实验用培养基适用性检查标准操作规程

1、起单人prepared by:起草h期date:qc审核h期date:市核人reviewed by:qc审核口期date:审核人reviewed by:qa批准h期date:扌烯人approved by:质量部qd颁发部门issued byqc执行口期effective date臟文件replaced r)rsop-qc-562-02实辦瞬基io性检 杏标磁作删复审口期review date分发部门：distributed toqa,qc分发号distribution no.:目的 purpose为保障微生物检验的准确磁相关工作特制定本规定。范围scope本程序适用于微&物限度测定培养

2、基的适用性检査及相关丁作。responsibility分析员：严格按照木操作规程执行。及时完成各类相关拆。在上管的指导下进行任何可能的00s及偏并调杳。主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何町能的00s和偏外调查。内容procedure1 检验员应根据培养基配伟耀序或培养基各自的说明书配删养基。2 '謂釧菌种及培养基2.1 菌种：2.1.1培养基貝敏度测试所川的菌株传代次数吋j超过5代，从国家药检所或菌种俪中心购买。2.1.2枯草芽f包杆菌(bacillus subtilis)atcc 66332.1.3人肠埃希菌(escherichia coli) atcc 8

3、7392.1.4金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus) atcc 65382.1.5白色斜菌(candida albicans) atcc 102312.1.6黑曲霉(aspergillus niger) atcc 164o4j2.1.7伤寒沙门菌(salmonella) atcc 14()2812.1.8铜绿假小胞菌(pseudomonas aeniginosa) atcc 90272.2 培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。2.2.2人b.酪蛋口消化肉汤 soybean-casein digest broth2.2.3酪蛋白消彳曲月旨 soybean-cas

4、ein digest agar2.2.4沙氏葡萄糖琼脂sabouraud dextrose agar2.2.5肠道菌增菌肉汤 entembacteria enrichment broth mossel2.2.6紫红刨驸匍萄糖琼u旨violet red bile glucose agar2.2.7麦愿几肉汤macconkey broth2.2.8 麦/拗麻脂 macconkey agar2.2.9 rv 沙门氏菌富集肉汤 rappaport vassiliadis salmonella enrichment bmth2.2.10 木wi赖氨酸脱氧胆盐琼脂 xylose lysine deoxyc

5、holate agar2.2.11 lt霧醇氯化钠琼丿曲饼基mannitol salt agar2.3微生物i i 数培养基的适用性检査2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均丿、'、/进行培养基适用性检杳。232菌悬液的制备名称金黄色葡萄球菌atcc 6538瞬假单胞菌atcc 9027菌删备人豆酪蛋门消化肉汤或人豆酪蛋门消化琼d旨人豆酪蛋门消化肉汤或人豆酪蛋门消化琼j旨30°c35°c, 18-24 小时30°c-35°c, 18-24 小时名称枯草菌 atcc 6633白色念珠菌atcc 10231菌株制备大戸

6、酪蛋白消化肉汤或大戸酪蛋h消化，刺旨沙氏衙萄糖琼脂30°c-35°c, 18-24 小吋20°c-25°c, 2-3 天名称黑曲霉atcc 16404菌删备沙氏荷萄臟脂20°c-25°c, 57天 或者宜到 形成良好僦了状态2.3.3 i谜培养物用0.9%无菌氯化钠溶沁ph7.2臓盐缓冲液制成每linl含菌数不大j- loocfii的菌悬 液,制备黑曲每他子悬浮液时，添加3-5ml含0.05% （ml/nil）聚山梨酯）的0.9%无菌氯化钠溶液 或ph7.2磷酸盐缓冲液，将砲子洗脱。然后，用适宜加去吸岀砲子悬液至无菌试管内，用含0.0

7、5% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或ph7.2磷酸盐缓河液制成每lml含孑包了数不人于loocfii 的他 侶液。菌悬液在室温下放直应在2小时内使用，若保存在28°c可在24小时内使用。黑|11| 霉他了悬液町保存在2-8°c,在验讦过的贮存期内例ijo2.4 大9酪蛋白消化肉汤促生氏试验2.4.1取以i.前3利菌悬液各0.1ml（不大jtoocfu）,分另入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的 试管屮，于30°c-35°c培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促住知滋的培养基替代被检培 养基进行上述试验。培养结束后进行观察，如果

