分析试验报告高效液相色谱

1、华南师范大学实验报告学生姓名： 学号： 20082401129专业： 化 学 年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目： 液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型： 实验时间：2010/416实验指导老师曹立娟老师实验评分：一、实验目的:1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术二、实验原理:高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基 础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵 敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。 具有分离效能高，检出限低， 操作自动化和应用范围广的特点。其基本原理：利

2、用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由 不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进 行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动 相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品 浓度被转换成电信号传送到记录仪。三、仪器和试剂:1. 主要仪器：岛津液相色谱仪（LC-10AT）配有紫外检测Phe nomen ex触；10卩L微量注射器2、试剂:甲醇、水苯和甲苯混合待测溶液苯标准溶液：2.0卩L/mL甲苯标准溶液：2.0卩L/mL苯、甲苯混合标准溶液：1.0卩L/mL、2.0卩L/mL、5.0卩L/mL、10.0卩L/m

3、L四、实验步骤1、按操作规程开机。2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件通过调节溶剂甲醇和水的混合比例，从而来优化色谱调剂。调好最佳色谱条件，控制流速为1ml/min。柱温30C，检测波长354nm3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10卩L微量注射器分别进样10卩L苯和 甲 苯混合待测溶液，10卩L苯标准溶液（2.0卩L/mL）和10卩L甲苯标准 溶液（2.0卩L/mL）（微量注射器用甲醇润洗35遍），观察并记录色谱图 上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10卩L微量注射器分别进样1.0卩L/mL、2.0卩L/mL、5.0卩L

4、/mL 10.0卩L/mL的苯和甲苯混合标准溶液 10卩L。观察 并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面 积与相应浓度的标准曲线5、苯和甲苯混合待测溶液分析根据得到的苯和甲苯混合待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从绘制的标准曲线上查出苯和甲苯混合待测溶液中苯和甲苯的各自的浓度。六、实验数据处理及分析1、色谱条件优化分析：本次实验分别选择了甲醇：水 =60% 40% 70% 30% 80% 20%勺溶剂配比，通过比较不同溶剂配比条件下，甲苯和苯的峰宽、保留时间从而确定采用甲 醇：水=80% 20%乍为本次实验的最佳色谱条件。2、定性分析5.0 巴(x10,000)4

5、.54.03.53.02.52.01.51.0:512.'5o3.1:5455.min样品苯甲苯保留时间3.7084.804分析：在同一色谱操作条件和进样量下，分别测定试样溶液中苯和甲苯组分及已 知苯和甲苯纯物质的保留时间，并将其色谱峰、 保留时间与对应的已知苯和甲苯纯物质进行比较，两者基本相同，从而确定混合样品中含有苯和甲苯。3、定量分析苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml面积(x1,000,000)1.751.501.251.000.750.500.250.00甲苯+II+HT2.752.502.252.001.75

6、1.501.251.000.750.500.250.00面积(x1,000,000)1.02.03.04.U5.06.07.08.09.0浓度浓度峰面积浓度峰面积1 ul/ml803311 ul/ml2371012 ul/ml2110552 ul/ml5090195 ul/ml8067215 ul/ml137885110 ul/ml169221810 ul/ml2815005Y = aX + ba = 181668.7b = -119927.9RA2 = 0.9989202R = 0.9994599Y = aX + ba = 287133.8b = -57107.93RA2 = 0.99997

7、10R = 0.99998554、未知样品浓度未知样品苯甲苯样品14.9ul/ml4.5ul/ml七、结果讨论1、实验中为什么采用标准曲线法作为定量的方法？答：因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标 准曲线法得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准 确更高的实验结果，但由于实验操作、计算复杂，不能快速分析，故实验 中采用标准曲线法作为定量的方法。2在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液 - 液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太 短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低

8、极性溶剂中，逐渐增加其中的极 性溶剂，使保留时间缩短。3选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和 使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶 解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应 有紫外吸收。4影响分离的因素与提高柱效的途径1）液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是 提高柱效主要途径，降低固定相粒度可提高柱效。2 ）液相色谱中，不可能通过增加柱

9、温来改善传质；（恒温）3 ）改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。5. 高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点：（1）进样方式的不同：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气 化或裂解；（2）流动相不同，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定 的相互作用力；（3）由于液体的粘度较气体大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系 数比在气体流动相中约小 45 个数量级；（4）由于流动相的化学成分可进行广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足 梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率（柱效能）；（5）高效液相色谱采用510Lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩 小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相；(6) 高效液相色谱是在液相中进行，对被测组分的检测，通常采用灵敏的湿法光 度检测器，例如，紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等。 6高效液相色谱的定性和定量分析的方法定性：利用纯物质定性的方法利用保留值定性： 通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰， 来确定试 样中是否含有该物质及在色谱图中位置。 不适用于不同仪器上获得的数据之间的 对比。利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。 利用文献保留值定性相对保留值r21 :相对保留值r