还原叶酸载体基因多态与儿童ALL易感的关系研究ppt课件

1、杨丽华杨丽华 余晶余晶 王斌王斌南方医科大学珠江医院南方医科大学珠江医院 儿科中心儿科中心研研 究究 背背 景景 急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病acute lymphoblastic acute lymphoblastic leukemialeukemia，ALLALL为最常见的儿童恶性肿瘤，约占为最常见的儿童恶性肿瘤，约占25-30% 25-30% 病毒病毒感染感染基基 因因环环 境境病因？病因？ 现普遍以为，现普遍以为，ALLALL的发生为基因的发生为基因- -环境相互作用所致环境相互作用所致理化理化要素要素遗传遗传素质素质 暴露于一样危险环境要素的儿童暴露于一样危险环境要素的儿童,

2、 ,其其ALLALL发病的差发病的差别是由遗传易感性别是由遗传易感性susceptibilitysusceptibility来决议的来决议的危险环境危险环境 CancerCancer-freeSusceptibility:Metabolism,DNA damage & repairRFC5-MeTHF图图 1. 叶酸代谢途径叶酸代谢途径Dhillon et al.Mutat Res 2021; 665: 1-6叶酸代谢相关叶酸代谢相关基因的多态性基因的多态性 影响细胞的叶酸代谢影响细胞的叶酸代谢 干扰正常干扰正常DNADNA合成和甲基化合成和甲基化 ALL？Reduced folate

3、 carrier, RFC复原叶酸载体基因复原叶酸载体基因RFC1RFC1位于位于21q22.2-q22.3,21q22.2-q22.3,编码编码一个含一个含591591个氨基酸的完好的膜蛋白个氨基酸的完好的膜蛋白, ,包含包含1212个跨个跨膜区膜区(transmembrane domain(transmembrane domain，TMD)TMD) 还还 原原 叶叶 酸酸 载载 体体分生构造分生构造第第2 2外显子第外显子第8080位核苷酸具有高频率的位核苷酸具有高频率的A A GG多态可引起第多态可引起第2727位密码子位密码子HisArgHisArg多态性多态性与正常人群的血浆叶酸和同

4、型半胱氨酸与正常人群的血浆叶酸和同型半胱氨酸程度有关程度有关能够影响儿童能够影响儿童ALLALL的遗传易感性、疗效、的遗传易感性、疗效、预后等预后等特性特性研研 究究 目目 的的 了解在安康儿童和了解在安康儿童和ALLALL白血病儿童中白血病儿童中RFC1 80RFC1 80位点基因型分布特征位点基因型分布特征 讨论讨论RFC1 A80GRFC1 A80G多态性与儿童多态性与儿童ALLALL易感易感性之间的关系性之间的关系研研 究究 对对 象象 ALL组 45例，2021.10-2021.2儿科和血液内科住院的初治ALL儿童。男28例，女17例，年龄1-16岁，中位年龄5.53岁。 对照组 7

5、0例，同期门诊体检安康儿童。男45名，女25名，年龄1-14岁，中位年龄5.31岁。 两组均为华南地域出生汉族儿童 研研 究究 方方 法法1.1.采集外周静脉血，抽提基因组采集外周静脉血，抽提基因组DNADNA2.PCR2.PCR扩增扩增3.DNA3.DNA片段大小检测及回收纯化片段大小检测及回收纯化4.DNA4.DNA测序测序5.5.统计学处置统计学处置结结 果果500bp400bp300bp200bp150bp100bp50bp140bp M 1 2 3 4 5 6 7 图图2 RFC12 RFC1基因第基因第2 2外显子含外显子含8080片段片段PCRPCR产物产物2%2%琼脂糖凝胶电泳

6、琼脂糖凝胶电泳M M：Marker 1-7Marker 1-7：分别为：分别为ALLALL标本标本1-71-7 A BC图图2 2 RFC1 RFC1基因第基因第2 2外显子含外显子含8080片段的测序图片段的测序图A.A.野生型野生型(His27His) (His27His) ：CACCACB.B.杂合子突变型杂合子突变型(His27Arg)(His27Arg)：CNC (NCNC (N代表代表A/GA/G杂合杂合) ) C.C.纯合子突变型纯合子突变型(Arg27 Arg)(Arg27 Arg)：CGCCGC组别组别GGGAAA2P察看值察看值 期望值期望值 察看值察看值 期望值期望值 察

