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1、系统性红斑狼疮患者血清dna酶测是的临床意义系统性红斑狼疮患者血清dna齣测定的临床意义屮华皮肤科杂志1998年第6期笫31卷论著作者：曾凡钦陈宜芳李伯冇林宝珠许德清单位：510120广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院皮肤科关键词：红斑狼疮；系统性；脱氧核糖核酸酶类【摘要】1=1的 研究血清dnafw(dnase)浓度异常在系统性红斑狼疮(sle)发生发展屮所起的作用。方法 于 国内首次用单和陆扩散法检测了 63例sle患者。结果 患者血清中dnase浓度明显低于正常人；活动期患 者明显低于缓解期患者；sle伴肾损害患者低于非肾损害患者。血清dnase的浓度卜-降与dna含量升高呈 负相关；与血

2、沉、ana呈负相关；与补体c3、c4呈正札i关；与病情活动积分呈负相关。结论sle患者由 于其dnase水平低下，使得血循环中含dna的自身抗原氏期滞留，发挥免疫原性，并与抗dna抗体结合形 成免疫复合物，造成免疫损伤。患者血清dnase水平低下在sle的发病机制中起着一定作用。the measurement of deoxyribonuclease and its clinical significanee in patients with slezeng fanqin, chen yifang, li boyou, et al department of dermatology, sun

3、yat?sen memorial hospital, sun yat?sen university of medical sciences, guangzhou 510120abstract objective to study the role of abnormal concentration of dnase in the development of sle.methods the concentration of dnase was measured by single radial enzyme diffusion method in the sera of 63 sle pati

4、ents.results the concentration of dnase in the patients was sign讦icantly lower than that in healthy inpiduals, significantly lower in patients at active stage than that in remission, and lowest in patients with lupus n ephritis the decrease of serum dnase was n egatively correlated with the in creas

5、e of serum dna the level of dnase was negatively correlated with ana and esr, positively correlated with c3, c4, and negatively correlated with the severity of the disease.conclusion the above data suggest that the decrease of serum dnase makes the persistence of dna in the blood circulation which c

6、ombines with antidna antibody to form immune complex, resulting in autoimmune lesions. the decrease of serum dnase may play an important role in the pathogenesis f sle.【key words lupus erythematosus, systemic deoxyribonucleases已经证实系统性红斑狼疮(sle)患者血循环中dna水平升高，但其升高的原因尚不清楚，冇可能是因为dna 清除机制的缺陷。我们用单相臨扩散法检测sl

7、e患者血清dna卿(dnase)的浓度，并探讨血清dnase浓度异 常与dna升高的关系以及在sle发生发展中所起的作用。材料与方法1.主要试剂：三疑甲基氨基甲烷(tris)、牛胸腺dna、牛胰dna腮i (dnase)、rna fw a(rnase)： fluka公司和 sigma公司产品;漠化乙喘(ethidium bromide, eb)、琼脂糖：华美生物工程公司产品。2仪器：荧光分光光度计：f-2000型，h本hitachi公司产品；紫外透射仪：wp-1型，永嘉上塘教学仪器厂。3. 检测对象：sle患者63例，男6例，女57例，全部为我科1997年9月至1998年3月的住院及门诊患者。

8、 所有患者均符合美国风湿病协会1982年修订的诊断标准。参照文献，患者按临床症状及实验室检查评定病 情活动积分，并分类为活动期患者和缓解期患者、伴肾损患者和非肾损患者。4. 正常对照组：为我市中心血站的健康献血员38例，性别及年龄均与患者组相匹配。5. dnase的测定(单相酶扩散法)：用ph7.2 0 05mol/l tris?hci缓冲液配1%的琼脂糖凝胶20ml,其中含牛胸 腺dna和eb分别为6mg和0.5mg,灌制凝胶板,用直径为1.5mm的打孔器于凝胶板上打孔。加入4卩1样 木(标准dna或待检血清)，37°c湿盒孵育16小时，0.1mol/l的edta终止反应，于紫外透

9、射仪下观察并测 量dna水解环的大小。在一定范围内，水解环的大小与dnase的浓度成正比。6. 血清 dna 含量的测定:取血清 0.lml,加 ph7.2 0 2mol/l tris?hci 缓冲液 0.7ml、rnase(lmg/ml)0.2ml, 37°c 水浴30分钟，加eb工作液(20ug/ml)lml,用荧光分光光度计测定荧光强度。7其他观察指标：ana：间接免疫荧光法，抗dna抗体：金标免疫斑点法，补体c3及c4：免疫化学比浊法， beckman array 360蛋白分析仪。以上检查全部为我科的常规临床检验项目。结果l.dnase标准品的测定:将牛胰dnase分别稀释