8、肉眼能淸晰看到的微牛物的牛长与上批通过促牛: 长试验的培养基的牛长情形基本致贝ij判定此养基通过促牛长试验。反之则判定此培养基不符 定，促心长極2.5 大豆酪蛋白消化琼丿j訝u沙氏衙萄糖琼脂促生长试验2.5.1取以上5利菌悬液各1ml （不大于于100c1u）,分另雌入无菌平皿中，立即倾注人u酪蛋口消化 月旨，侮株试验菌平行制备2个平血，混匀、凝固，置3o°c35°c培养不超过3天，计数，后2种菌 悬液不超过5天，计数。再取后2利菌悬液各少于loocfti,分为肚入无菌平皿中，立即倾注沙氏衙 萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20°c-25

9、76;c培养不超过5天，计数。同时用相应的上井阙促牛©般的培养m弋被粗咅养基进行垃越 进行促牛©式验的培养 基平|吐，鯉物生长劇泌须与n过促生长i期佥的培基旳i吐的彳坯物生长肯况一致财更 好，同i寸将待测定的培养基上的菌落数与已通过促牛长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的 比值应处于70%-200%之间,贝ij判定此培养基通过促牛长试验；反之则判定该培养基不符规定，未2.6 控制菌测wf用培养基的性检查2.6.1控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检杳。2.6.2菌悬液的制备趨菌种菌粗饼1金黄色葡萄球菌atcc 6538人u酪蛋

10、口消化肉汤或人u酪蛋肖化琼脂30°c-35°c, 18-24小吋2铜绿假单胞菌 atcc 9027人豆酪蛋白消化肉汤或人豆酪蛋白消化琼脂30°c-35°c, 18-24小时3枯草芽砲杆菌 atcc 6633人u酪蛋口消化肉汤或人u酪蛋肖化琼脂30°c-35°c, 18-24小吋4畑埃希菌atcc 8739人豆酪蛋白消化肉汤或人豆酪蛋白消化琼脂30°c-35°c, 18-24小时5鼠伤寒沙门菌 atcc 14028人址酪蛋白消化肉汤或人豆酪蛋白消化琼脂30°c-35°c, 18-24小时2.6.3

11、 闵咅猶勿用0.9%无菌氯化钠溶沁ph7.2磷融缓冲液制輕白沁的菌師 菌融直温下 放置应在2小时内使用，若保存在28°c可在24小时内使用。2.6.4控制菌检查川培养基的适）1刖检查项冃包括培慕的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各 培养基的检査测试项h妬用菌株见下表控制腐检查瞬基特性翩菌株州十耐受革兰氏 阴性菌的检测肠道菌增菌肉汤培养基促牛长能力皿埃希菌铜纟勰单胞菌金黄色葡萄球菌畑刨旦汁葡鋼鯨脂促牛长能力+扌8*5能力顾矣希菌 铜绿假单胞菌人肠杆菌的检测麦剧1肉汤促牛:长能力换埃希菌抑制育幼金黄色鯛球菌麦删体腺咅养基船长能力+指示能力畑埃希菌沙门氏菌的检测rv沙门氏菌富集肉汤促

12、生长能力鼠伤寒沙门菌齣能力金黄色葡萄球菌盐琼脂培养 基促牛长能力+柝能力鼠濮沙门菌铜绿假单胞菌的oj漠化十六魅甲脂砒长勒铜钢单胞菌陶矣希菌金黄色制钢菌片露醇氯化钠琼畑誹基促牛长能力+指示能力金黄色窗的检则抑制能力畑埃希菌2.7 液体培养楓生t能力检查収试验菌各0.1ml （含菌数不大于loocfb）（见l表）于被检i咅养基和上-批检验并通过的培养基中，在相 融制菌检査规的培湄s度轴短培獅t间卜培孤两者比较，被检1 耕基与上-批验并测的晞 基比较，微牛物牛长良好并口相当。2.8 固体培养基促牛长能力检査取试验菌各0.1ml （含菌数不大于loocfo）（见上表）分另i赊布于彼检培和上一批检验并通

13、过的培养基 中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最舫轿时间下培养。两者比较，被检培与上一批检验并通 过的培养基比较，微生物生怜良好并一目相当。2.9 液体培养基和固体培基的抑制能力检查収试验菌各0.1ml （含菌数不小于loocfti）（见1：农）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度 如恸寸间下土樣试捡菌应榴生长。2.10 土耕斟际能力检杏取试验菌各0.1ml （含菌数不人于loocfu）（见上表）分别涂布于被检培养基w上一批检验并通过的培养基 屮，在相丿'v控制腐检杳规定的培养温度及时间范|韦1内培养。被检培养基屮生长的菌落在外观和指示反/、'肚 与从此前c检测并批

