薯莨提取物体外抗人型支原体作用

1、薯浅提取物体外抗人型支原体作用摘要目的从中药薯董中提取具有体外抗人型 支原体作用的成分，并测定其最小抑菌浓度，为开发薯葭提 供依据。方法采用超声提取法醇提，d101大孔树脂梯度洗 脱的方法得到不同的洗脱流分，经固体培养法初筛具有体外 抑制人型支原体作用的流分，再经液体-固体联合培养法测 定其mic范围和mic50值。结果薯萇正丁醇部位经d101 大孔树脂梯度洗脱，其中25%乙醇洗脱流分具有较好的体外 抑制人型支原体的作用，其mic范围是(16/32128) mg/ml, 而mic50为32 mg/mlo结论 薯菽具有抗人型支原体作用的 开发和研究价值。关键词薯萇；人型支原体；最低抑菌浓度中图分

2、类号r285 文献标识码b 文章编号 1673-9701 (2013) 26-0102-02泌尿生殖道支原体感染是非淋菌性尿道炎(ngu)的重 要病因之一。近年来，泌尿生殖道支原体感染受到普遍重视。 但随着临床上日趋严重的抗菌药物滥用，泌尿生殖道支原体 耐药性也不断发生着变化。因此，从中草药中寻找有效治疗 药物越来越受到重视。薯萇(dioscorea cirrhosa lour.) 是薯菽科薯菽属的一种藤本植物，其药用有效成份主要包括 块茎中的酚类、昔类等。本品味微苦、涩，性微寒，药理作 用包括活血止痛、止血止痒、解毒抗菌1、收缩子宫平滑 肌2和治疗应激性溃疡3等。目前国内外对中药薯罠的研 究

3、非常少，而有关其有效成份方面的研究则更少。近年来本 课题组的研究表明，薯浅提取物具有降压作用4。同时， 薯萸浸膏对泌尿生殖道人型支原体(mycoplasma hominism, mh)也有较强的抗菌作用，并找到薯萇抗泌尿道人型支原体 作用的有效部位，为临床上治疗泌尿生殖道支原体感染筛选 新药和有效开发中草药薯萇提供依据，现报道如下。1材料与方法1. 1实验材料1. 1. 1培养基a7固体培养基购自法国梅里埃生物公 司。人型支原体液体培养基按照文献5方法配制。1： 1牛 心消化液、10%新鲜酵母液、20%新生小牛血清、0. 002%酚 红、青霉素20 000 u/lo加0.1%精氨酸,ph调至6

4、. 5。1.1.2支原体株从泌尿生殖道感染患者的标本中分离 获得30株人型支原体(mh)菌株，经初步鉴定5,传代3 次后，保存于-70工备用。实验菌液：取保存的备用菌液， 在室温下融化，用人型支原体液体培养基按1： 100稀释， 37°c培养2448 h后达106颜色变化单位(color changing unit, ccu) /0. 1 ml 作为接种物6。1. 1.3提取物的制备原药处理取8. 1 kg薯萇块茎 (采自湖南省平江县，经南华大学生药学鉴定，标本存放于 南华大学药物药理研究所），洗净，干燥，粉碎。在75%乙醇 中浸泡4 h,超声回流提取4次，得总浸膏1 612.5 g

5、o取 浸膏850.0 g （相当于原药材4 269.8 g）,加水4 l,充分 搅匀，依次用石油瞇、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液减压 蒸馆浓缩，挥干，称重，得石油瞇部位13.17 g,乙酸乙酯 部位247. 05 g和正丁醇部位445. 00 god101大孔树脂 分离活性跟踪结果显示正丁醇部位具有体外抗人型支原体 的活性。取正丁醇萃取成份320. 0 g （相当于原药材3 070. 4 g） ±d101大孔吸附树脂柱（5.5x120 cm）,依次用水和不 同浓度（梯度为5%）的乙醇洗脱，每浓度洗6个柱体积（bv）。 收集各浓度洗脱流分，浓缩，挥干。5%、10%、15%、25%、 3

