氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中应用

1、氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中应用摘要 该文使用中性氧化铝cleanert alumina-n-spe 小柱(0. 5 g/6 ml),洗脱剂为三氯甲烷-甲醇(7 : 3) 5 ml, 代替氧化铝开放柱(100200目，5 g,内径1 cm),依次 以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 ： 3)各20 ml进行洗脱对 苦参药材供试液进行处理，该方法优化洗脱溶剂使用种类和 数量，并优化了苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的 色谱条件，将2010年版中国药典中流动相条件乙睛-无 水乙醇-3%磷酸溶液(80 : 10 : 10)优化为乙睛-无水乙醇-3% 磷酸溶液(84 ： 6 ： 10)；简

2、化了 2010年版中国药典规 定苦参药材供试液的前处理，缩短了样品处理时间，减少了 洗脱溶剂，结果更为准确可靠，适合苦参药材中含量的测定, 提高苦参药材中苦参生物碱含量测定的工作效率。关键词苦参；固相萃取柱；方法优化收稿日期2013-03-04通信作者 *郭宝林,tel: (010) 57833172, e-mail： guobaolin010163. com作者简介 杨霞，tel: ( 0355 ) 8096033, e-mail： yangxiaxyyeah. net苦参为常用中药，来源于豆科植物苦参sophora flavescens ait.的干燥根，具有清热燥湿、杀虫利尿之功 效。苦

3、参含有生物碱类、黄酮类等多种化学成分，其中生物 碱类中的苦参碱(matrine)氧化苦参碱(oxymatrine)是 2010年版中国药典规定的苦参药材质量控制成分。文献 报道苦参生物碱的含量测定方法中，大多参照2010年版中 国药典方法1-2,部分用酸碱处理和液液萃取的方法 3-4,也有直接提取液进样检测的报道5-6,但后者样液 杂质多，影响色谱柱的寿命。固相萃取(spe)是20世纪80 年代发展起来的一项样品萃取技术。已经广泛应用于药品、 代谢物、食品成分检测和环境监测等方面，但在药典中的中 药样品前处理应用尚不够普及7-10 o2010年版中国药典 记载的苦参含量测定过程中采用开放的中性

4、氧化铝萃取柱 进行样品前处理，洗脱时间长，洗脱剂用量多，难以满足生 产实践及科学研究中大量苦参样品的含量测定。本实验利用 spe柱代替中性氧化铝开放柱，旨在除去药材中的部分杂质 以保护色谱柱的使用寿命；相比药典记载的中性氧化铝柱， spe柱简化苦参药材前处理过程，提高工作效率。1材料perkineelmer 高效液相色谱仪(flexar lc pump, flexar pda detector, flexar solvent manager, totalchron 工作 站)；cleanert alumina-n-spe 固相萃取柱(agela 公司)； shangpingfa2104 (1/

5、1 万)电子天平。乙月青（色谱纯，美国honeywel 1公司）；娃哈哈纯净水; 无水乙醇（色谱纯，天津市丰越化学品有限公司）；其他试 剂均为分析纯。苦参碱、氧化苦参碱对照品为山西振东光明 研究院制备，用于含量测定（面积归一法测定质量分数分别 为 99.84%, 98.55%）o苦参药材样品14来自于山西长治振东道地药材开发 有限公司中药材公司苦参种植基地的不同采集点，样品5来 自于河南卢氏野生药材，均由中国科学院药用植物研究所郭 宝林研究员鉴定。2方法和结果2. 1色谱条件及优化venus订 xbp nh2 色谱柱（4.6 mmx250 mm, 5 um）, 检测波长为220 nnio作者发

6、现在2010年版中国药典记 载的流动相条件下，即乙睛-无水乙醇-3%磷酸溶液（80 : 10 : 10）,氧化苦参碱峰前位有杂质小肩峰，流动相 条件调整为乙膳-无水乙醇-3%磷酸溶液（84 ： 6 ： 10）时， 氧化苦参碱和小峰的得到良好分离，氧化苦参碱的出峰时间 仅加长了大约3 min,见图lo因此确定后者为本实验的色 谱条件。2.2对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品25.0 mg,氧化苦参碱对照品24.7 mg,分别加乙惰-无水乙醇 （80 : 20）溶解定容到50 ml量瓶中作为储备液，对照品色谱图见图lo1苦参碱；2氧化苦参碱；a.对照品；b：药材。图1苦参碱和氧化苦参碱对照品的

