金银花多糖提取工艺和含量测定探究

1、金银花多糖提取工艺和含量测定探究【摘要】目的：优化金银花多糖的提取工艺并对多 糖的含量测定进行研究。方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖 含量，水提醇沉法制备粗多糖，sevag去蛋白法对多糖进行 精制，以金银花总多糖提取率为指标，优选最佳提取工艺， 并采用正交试验法对优选的最佳工艺参数进行优化。结果： 影响金银花多糖提取率的各因素关系为：提取温度溶剂倍 量提取时间提取次数；最佳提取工艺为：提取温度90°c, 提取时间为1.5h,提取次数为2次，溶剂倍量为15倍量， 多糖提取率为9.61%o结论：优选的工艺操作简便，多糖提 取率高。【关键词】金银花多糖；提取工艺；含量测定【中图分类号ir28

2、2.4【文献标识码】a【文章编号】 1004-7484 (2012) 12-0011-02金银花为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb. 的干燥花蕾或带初开的花1-2 o已有报道称多糖是金银花 中有效成分之一，并有抗癌、抗肿瘤、提高人体免疫力等多 种作用3,目前国内对金银花多糖方面的研究仍较少。金 银花的多糖提取工艺及含量测定研究有利于新的药效部位 的开发，为金银花多糖的开发应用提供理论依据。1材料与仪器ab135-s型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；uv-1100型双光束紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器 有限公司）；r1002型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有

3、限公 司）；tdl-5-a型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；金银 花药材购自济南建联中药有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍 冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾；d-无水葡萄糖（中 国药品生物制品检定所，批号110833-200503）；苯酚、硫酸 等试剂均为分析纯，水为去离子水。2方法与结果2. 1金银花多糖含量测定2. 1. 1含量测定方法d-无水葡糖糖作为标准品配制标准品溶液，采用苯酚- 硫酸法4测定金银花提取物中总多糖的含量。金银花总多糖提取率二提取物中总多糖含量/样品中总 多糖含量x100%2. 1.2标准曲线的绘制精密称定105£干燥至恒重的无水葡萄

4、糖10.25 mg置 looml容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，备用。分别精密量 取葡萄糖标准溶液 0.0, 0. 1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. oml 置loml具塞试管中，加入1. 6 ml5%苯酚溶液，再加入7ml 浓硫酸于溶液表面，摇匀，沸水浴加热15 min,冷却20min 后再加蒸憎水定容至相同体积，放置30 min,于最大吸收波 长下测定吸光度a,以吸光度a为纵坐标，葡萄糖标准液浓 度c为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程 a=48. 1375c+0. 1172, r=0. 9995。2. 1.3多糖的含量测定精密称取制得的多糖适量，置于looml容量瓶中，精密

5、 量取5ml于50ml容量瓶中，加蒸馆水稀释至刻度，摇匀。 精密量取供试液0. 6ml于loml具塞试管中，按2. 1.2方法 测定吸光度，并计算多糖含量。2.2金银花多糖的制备采用本试验优选的最佳提取工艺提取金银花多糖。即向 金银花药材中加入15倍量的水9（tc提取2次，每次1.5ho 提取液过滤，滤液浓缩至体积适量后，加入95%乙醇使含醇 量达75%,静置过夜，沉淀用无水乙醇冲洗、干燥即得多糖 粗品。对制得的粗多糖采用sevag法去蛋白：将粗多糖溶于 10倍量蒸馆水中，加入sevag试剂（氯仿-正丁醇，25： 5） 萃取，重复操作至两相界面无变性蛋白产生为止。将萃取后 的多糖溶液浓缩至适当体积，醇沉、洗涤、干燥得精制多糖。2.3金银花多糖提取工艺参数正交优选在单因素考察的基础上，以多糖提取率为指标，对提取 温度（a）、提取次数（b）、溶剂倍量（c）及提取时间（d） 4因素进行考察，选用l9 （34）正交表进行试验，正交试验 设计见表1,正交试验结果见表2