的门应保持关闭。l4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。区域。l5、进入动物房应当经过特别批准。、进入动物房应当经过特别批准。l6、与实验室工作无关的动物不得带入实验、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。室。40l1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。l2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，

24、应戴上合适的手套。手套用完后，性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。应先消毒再摘除，随后必须洗手。l3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。前，都必须洗手。l4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。41个体防护装备42l5、严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、严禁穿着实验

25、室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。l6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。l7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。处理隐形眼镜。l8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。l9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。柜子内。43l1、严禁用口吸移液管。、严禁用口吸移液管。l2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。、

26、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。l3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。行。l4、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。他用途。44l5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。向实验室

27、主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。l6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。执行。l7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。果，可能需要准备污水处理系统。l8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。染。45l1、实验室应保持清

28、洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。l2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。都必须清除工作台面的污染。l3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。之前，必须清除污染。l4、在进行包装和运输时必须遵循国家和、在进行包装和运输时必须遵循国家和或国际的相关规定。或国际的相关规定。l5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物

29、进入的纱窗。46l1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。全管理计划以及安全或操作手册。l2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。全培训。l3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这

30、些要求。实验室内应备有可供取阅的当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。安全或操作手册。l4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。l5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。疗，并应妥善保存相应的医学记录。47l在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成安全问题的情况要加以特别关注，这些情况包括：安全问题的情况要加以特别关注，这些情况包括：1

31、、气溶胶的形成、气溶胶的形成2、处理大容量和、处理大容量和或高浓度微生物或高浓度微生物3、仪器设备过度拥挤和过多、仪器设备过度拥挤和过多4、啮齿动物和节肢动物的侵扰、啮齿动物和节肢动物的侵扰5、未经允许人员进入实验室、未经允许人员进入实验室6、工作流程：一些特殊标本和试剂的使用。、工作流程：一些特殊标本和试剂的使用。 48l1、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一次有、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一次有目的的职业健康评估。目的的职业健康评估。l2、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。l3、育龄期妇女应知

32、道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未出生孩子的危害。保护胎儿的正确措施因妇女可能接触的微生物出生孩子的危害。保护胎儿的正确措施因妇女可能接触的微生物而异。而异。49l人员培训的内容应始终包括如何采用安全的方法来进行下列所有实验人员培训的内容应始终包括如何采用安全的方法来进行下列所有实验室工作人员都会经常遇到的高危操作，包括：室工作人员都会经常遇到的高危操作，包括：1、吸入危险（气溶胶产物），如使用接种环、划线接种琼脂平板、吸入危险（气溶胶产物），如使用接种环、划线接种琼脂平板、移液、制作涂片、打开培养物、采集血液血清标本、离心等移液、

33、制作涂片、打开培养物、采集血液血清标本、离心等2、食入危险，如处理标本、涂片以及培养物、食入危险，如处理标本、涂片以及培养物3、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险4、处理动物时被咬伤、抓伤、处理动物时被咬伤、抓伤5、处理血液以及其他有潜在病理学危害的材料、处理血液以及其他有潜在病理学危害的材料6、感染性材料的清除污染和处理。、感染性材料的清除污染和处理。50l高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。需要清除污染并丢弃的物品应装在容器中（如根据内容物是需要清除污染并丢弃的物品应装在容器中（如根据内容物是否需要进行高压灭菌和或焚烧

34、而采用不同颜色标记的可以否需要进行高压灭菌和或焚烧而采用不同颜色标记的可以高压灭菌的塑料袋）。高压灭菌的塑料袋）。l也可采用其他可以除去和或杀灭微生物的替代方法。也可采用其他可以除去和或杀灭微生物的替代方法。51l用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：弃前应考虑的主要问题有：1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？2、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便

35、就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？到其他有焚烧设施的地方进行处理？3、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害？方面的危害？52l要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵守国家和国际规定。废弃物可以分成以下几类：守国家和国际规定。废弃物可以分成以下几类：l1、可重复或再使用，或按普通、可重复或再使用，或按普通“家庭

36、家庭”废弃物丢弃的非污染（非感废弃物丢弃的非污染（非感染性）废弃物染性）废弃物l2、污染（感染性）锐器、污染（感染性）锐器皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理质处理l3、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料l4、高压灭菌后丢弃的污染材料、高压灭菌后丢弃的污染材料l5、直接焚烧的污染材料。、直接焚烧的污染材料。53l皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下

