腐烂茎线虫不同群体同工酶表型与生物学特性研究

1、腐烂茎线虫不同群体同工酶表型与生物学特性研究 甘薯茎线虫病是我国甘薯生产上重要病害之一 , 该病病原腐烂茎线虫 Ditylenchus destructor 为我国检疫性病害。 腐烂茎线虫最早在马铃薯上发现 该线虫除了危害甘薯外 , 还危害花生、茄子、薄荷、甜菜和草莓等作物。 本实验以来自国内的 10 个腐烂茎线虫群体为研究材料 ,做了以下几方面的 研究：对国内不同地理来源的 10 个腐烂茎线虫群体进行同工酶表型研究。结果 说明：1在对DeJL和DeLJ 2个群体的同工酶梯度分析中发现,碾样200、400、 600条线虫的10卩I提取液中,只有碾样400条线虫提取液对DeJL和DeLJ表型 研

2、究均有较好的染色效果；210个群体苹果酸脱氢酶MDH酶谱分为2个酶型, 酶型I的相对迁移率Rf值约为0.21、0.26 ;酶型U的Rf值约为0.21、0.26、 0.31,而酯酶染色不成形；3结合MDHg型和核糖体ITS区核酸序列分析,将腐烂 茎线虫划分为 3 个不同遗传类型。对国内不同地理来源的 10个腐烂茎线虫群体在两个中抗甘薯茎线虫病品种苏薯 9号、宁薯 9-9 上测定腐烂茎线虫群体致病力、繁殖力、雌雄比性比、甘薯薯块鲜重损失量。结果说明：1在P=0.05水平上,各群体间的致病力、繁殖 力、性比差异显著，其中致病力最高的群体来自河北廊坊 DeHB对苏薯9号的致 病力为 75%即苏薯的病情

3、指数为 75%； 2在苏薯 9号和宁薯 9-9 上,各线虫群体 致病力与线虫繁殖力呈正相关；3偏相关分析显示 , 在苏薯 9号上不同线虫群体繁殖力与性比呈负相关 , 相关系数低 , 只为-0.213, 而在宁薯 9-9 上不同群体繁殖 力与性比呈显著正相关 , 相关系数高 , 为 0.901, 说明寄主品种的改变对线虫群体 性别分化影响显著； 4在抗甘薯茎线虫病和保鲜力方面 , 宁薯 9-9 分别比苏薯 9 号高 33.48%和 19.86%。将腐烂茎线虫 2个基因型进行杂交 ,在48个正反交组合中 ,33 个杂交组合未 产生后代,15个组合产生的F1代死亡,2个组合"DeLYxDe

4、YL和"DeSDxDeH旷生 活力很弱的 F1 代幼虫,继代培养未能产生可延续的后代； 所有的杂交组合中所产 生的 F1 代均为幼虫且其数量在 P0.05 水平上均显著低于亲本对照组；对"DeLYxDeYL和"DeSDxDeHB"个组合的 F1 代进行 ITS-PCR扩增产物和 RsaI、Hae 川、Hinf I 3种内切酶的酶切(RFLP)分析显示,F1代ITS区PCR产物与其母本条 带长度较一致 , 约为 800bp,2 个杂交代与其亲本的酶切图谱在 3个酶切位点上差 异显著；对同一基因型内的线虫种群间杂交发现 ,杂交均能成功且产生可育的后 代,对其

5、F1代同样进行ITS区扩增产物和RFLP分析,发现同一基因型内杂交后代 ITS区扩增产物和RFLP图谱与其亲本一致。说明我国甘薯腐烂茎线虫种群间分 化现象严重,变异复杂,即基因型A4个种群分别与基因型B 6个种群间杂交不亲 和, 存在生殖隔离现象 , 我国甘薯腐烂茎线虫很可能是一个包含两种不同线虫的 复合种。对 5 个不同地理来源的腐烂茎线虫群体分别接种到甘薯 (待其发病腐烂时做 以下实验处理)、甘油和细沙3种介质中,在-20 C和-70 C温度下经过不同的处理 时间测定其存活率来研究腐烂茎线虫耐寒力 , 并探索腐烂茎线虫在低温冷冻下的 保存方法。腐烂茎线虫在-20 C和-70 C低温下，随着处理时间的延长，不同群体线 虫的存活率都有所下降,其中DeWY和 DeLJ群体在不同处理时间下的存活率均高 于其它3个群体,且在P0.01水平下均到达极显著差异，初步证实这2个群体有很 强的耐寒力。试验发现在细沙和不同甘油浓度条件下 , 所有线虫群体在低温处理下均未查 到活虫。腐烂茎线虫在