食用菌简易制种技术研究(改111)

1、封一 本本科科毕毕业业论论文文（设设计计）食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究学生姓名学生姓名： 柳建文 学号学号： 12550802049 系院系院：生物与食品工程学院 专业专业： 生物科学（师范） 9090指导教师指导教师： 吴映明 副教授 提交日期提交日期： 2016 年 05 月 25 日 2016-3010-0012016-3010-001 注：教师姓名后留有一个空格，后面填写教师职称。下面加下划线。阅后删除此文本框。封二毕业论文基本要求毕业论文基本要求1毕业论文的撰写应结合专业学习，选取具有创新价值和实践意义的论题。2论文篇幅一般为 3000 至 7000 字为宜。3论文应

2、观点明确，中心突出，论据充分，数据可靠，层次分明，逻辑清楚，文字流畅，结构严谨。4论文字体规范按广东第二师范学院本科生毕业论文管理办法（试行） 和“论文样板”执行。5论文应书写工整，标点正确，用计算机打印后，装订成册。广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 1 -本科毕业论文诚信声明本科毕业论文诚信声明本人郑重声明：所呈交的本科毕业论文，是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人

3、和集体均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 学生签名： 时间： 年 月 日 关于论文（设计）使用授权的说明关于论文（设计）使用授权的说明本人完全了解广东第二师范学院关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：1.按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；2.学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务，在校园网上提供服务；3.学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文.本人同意上述规定。学生签名： 时间： 年 月 日广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 2 -摘要摘要 研究家用压力锅

4、对食用菌培养基的灭菌效果及平菇、草菇、杏鲍菇、姬松茸 4 种食用菌组织分离制种技术进行试验，探究食用菌制种的简易途径。结果表明：家用压力锅用于食用菌培养基的灭菌效果好，对 PDA 培养基、原种培养基分别灭菌 15 min、30 min 以上，能达到彻底灭菌的效果。平菇、草菇、杏鲍菇和姬松茸 4 种食用菌的子实体组织分离制种技术简易可行，其中杏鲍菇组织分离制作原种的菌丝生长速度最快，达到 4.65 mm/d，且污染率低。关键词关键词 食用菌 灭菌 组织分离 简易 制种技术广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 3 -Abstrac

5、tAbstractResearch from the household pressure cooker for sterilizing effect of edible fungus culture medium and oyster mushroom, straw mushroom, Pleurotus eryngii, Agaricus blazei Four Edible tissue separating seed technology test, to explore an easy way to Edible Seed. The results showed that: hous

6、ehold pressure cooker for sterilizing have good effect of edible fungus culture medium for PDA medium, original culture media were sterilized 15 min, 30 min or more, to achieve complete sterilization effect. The fuiting body tissue separation seed technology of the chosen 4 edibles - oyster mushroom

7、, straw mushroom, Pleurotus eryngii, Agaricus blazei are simple and feasible, where the mycelial growth rate in Pleurotus eryngii tissue separation of the original production is the fastest, reaching 4.65 mm / d, and low pollution. Key words: edible fungus; sterilization; organizational separation;

8、simple; Seed Technology广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 4 -目录目录摘要摘要.1 1 目录目录.3 3 1.1. 材料与方法材料与方法.5 5 1.1 实验器材.51.1.1 实验材料 .5 1.1.2 实验器具 .5 1.1.3 食用菌 PDA 培养基配料 .5 1.1.4 食用菌原种培养基配方 .5 1.2 实验方法.5 1.2.1 PDA 培养基制作与处理.61.2.2 原种培养基制作与处理 .6 1.2.3 食用菌组织块分离制作原种 .6 2.2. 结果与分析结果与分析.7 7 2.1 P

9、DA 培养基灭菌处理 .7 2.2 原种培养基灭菌处理 .8 2.3 食用菌组织分离制作原种 .9 3.3. 结论结论.1010 参考文献参考文献.1111致致 谢谢.1111 广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 5 -食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究食用菌是生活中人们对可食用大型真菌的通俗称谓，生物学上是指可供食用的具有显著子实体或菌核类组织的一类大型真菌。食用菌属异养型生物，据生活方式的差异可分为腐生、寄生和共生型食用菌，其中腐生型食用菌最为常见，冬虫夏草则是具代表性的共生型食用菌之一。食用菌是低脂肪，低胆固

10、醇，高蛋白质，富含多种维生素、矿物质和膳食纤维的一类食物，其蛋白质中氨基酸种类齐全，人体必需氨基酸含量高，人体对摄入的食用菌蛋白质的利用率高。食用菌中的多糖、生物碱、三萜类、挥发油、香豆精等功能物质，具有增强心血管和肾脏能力、提高机体免疫力、延缓衰老、抑制肿瘤、防癌抗癌等作用，它是人类理想的健康美味食品，享有“植物性食品的顶峰” 、 “健康食品”等美誉。近年来，观赏性食用菌产品开拓了食用菌市场，在发达的城市相继出现灵芝盆栽、香菇小径段木盆和金针菇小径段木盆等，兼装饰性、观赏性和食用性于一体的食用菌栽培产品犹如室内盆栽，成为日常生活的新宠，食用菌微型栽培进入普通家庭将成为食用菌栽培发展的重要方向

11、之一。作为我国第六大农产品，食用菌在栽培种类、新技术开发、经营模式等方面取得令人瞩目成绩，但在菌种栽培、品种多样化、产业规模化、生产标准化、加工增值化、菇餐大众化、贸易国际化等许多方面仍需不断加强，而菌种栽培是后续工作得以顺利进行的基础1。传统食用菌栽培存在工艺繁琐、标准化设备昂贵、耗能高、时间长、人力物力投入大等问题，且作为食用菌生产的关键环节菌种制作过程，杂菌污染不易控制，是食用菌简易栽培需要突破的重要难题。为确保食用菌菌种的质量和效益，制种过程要求严格的无菌技术和无菌操作，若无法自行制种，购买菌种成本需占生产总成本的 20 %以上，无疑成为微型家庭食用菌栽培以及生产上大规模推广的瓶颈难题