37、、回皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。l单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。内焚烧，如需要可先高压灭菌。l盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。当达到容量的四分之三时，应将其放入当达到容量的四分之三时，应将其放入“感染性废弃物感染性废弃物”的容器中进的容器

38、中进行焚烧，如果实验室规程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器行焚烧，如果实验室规程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。 5455bsl2实验室适用范围和基本要求实验室适用范围和基本要求适用范围适用范围结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物，如沙对人或环境具有中等潜在危害的微生物，如沙门氏菌、门氏菌、hbv、麻疹病毒、弓形虫。、麻疹病毒、弓形虫。安全设备安全设备个体防护个体防护需需级生物安全柜；可能产生致病微生物气溶级生物安全柜；可能产生致病微生物

39、气溶胶或溅出及处理高浓度或大容量感染性材料应胶或溅出及处理高浓度或大容量感染性材料应使用使用级级bsc，使用个体防护设备（面部用品，使用个体防护设备（面部用品可除外）可除外）设计建造设计建造特殊要求特殊要求设置各种消毒的设施，如高压灭菌锅、化学消设置各种消毒的设施，如高压灭菌锅、化学消毒装置对废弃物进行处理；洗眼装置；实验室毒装置对废弃物进行处理；洗眼装置；实验室带锁、自动关闭；具有生物危害警示标识；可带锁、自动关闭；具有生物危害警示标识；可通风换气。通风换气。56bsl3实验室操作规范实验室操作规范l1、张贴在实验室入口门上的国际生物危害警告标志应注明生物、张贴在实验室入口门上的国际生物危害

40、警告标志应注明生物安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域的所有特殊条件，如免疫接种状况。的所有特殊条件，如免疫接种状况。l2、实验室防护服必须是正面不开口的或反背式的隔离衣、清洁、实验室防护服必须是正面不开口的或反背式的隔离衣、清洁服、连体服、带帽的隔离衣，必要时穿着鞋套或专用鞋。前系扣服、连体服、带帽的隔离衣，必要时穿着鞋套或专用鞋。前系扣式的标准实验服不适用。实验室防护服不能在实验室外穿着，且式的标准实验服不适用。实验室防护服不能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。当操作某些感染性因子，可以允许脱必须在清除污染

41、后再清洗。当操作某些感染性因子，可以允许脱下日常服装换上专用的实验服。下日常服装换上专用的实验服。l3、开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他、开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他基本防护设施中进行。基本防护设施中进行。l4、有些实验室操作，或在进行感染了某些病原体的动物操作时，、有些实验室操作，或在进行感染了某些病原体的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。必须配备呼吸防护装备。57bsl3实验室要求实验室要求l实验室应与同一建筑内自由活动区域分隔开，具体可将实实验室应与同一建筑内自由活动区域分隔开，具体可将实验室置于走廊的盲端，或设隔离区和隔离门，或经缓冲间验室置

42、于走廊的盲端，或设隔离区和隔离门，或经缓冲间（即双门通过间或二级生物安全水平的基础实验室）进入。（即双门通过间或二级生物安全水平的基础实验室）进入。缓冲间是一个在实验室和邻近空间保持压差的专门区域，缓冲间是一个在实验室和邻近空间保持压差的专门区域，其中应设有分别放置洁净衣服和脏衣服的设施，而且也可其中应设有分别放置洁净衣服和脏衣服的设施，而且也可能需要有淋浴设施。能需要有淋浴设施。l缓冲间的门可自动关闭且互锁，以确保某一时间只有一扇缓冲间的门可自动关闭且互锁，以确保某一时间只有一扇门是开着的。门是开着的。58bsl3实验室实验室适用范围和基本要求适用范围和基本要求适用范围适用范围结构和设施、安

43、全操作规程、安全设备适用于结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重、致死致病主要通过呼吸途径使人传染上严重、致死致病微生物及其毒素，有疫苗。如微生物及其毒素，有疫苗。如hiv、sars分分离培养。离培养。安全设备安全设备个体防护个体防护安装安装级或级或级以上级以上bsc。 感染性材料在感染性材料在bsc中操作；使用个体防护设备（两副手套、中操作；使用个体防护设备（两副手套、背开式工作服）；必要时使用呼吸保护装置；背开式工作服）；必要时使用呼吸保护装置；配备有效的消毒剂、眼部清洗剂、应急药品。配备有效的消毒剂、眼部清洗剂、应急药品。设计建造设计建造特殊要求特殊要求建

