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1、1一、细胞凋亡的检测方法第1页/共16页2 细胞受到急性强力伤害时，立即出现的早期反应。周围炎症 多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定，由基 因控制的细胞主动性死亡过程。(programmed cell death,PCD). 从严格的词学意义上来说，PCD与凋亡是有很大区别的第2页/共16页3细胞坏死细胞凋亡第3页/共16页4二、细胞凋亡的检测方法第4页/共16页5 (二) 形态学方法第5页/共16页6正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞第6页/共16页7细胞形态结构，也不能反映凋亡细胞与周围组织的关系第7页/共16页8 （四第8页/共16页9第9页/共16页10试剂盒采用赛宝生生物技

2、术Annexin-v-FITCF凋亡检测试剂盒第10页/共16页11流式细胞仪的工作原理和基本结流式细胞仪的工作原理和基本结构构 待测细胞以单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色，放入样品管，吸入流动室。待测细胞以单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色，放入样品管，吸入流动室。 流动室充满流动室充满IsoFlow ，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱。中心喷出，形成细胞液柱。 液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分

3、析。第11页/共16页12 细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境稳定的方面起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量在35-36kD的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异性结合。以标记FITC的Annexin V作为探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。第12页/共16页13 PI(Propidium iodide)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过而使细胞核染成红色。将Annexin V 与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞分开。第13页/共16页14 散点图 密度图二维等高图直

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