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文档简介

1、需要准备的东西：1高压细菌冲洗液， 可以是幽门螺杆菌液体培养基或是pbs缓冲液。2将现有的针高压。3另外，观察 ss1标准株的细菌长势，将部分细菌传代，以保证周二细菌长势良好。依此类推，保证细菌在周四和周六长势良好。4先用一块弃用的平板练习如何调整细菌浓度，避免到时手忙脚乱。 （先将细菌全部刮下， 溶到脑心浸液中， 混匀，测 od660,当数值为 1 时，即浓度 108/ml，再将此离心，浓缩 10 倍，即为浓度 109/ml） ，这些都需要在超净台中操作，但是测 od 值时可以吸取菌液稀释后测浓度，然后换算回来就行了。）1 观察细菌的长势，建立ss1 标准株，同时选取较好一块平板作液体培养，

2、同时注意观察条件之间的不同，找出上次液体培养失败的原因。2周二 需要至少 5 块平板，同时多做一块作备用平板。3 选取细菌长势比较好的细菌， 溶在液体培养基中。 总量为 81ml3 次=24ml(总量为 30ml，考虑到灌胃时的损失 )（然后调整浓度为108/ml 或 109/ml） 。（1）选取无污染的细菌平板用液体冲下来。（2）最初时用少量的液体冲洗，以便调整浓度。/或者离心收取细菌（rpm:5000,10min） ，再调整细菌浓度。（3）测 od 值。 当 od660=1， 浓度 108/ml。 将细菌浓度调整至109/ml 4 分别在 10，12，14 号灌胃。（1）选取 57bl/6

3、(或者 bab/c) 雌性小鼠， 68 周龄，1820克，s.p.f级。（2）灌胃总量为 108细菌量 4 只，109细菌量 4 只,另外 2 只作对照，灌无菌细菌冲洗液。（3）每次灌胃以前灌胃针用酒精消毒（也可能这面可以提供灌胃针，这需要再去问问） 。（4）灌胃以前选取 1ml 的无菌注射器，以便准确度量。5 间隔 2 周6 处死小鼠（断颈处死）7hp 感染检测将试验鼠胃沿纵向切开，纵向切成同样大小的3 份，1 份直接快速尿素酶试验， 1 份放入无菌生理盐水中，用于细菌培养，1 份置于 10福尔马林中固定，用于病理组织学（giemsa和 h&e 染色）检测。（1）快速尿素酶试验：将其

4、中1 份胃粘膜放入快速尿素酶检测试剂中， 37 度放置 24h，试剂颜色变红表示阳性。（2）培养：将 1 份胃粘膜粘膜朝下，均匀涂布于血平板上，37 度培养 57 天，经涂片革兰染色，尿素酶，触酶，氧化酶试验确定是否是hp，再将阳性菌落转种于另一平板上，培养35 天，再次观察菌落形态及生化反应，形态典型及生化反应均为阳性者定为hp 阳性。（3）病理组织学： giesma染色确定 hp 定植程度， h&e染色确定炎症程度。hp 定值标准判定：高倍镜下观察 10 个视野胃小凹的 hp 定植：0无 hp 1胃小凹内有 12 条 hp，但非每个小凹内都有 hp 存在2多数胃小凹内有310 条 hp 3几乎所有胃小凹内均有成堆的hp 胃粘膜病理组织学标准：高倍镜下观

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