44、筑物中自成一区；核心区含实验间及建筑物中自成一区；核心区含实验间及1/8面面积缓冲间；设两道连锁门，密闭观察窗；独立积缓冲间；设两道连锁门，密闭观察窗；独立空调进排风口有高效过滤器。实验间空调进排风口有高效过滤器。实验间-30pa-40pa，缓冲间，缓冲间-15pa-20pa；通讯系统。；通讯系统。59bsl4实验室实验室l运作应在国家或其他有关的卫生主管机构的管理下进行。运作应在国家或其他有关的卫生主管机构的管理下进行。l实行双人工作制，任何情况下严禁任何人单独在实验室内工实行双人工作制，任何情况下严禁任何人单独在实验室内工作。这一点在防护服型四级生物安全水平实验室中工作时尤作。这一点在防护

45、服型四级生物安全水平实验室中工作时尤其重要。其重要。l在进入实验室之前以及离开实验室时，要求更换全部衣服和在进入实验室之前以及离开实验室时，要求更换全部衣服和鞋子。必须配备带有内外更衣间的个人淋浴室。鞋子。必须配备带有内外更衣间的个人淋浴室。l级生物安全柜型实验室或防护服型实验室级生物安全柜型实验室或防护服型实验室60bsl4实验室适用范围和基本要求实验室适用范围和基本要求适用范围适用范围结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度危险性，通过气溶胶途径传播对人体具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，无疫苗或治疗方法的致病微或传播途

46、径不明，无疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。例如：埃博拉病毒生物及其毒素。例如：埃博拉病毒安全设备安全设备个体防护个体防护感染性材料在感染性材料在级级bsc中操作，人员穿着正压中操作，人员穿着正压工作服，可在工作服，可在级级bsc中操作；必须更换全套中操作；必须更换全套实验室服装，包括内衣。离开前均必须在更衣实验室服装，包括内衣。离开前均必须在更衣室内脱下；室内脱下；设计建造设计建造特殊要求特殊要求核心区域有核心区域有级级bsc的房间（安全柜室）和进入通道组成，外更衣室、淋浴的房间（安全柜室）和进入通道组成，外更衣室、淋浴室和内更衣室，门有自动连锁装置；内更衣室与安全柜室墙上有双门结构的室和

47、内更衣室，门有自动连锁装置；内更衣室与安全柜室墙上有双门结构的高压灭菌锅；安全柜室高压灭菌锅；安全柜室60pa，安全柜室、内更衣室、淋浴室和外更衣室的，安全柜室、内更衣室、淋浴室和外更衣室的相对压强依次增高，相邻房间压差相对压强依次增高，相邻房间压差10pa15pa。611.工作目的工作目的bsl实验室：实验室： 保护工作人员和环境为主，也保护产品。保护工作人员和环境为主，也保护产品。安全是首要考虑因素。安全是首要考虑因素。生物洁净室：以生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首保护产品（工作对象）为主。洁净是首要考虑因素要考虑因素2.污染物的种类和来源污染物的种类和来源bsl实验室：为

48、目标微生物。内部产生。实验室：为目标微生物。内部产生。生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入外部进入以及人的活动产生。以及人的活动产生。623.空气污染物处理方式空气污染物处理方式bsl实验室：平面布局和气流流向的作用实验室：平面布局和气流流向的作用, 产生环节在一产生环节在一级屏障内进行个体防护。级屏障内进行个体防护。生物洁净室：主要通过进气净化生物洁净室：主要通过进气净化 减少活动。减少活动。4.洁、污概念洁、污概念bsl实验室：凡有实验室：凡有目标目标微生物即视为污；微生物即视为污； 凡无凡无目标目标微生物即视为洁；微生物即视为洁；对各环

49、节对各环节洁、污应仔细分析。洁、污应仔细分析。生物洁净室：粉尘、微生物（特别是超标者）和废弃物均生物洁净室：粉尘、微生物（特别是超标者）和废弃物均视为污。视为污。635.排气处理方式排气处理方式bsl实验室：不允许室内实验室：不允许室内 室外；室外； 排气须净化，不许回风。排气须净化，不许回风。生物洁净室：生物洁净室：一般室内一般室内 室外；室外；排气可回风。排气可回风。6.实验室软、硬件的作用实验室软、硬件的作用bsl实验室：对工作人员保护，实验室：对工作人员保护，实验室软件实验室软件应是决定性的；应是决定性的； 对环境保护，对环境保护，实验室硬件实验室硬件应是决定性的；应是决定性的；生物洁