7、hplc图fig. 1 hplc of matrine and oxymatrine reference substance2. 3固相萃取法制备供试液方法的建立2. 3. 1固相萃取法和药典样品处理方法的比较药典样 品处理方法参考文献11。选择与2010年版中国药典方法使用填料量相近的 cleanert alumina-n-spe 小柱(5 g/12 ml)代替中性氧化 铝开放柱进行样品处理。比较苦参碱和氧化苦参碱峰面积， 见表1 o结果表明cleanert alumina-n-spe小柱处理后杂质 去除效果与2010年版中国药典记载方法相近，苦参碱 和氧化苦参碱的峰面积分别高3. 43%,

8、 2. 06%o2. 3.2几种不同填料量的固相萃取柱、洗脱溶剂和体积 比较选择3种不同中性氧化铝填料量和柱体积的同型号固 相萃取柱，分别是 5 g/12 ml, 1 g/6 ml, 0.5 g/6 ml0 供 试液制备方法同2. 3. 1,仅spe小柱的洗脱溶剂体积不同， 见表2,考察杂质去除情况，比较苦参碱和氧化苦参碱峰面 积。3种不同的spe小柱的杂质去除情况相近，且仅用5 ml三氯甲烷-甲醇(7 ： 3) 1次洗脱即可。苦参碱和氧化苦参碱的峰面积值相近，也是且略高于常规开放柱测定的相应苦参 碱和氧化苦参碱的峰面积。2. 3.3多个苦参药材样品的新方法处理验证 将苦参药 材样品25按方法

9、vii制备供试液，同方法1(药典方法) 比较。精密吸取20 u l注入液相色谱参考文献1周玉枝，原红霞.hplc法测定苦参浸膏中苦参碱和氧化苦参碱的含量j.世界中西医结合杂志，2010,5(4)：23.2汪文来，赵红霞，贾海骅，等.hplc法测定不同产地苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量j.中国中医基础医 学杂志，2007,13 (10)：799.3王淼，韩丽，谢兴亮.苦参药材中总碱含量的漠甲 酚绿比色法测定j.时珍国医国药，2011, 22 (8)： 329.4郝秋娟，李树立，贾月梅.苦参生物碱提取及检测方法研究进展j.河北化工，2011,34 (10)：23.5王苑，曾荣仕，朱湛华.rp-hp

10、lc法测定苦参中苦参碱的含量j.中国药房，2007,18 (27)：2124.6王玲丽，马沛勤，裴翠锦.hplc法测定苦参不同器官氧化苦参碱含量j.安徽农业科学，2008,36 (13)：5691.7车文军，张征，徐春祥，等.固相萃取/高效液相色谱法测定化妆品中5种抗组胺药物残留j.分析测试学 报，2012,31 (8)：1005.8 杨燕，付亚群，吴晓萌，等.固相萃取/高效液相色谱法分析食用油中的苯并茏j.山东大学学报：医学版, 2012,50 (8)： 124.9 苗水，王柯，陆继伟，等.农药残留测定用新型混合型固相萃取小柱的开发j.中国卫生检验杂志，2011, 21 (1)：7.10 胡

11、明勋，陈安家，郭宝林，等.影响山西恒山 野生蒙古黄竄质量的环境因素研究j.中草药，2012, 43(5)：984.11 中国药典一部s 2010： 188.application of solid-phase extraction column for determination ofmatrine and oxymatrine in sophora flavescensyang xia, guo bao-lin, hu hong-yu, huang wen-hua, qiao he-ping, fan sheng-ci, guan zha-gen (1. shanxi zhengdong p

12、harmaceutical co. , ltd. , changzhi 047100, china；2. institute of medicinal plant development , chinese academy of medical sciences & pekingunion medical college, beijing 100193, china；3. beijing zhengdong guangming pharmaceutical research co. ， ltd. ， beijing 100120, china)abstract a cleanert a

13、lumina-n-spe column (0.5 g/6 ml) chroma to grapy with 5 ml of chloroform-me thanol (7 : 3) as eluent, instead of aluminum oxide column (100-200 mesh, 5 g, 1 cm) chromatograpy eluted successively with chloroform and the chloroform-methanol (7 : 3) (20 ml each), was applied to enrich mat rine and oxym

14、a trine in sophora. f lavescens. also , the optimization of the hplc determination conditions with acetonitrile-ethanol absolute3% phosphoric acid solution (84 : 6 : 10) as mobile phase, insteadofacetonitrile-ethanolabsolute -3%phosphoric acid solution (80 ： 10 ： 10) recorded in chinese pharmacopoeia 2010 edition, was more suitable for determination of matrine and oxymatrine in s. flavescens this method has advantage of reducing sample handling time and solvent volume and increasing the accuracy