10、成10、20、30、40、50、60ng/ml,测量dna水解环的大小 (图1),以dnase的浓度为横坐标、水解环的直径为纵坐标绘制标准曲线，未知标本可根据其水解环的大小 从标准illi线上查得其dnase的浓度。1 6： dnase 标准浓度：60、50、40、30、20、10ng/ml图1 dnase的浓度测定(单相酶扩散法)2.sle患者血清中dnase浓度的测定：共检测了正常人血清38份,sle患者血清63份,其中活动期患者35 例，缓解期患者28例，伴肾损害患者21例。结果见附表。sle患者血清中dnase浓度明显低于正常人；活 动期患者明显低于缓解期患者；伴肾损害患者明显低于非肾

11、损害患者。附表 不同病期sle患者与正常人血清dnase浓度的测定结果 受检対象检测例数 血清 dnase 浓度（土s, ng/ml）t值p值健康献血员3851.23i3.686.128<0.01sle患者6328.52 土8.25活动期3518.68±5.976.454<0.01缓解期2840.81±4.28伴肾损害15.46±5.817.305<0.01不伴肾损害4235.04±4.783.sle患者的血清dnase浓度与dna含量的相关性：63份患者血清用荧光分光光度法检测其dna含量，结 果35例活动期患者的血清dna含量为（3

12、3150） p g/ml（92.06±20.32）, 28例缓解期患者的血清dna含量为 31-90h g/ml（57.18±16.13）,相关分析发现，不论在活动期还是缓解期，血清dnase的浓度都与dna含量 呈负相关（活动期：w 0.754, p< 0.01；缓解期:r=-0.827, p< 0.01）。4.sle患者的血清dnase与ana、抗dna抗体、补体、血沉等的相关性：将sle患者的血清dnase浓度与 ana、抗dna抗体、补体、血沉等作直线相关分析，结果为dnase的浓度与血沉、ana呈负相关（r分别为 -0.701、-0.416, p 值均

13、v 0.01）；与 c3、c4 呈正相关（r 分别为 0.469、0.438, p 值均 v 0.01）；与抗 dsdna 抗体无相关性（r为0.217, p >0.05）o5.sle患者的血清dnase水平与病情积分的相关性：直线相关分析表明，患者的血清dnase水平与病情积分 呈高度负相关（r为一0.884, p< 0.01）«讨论sle的发病机理尚不完全清楚，大量研究表明dna?抗dna免疫复合物在sle的发病以及器官损害中起着重 要作用，患者血中的dna含量比正帘人高，并随病情的活动与缓解而波动，说明患者的确存在dna的代谢 异常。机体清除dna的途径主要是通过d

14、nase的降解作用。我们同时检测了 63例sle患者的血清dna与 dnase,发现患者的dnase浓度低于正常人，活动期患者dnase浓度低下更为明显；dnase低下的程度与 dna水平升高的程度呈负相关，提示dnase活性不足是造成血屮dna升高以及sle发病的重要因素么一。 国外学者检测了 nzb/wf1狼疮鼠血清中的dnase,发现其浓度明显低于同样性别和年龄的正常小鼠，更有 意义的是小鼠先有dnase的低卜（510周），然后才有抗dna抗体的产牛（1216周）。本文实验发现，伴有 肾损害的患者dnase浓度明显低于非肾损害，在63例患者中，血清dnase浓度最低的5例（28ng/ml

15、）患者 全部为伴肾损害的活动期患者；提示dnase的低下在sle肾损害中起着重要作用。在正常机体中，因衰老或因发牛感染、炎症等，都可释放dna到血中，这些dna可迅速被循环中的dnase 降解，其半衰期仅约4分钟。在sle患者，因其血中dnase活性低于正常水平，不能有效地处理急剧增加 的dna,于是多量的dna在体内滞留。总结木文结果并综合文献复习，我们得出以下推理：sle患者体内 dnase活性低下，不能充分行使其水解dna的作用，使得血循环中含dna的自身抗原长期滞留，于是发挥 免疫原性，并抗dna抗体结合形成免疫复合物，随血循环沉积于肾脏等组织器官，造成多系统免疫损伤。 测定患者dna

16、se活性在研究sle复杂的免疫发病机制上貝-有一定意义。参考文献1 mccoubrey?hoyer a, okarma tb, holman hr. partial purification and characterization of plasma dna and its relation to disease activity in systemic lupus erythematosus am j med, 1984,77 : 23-34.2 rumore pm, stein man cr en dogenous circulating dna in systemic lupus er

17、ythematosus: occurrence as multimeric complexes bound to hist one. clin in vest, 1990,86 : 69-743 morimoto c, sano h, abe t, et al. correlation between clinical activity of sle and the amounts of dna in dna/anti?dna antibody immune complexes. j immunol, 1982,139 : i960.4 macanovic m, lachmann pj measurement of deoxyribonuclease in the serum and urine of system lupus erythemoatosus?prone nzb/w mice by a new radial enzyme diffusion assay clin exp immunol, 1997,108 : 220-226.5许禧红，许德淸，谢彦博.sle患者bpmc表面的dna受体及其临