6、0%、35%洗脱流分依次命名为a、b、c、d、e、f。称重分别 为 24.61 g. 18. 14 g. 12. 10 g. 24. 75 g. 12.48 g. 6. 20 go1.2实验方法1.2. 1初筛实验 取相同重量各洗脱部位组分分别溶于 1%二甲基亚矶（dms0）溶液配成相同浓度（预实验用1%二 甲基亚枫，没有发现有抗人型支原体的作用）。取a7固体培 养基，37恒温箱复温10 min,将培养基均分为三个区，在 不同区中央滴入同一洗脱部位的1% dms0溶液50 ul,倒置 lomin,无菌接种环在药液区内均匀接种mh菌株，c02培养 箱培养，选择1% dmso溶液作为阴性对照，o.

7、lg/ml阿奇霉 素溶液作为阳性对照。培养96 h后，取出培养基，倒置，在10倍物镜显微镜下，观察视野中煎蛋样菌落，顺时针方 向在三个区中各取5个视野，记录菌落数7。根据a7固体 培养基说明书，以平均每个视野中菌落数1.3统计学方法采用spss13. 0统计学软件，计量资料采用均数加减标 准差表示，多组间比较采用方差分析，两两采用t检验。 p45°c)o e和f组分为黄色粉末状物质，易溶于甲醇、乙醇、 二甲基亚矶等，溶于热水(>70°c)o2. 2初筛实验各洗脱部位均配成0.2 g/nil浓度进行初筛实验。结果 显示，d组分具有明显的体外抗人型支原体作用，见表1。2.

8、 3最小抑菌浓度测定经液体-固体联合培养法培养结果见表2,两种培养法测 定的最小抑菌浓度相近。3讨论人型支原体是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一，可 引起盆腔炎、急性肾盂肾炎等多种生殖道疾病和创伤感染、 支原体血症等生殖道外感染9。因此，mh感染日渐为人们 所重视，不断有抗支原体新药问世。中药薯萇为薯锁科植物。其药用有效化学成分包括皂昔 类和生物碱等。既往研究证实，薯籁科植物的总皂昔成分具 有治疗心血管疾病、平喘、抗炎和抗肿瘤等多种作用10, llo而其抗人型支原体作用却未见报道。笔者在对薯萇有 效成分的提取和分离的实验中，发现薯萇正丁醇部位通过 d101大孔树脂梯度洗脱后，25%乙醇洗脱流分

9、具有较好的体 外抑制人型支原体的作用。经液体-固体联合培养法证实， 其 mic 范围为(16/32128) mg/ml,而 mic50 为 32 mg/mlo 两种培养方法有一定的偏差，主要是因为该流分有较深的颜 色影响了结果的判断。临床上人型支原体一般采用液体培养法，依据培养液的 颜色变化情况判断支原体的存在与否，结果容易分辨，但缺 点是容易污染及可能出现假阳性结果12o同时大部分的中 药提取液本身具有颜色，与培养液混合后，容易使结果的判断产生偏差。a7固体培养基作为经典的解淼和人型支原体分 离的培养基，具有在低倍镜下观察菌落数既直观又可靠的优 点12 o由于本实验中梯度洗脱的各流分均有较深

10、的颜色， 可以影响液体培养法中药敏试验结果的判断。本实验采用人 型支原体直接划线固体培养法对各流分先进行初筛，再采用 液体-固体联合培养法测定有效流分的mic范围和mic50,既 解决了单纯液体培养法中各流分颜色的影响，又可以解决单 纯的固体培养法中各流分的浓度难以精确稀释的问题。本实验证实了中药薯萇具有较好的抑制体外人型支原体的作用。25%乙醇洗脱流分是一个具有成千上万个单体的 混合物，导致最小抑菌浓度数值偏大。而且，其中的有效单 体成分还需在接下来的提取和分离实验中经活性跟踪的方 法深入研究。但本实验结果为开发中药薯萇，深入研究其药 理作用，寻找新的具有抑制人型支原体作用的药物提供了线 索

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