50、净室：均很重要，但硬件设施作用比较大。生物洁净室：均很重要，但硬件设施作用比较大。647.压力递增方向压力递增方向bsl实验室实验室生物洁净室生物洁净室65 保护对象保护对象 操作区操作区 压力压力 气体排气体排 放方式放方式 设备设备 结构结构 设备设备 造价造价 生物安全柜生物安全柜 操作者、操作者、 样品、环境样品、环境 负压负压 净化后排放净化后排放 复杂复杂 较贵较贵 洁净工作台洁净工作台 样品样品 正压正压 直接排放直接排放 简单简单 便宜便宜 6667生物安全柜的分级生物安全柜的分级根据欧盟、美国以及我国正在编制的生物安全柜产品标准，分为三个级别根据欧盟、美国以及我国正在编制的生

51、物安全柜产品标准，分为三个级别的产品的产品68生物安全柜的选择生物安全柜的选择保护类型保护类型生物安全柜的选择生物安全柜的选择个体防护，针对危险度13 级微生物级、级、级生物安全柜个体防护，针对危险度4 级微生物，手套箱型实验室级生物安全柜个体防护，针对危险度4 级微生物，防护服型实验室级、级生物安全柜实验对象保护级生物安全柜，柜内气流是层流的级生物安全柜少量挥发性放射性核素化学品的防护级b1 型生物安全柜，外排风式级a2型生物安全柜挥发性放射性核素化学品的防护级、级b2 型、级生物安全柜691.与其它操作区域相分离；与其它操作区域相分离；2.远离主要通道；远离主要通道；3.与气道有与气道有

52、一定距离；一定距离；4.与实验室入口保持一定距离。与实验室入口保持一定距离。生物安全柜摆放要求70l当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。l若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消

53、毒并拿出生下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。或高压灭菌处理。71原则上分四个区：准备区、样品处理区、核酸扩增区、产物分析区原则上分四个区：准备区、样品处理区、核酸扩增区、产物分析区各区隔离防止交叉污染，相互间可设传递窗各区隔离防止交叉污染，相互间可设传递窗外围设两道缓冲区外围设两道缓冲区准备

54、区配置净化工作台准备区配置净化工作台样品处理区配置生物安全柜样品处理区配置生物安全柜pcr实验室应配置自动高压灭菌器实验室应配置自动高压灭菌器72l各工作区域有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品禁止混各工作区域有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品禁止混用。用。l进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即试剂贮存和准备进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区区标本制备区标本制备区扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区扩增产扩增产物分析区。物分析区。l不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工

55、作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。员离开各工作区域时，不得将工作服带出。73l具体包括以下物品各分区不可混用具体包括以下物品各分区不可混用l1.微量加样器（覆盖微量加样器（覆盖l1000ul）l2.移动紫外灯（近工作台面）移动紫外灯（近工作台面）l3.消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）滤心）l4.专用工作服和工作鞋专用工作服和工作鞋l5.专用办公用品等专用办公用品等74 l贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。

56、在打开含有反应混合液的离心管或试管前，不能经过产物分析区。在打开含有反应混合液的离心管或试管前，应将其快速离心数秒。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区应将其快速离心数秒。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后，应将内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。其分装贮存备用，避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。 75l在整个区的实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，在整个区的实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污

57、染的措施。操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。l严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。l工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（因此可使用可移动紫外灯（254nm波长），在工作完成

58、后调至实验台波长），在工作完成后调至实验台上上6090cm内照射。由于扩增产物仅几百内照射。由于扩增产物仅几百bp，对紫外线损伤不敏感，对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。实验室因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有日常记录。及其设备的使用必须有日常记录。 76l要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立污染，所以应避免在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立正压条件避免从邻近区进人本区的气

59、溶胶污染。为避免样本间的正压条件避免从邻近区进人本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加人待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。交叉污染，加人待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程序。序。l用过的加样器吸头必须放人专门的消毒（例如含次氯酸钠溶液）用过的加样器吸头必须放人专门的消毒（例如含次氯酸钠溶液）容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁，实验材料（原始容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁，实验材料（原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等）如出现外血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等）如出现外溅，则必须分别处理并作出记录。溅，则必须分别处理并作出记录。 77l对实验台适当的紫外照射（对实验台适当的紫外照射（254nm波长，与工作台面近距离）适波长，与工作台面近距离）适合于灭活去污染。可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台合于灭活去污染。可移动紫外