14、准的培养基批次所获得的菌落是丹i当的。3 参考文件current usp、bp、ep附件及件attachment cmd related documentsr01微生物计数固体培基适h刚检查记r02 她协i数液催咅养基jsffl性检奋尽r03微生物控制菌培养基濒性检査歸 历史 history修订号牛效口期修订内容001 培养基促生长、抑制能力等规定了试验菌的取样鱼tsi group yessamin health标准操作规程standard operating procedure贝码/page: 6 of 8实验用培养基适用性检查标准操作规程standard operating procedu

15、re for growth promotion test of media编号/no： sop-qc-moio版本号/version: 00附件编号attachment no.:r()l微生物计数固体培养基适用性检查记录growth promotion test of solid media for microbial enumeration test培养基名称厂家/批号配制后批号有效期至检验h期培养温度培养箱编号有效期至对照批号有效期至检验员1 操作步骤1.1使用().9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液，制备黑也霉抱了悬浮液时，可以添加().()5%的聚山梨脂8()到缓冲液屮。测

16、试菌悬液m在两小时 内使用，或者在28°c的条件下24小时内使用。1.2取金黄色制萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌悬液各少于loocfu,分别注入无菌平1111中，立即倾注人豆酪蛋白消化琼脂， 每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30°c-35°c培养不超过3天，计数；后2种菌悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于loocfu,分 别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20°c-25°c培养不超过5天，计数。取铜绿假单胞菌、枯草 芽抱杆菌2种菌悬液各少于loo

17、cfu,分别注入无菌平皿屮，立即倾注r2a,每株试验菌平行制备2个平111l,混匀、凝固，置30°c35°c培养不超过3犬。同 时用相应的上-批通过促生长测试的培养基替代被检培养基进行上述试验。1.3进行促生长试验的培养基平1111上，微生物生长情况必须与已通过促生长测试的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌 落数与已通过促生长测试的培养基上的菌落数对比，两者z间的比值应处于70%-200%z间，则判定此培养基通过促牛长测试；反z则判定该培养基不符合 规定，未通过促生长测试。2 记录：菌种菌液批号开始培养 时间/温度结束培养 时间/温度测试培

18、养基菌落数对照培养基菌落数对比生长情况(基木一致或更好)两者比值(70%-200% 之间)观察员结果 判定平皿1平 1111 2平均平皿1平皿2平均tsi group yessamin health标准操作规程standard operating procedure贝码/page: 7 of 8实验用培养基适用性检查标准操作规程standard operating procedure for growth promotion test of media编号/no： sop-qc-moio版本号/version: 00附#号 attachment no:r02微生物计磁体辭基銅性检growth

19、promotion test of liquid media for microbial enumeration test培养基称厂家批号配制后批号ww1至培和编号有效期至对照批号有效期至检验员检验口期1操作步骤1.1使用0.陽无菌氯化钠溶液或ph7. 2磷酸4j缓冲液制备测试菌悬液。测试菌悬液应在两小时内使用，或者在2-8°c的条件下 24小时内使用。1.2取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌3种菌悬液各少刊oocfu,分娜主入灭过菌的含有10ml川鵬蛋口消 化肉汤的试管中，于3()°c35°c培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长测ji式的培养基

20、替代被检培养基进行上述 測佥。培髀朿后进行观察。13如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批逋过灭敏度测试的培养基的生长痔形相同的话，则判定此培养棊通过促生长 测试。反z则判定此®养基不符合规定，未通过促牛长测试。2 -鈕开姆繇时1'沏艇结束瞬时碱艇菌种菌液批巧测册养基 q：长惰况对照培养基 仆长惰况对比生长悄况(基 本致或更好)观察员结果判定祐不杯齡不朴符合科跆口 期 date:复核人 checked by:tsi groupyessamin health标准操作规程standard operating procedure贝码/page: 8 of 8实验用培养基适用性检查标准操作规程standard operating procedure for growth promotion test of media编号/no： sop-qc-moio版本号/version: 00微生物控制菌培养基适用性检查记录培养基名称厂家/批号配制后批号有效期至检验口期培养温度培养箱编号有效期至对照批号有效期至检验员1操作步骤1.1使用0.9%无菌氯化钠溶液或ph7.2磷酸盐缓冲液制备菌悬