7、看值察看值 期望值期望值ALL组组76.42021.21817.40.1340.71对照组对照组1820.64034.71214.61.6031.21表表1 RFC1 801 RFC1 80基因型分布及基因型分布及Hardy-WeinbergHardy-Weinberg平衡检验平衡检验拟合优度拟合优度22检验结果：检验结果：两组人群均符合两组人群均符合H-WH-W遗传平衡遗传平衡(df=2(df=2，P0.05)P0.05)，阐明这两个研讨人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、阐明这两个研讨人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、迁移等要素对遗传平衡的影响迁移等要素对遗传平衡的影响组别组别

8、例数例数基因型频率基因型频率GGGGAGAGAAAAALLALL组组45457 715.615.6202044.444.4181840.040.0* *对照组对照组7070181825.725.7404057.157.1121217.117.1* *ALLALL组与对照组相比，组与对照组相比，2=7.6332=7.633，P=0.02P=0.02表表2 2 两组两组RFC1RFC1基因基因8080位点基因型频率分布位点基因型频率分布表表3 3 两组两组RFCRFC基因基因8080位点位点G G、A A等位基因频率分布等位基因频率分布组别组别例数例数等位基因频率等位基因频率 G GA AALLA

9、LL组组4545343437.837.8 56(62.2) 56(62.2)* *对照组对照组7070767654.354.364(45.7)64(45.7)* *ALLALL组与对照组相比，组与对照组相比，2=5.9832=5.983，P=0.01P=0.01两组两组RFC180RFC180各种基因型频率的分布差别具有统计学意义各种基因型频率的分布差别具有统计学意义两组两组RFC180RFC180等位基因等位基因A A频率差别具有统计学意义频率差别具有统计学意义 基因型基因型ALLALL组组% %对照组对照组% %OROR值值95%CI95%CIOROR值值* *95%CI95%CIGGGG

10、7 715.615.6181825.725.71.001.001.001.00GAGA202044.444.4404057.157.11.291.290.46-3.580.46-3.581.231.230.44-3.460.44-3.46AAAA181840.040.0121217.117.13.863.861.24-12.041.24-12.044.154.151.29-13.381.29-13.38AG+AAAG+AA38 (84.4)38 (84.4)52 (74.3)52 (74.3)1.881.880.71-4.950.71-4.951.871.870.71-4.930.71-4.9

11、3表表4 RFC1 804 RFC1 80多态性与儿童多态性与儿童ALLALL易感性的易感性的logisticlogistic回归分析回归分析* * OR OR* *95%CI95%CI经过年龄和性别校正经过年龄和性别校正在调整了年龄、性别要素后，在调整了年龄、性别要素后，携带携带RFC180AARFC180AA基因型的儿童较基因型的儿童较80GG80GG携带者携带者患患ALLALL的风险添加的风险添加4.154.15倍倍讨讨 论论1 1 华南地域汉族安康儿童的RFC1 80A等位基因频率为45.7% 中国南方人群中国南方人群 47.9% 美国安康儿童美国安康儿童62% 英国安康儿童英国安康儿

12、童59%Relton CL, et al2004裴丽君裴丽君20042004de Jonge R, et al2021RFC1 A80GRFC1 A80G多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差别多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差别 讨讨 论论2 2 RFC1 80AA RFC1 80AA可显著性添加儿童可显著性添加儿童ALLALL的患病风险的患病风险 一方面，位于一方面，位于TMD1TMD1内的组氨酸碱性相对较弱，可改动内的组氨酸碱性相对较弱，可改动RFCRFC转运功能，引起叶酸摄取率转运功能，引起叶酸摄取率 以及甲硫氨酸循环以及甲硫氨酸循环中的中的Hcy Hcy ，致使该循环转甲基才干，致使该循环转甲基才干 Whetstine et al, 2001Whetstine et al, 2001另一方面，含另一方面，含RFC1 80ARFC1 80A等位基因的个体的淋巴细胞微等位基因的个体的淋巴细胞微核率较其它基因型者明显核率较其它基因型者明显 ，严重影响了染色体的稳，严重影响了染色体的稳定性定性 (Dhillon et al, 2