12、。本实验通过研究可行性的食用菌栽培灭菌方法和食用菌组织分离简易制种技术，探究一种简易的食用菌制种方法。为家庭食用菌微型栽培、中小学研究性课程学习提供相关理论参考。广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 6 -1.1. 材料与方法材料与方法1.11.1 实验器材实验器材1.1.11.1.1 实验材料实验材料P39 母种(广东省微生物研究所提供)；新鲜平菇、草菇、杏鲍菇、姬松茸子实体（广州市客村综合市场采购） 。1.1.21.1.2 实验器具实验器具立式压力蒸汽灭菌器（SYQ-DSX-280B，上海博讯实业有限公司医疗设备厂） ；3

13、0寸家用压力锅（A30-26.0-80，佛山市南海喜的宝金属制品有限公司） ；洁净工作台（VS-840K-U，苏州安泰空气技术有限公司） ；光照培养箱（LRH-250-G，韶关市泰宏医疗器械有限公司） ；分体式房间空调器（KFR-60LW/E0102，广州华凌空调设备有限公司）等。1.1.31.1.3 食用菌食用菌 PDAPDA 培养基配料培养基配料1马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，蒸馏水 1000 mL，pH 值 7.0 左右。1.1.41.1.4 食用菌食用菌原种培养基原种培养基配方配方1棉籽壳 78 %，麦麸 20 %，过磷酸钙 1 %，石灰 1 %，含水量 60

14、%65 %。1.21.2 实验方法实验方法1.2.11.2.1 PDA 培养基制作与处理培养基制作与处理5洗净马铃薯，挖芽去皮，称取 200 g 后切成 0.2-0.3 cm 厚的薄片于 1000 mL 烧杯，加入蒸馏水至 1000 mL 于电炉上中煮马铃薯，待水沸腾后转文火加热，计时 20 min，马铃薯酥而不烂时，用四层纱布过滤；将马铃薯滤液加蒸馏水至 900 mL 于电炉上继续以文火加热，待水沸腾后加入用 100 mL 蒸馏水溶解的琼脂，不断搅拌，直至溶液变得澄清，再加入葡萄糖溶解，注意补足水量；将配好的培养基，趁热用漏斗分装试管，装液高度为试管高度的 1/51/4，分装时避免培养基粘在

15、试管壁，防止杂菌污染；将试管立放于试管架中，塞上绵塞，每 5 支试管外包报纸扎成一把，并用棉绳扎紧，贴上标签。将装好 PDA 培养基的试管分别置于家用压力锅灭菌处理 2、5、10、15、30、45 min，每组分别处理 10 支，加热至排气阀的盖顶开始转动即可计时，到达计时终点即可将家用压力锅移开电炉；灭菌后趁热摆斜面，及分装后立即摆斜面不做灭菌处理的广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 7 -空白对照组，斜面长度为试管长度的 1/22/3，待试管内的培养基冷却后立放于试管架，置于恒温箱（32 ）培养，72 h 后观察培养基灭

16、菌效果，每 2 d 记录母钟培养基的污染情况，观察两周，发现被污染的试管应立即移除并做好相应记录工作。1.2.21.2.2 原种培养基制作与处理原种培养基制作与处理5过磷酸钙和石灰混溶于水中，加水至没过棉籽壳，浸泡 8 h，将浸料盆立置于水槽约 6 h，直至抓一把培养料捏在手中握紧，以手指缝中有水渗出但水不往下滴为宜，拌入麦麸，并调节至适宜的 pH 值。将培养料装入果酱瓶，边装料边压实，装至瓶口 1 cm 处停止装料，在栽培料中央打孔，擦净瓶口盖好瓶盖。将装好栽培料的果酱瓶分别置于家用压力锅灭菌处理2、5、10、15、30、45、60、75 min，每组分别处理 10 瓶，加热至排气阀的盖顶开

17、始转动即可计时，到达计时终点即可将家用压力锅移开电炉；待栽培料冷却后，与不进行灭菌处理的空白对照组一起置于恒温培养箱（32 ）培养，72 h 后观察栽培料灭菌效果，每 2 d 记录母种培养基的污染情况，观察两周，发现被污染的栽培瓶应立即移除并做好相应记录工作。1.2.31.2.3 食用菌组织块食用菌组织块分离制作分离制作原种原种4将装好原种培养基的果酱瓶于高压蒸汽锅（126 ，60 min）处理，待栽培料冷却后，在超净工作台上酒精灯火焰旁，用解剖刀和镊子分别取生活中 4 种食用菌（平菇、草菇、杏鲍菇、姬松茸）子实体的组织至原种培养基的接种孔，将果酱瓶口和瓶盖在火焰上灼烧后，拧紧至果酱瓶螺纹与瓶

18、盖螺纹刚好卡住为宜，每种食用菌分别接种 10瓶，置于适宜温度的恒温箱培养，生活中几种常见食用菌菌丝适宜生长条件见表 18，每 2 d 观察母种培养基的生长情况，纪录组织块形成菌丝萌发时间、果酱瓶长满菌丝的时间、菌丝的生长状况及污染情况。表 1 几种常见食用菌菌丝适宜生长条件食用菌种类平菇草菇杏鲍菇香菇姬松茸温度/24-2630-3823-2724-2622-26湿度/%60-6563-6560-6560-7060-65pH 值5.4-7.08-96.5-7.53-66.5-6.72.2. 结果与分析结果与分析广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌

19、简易制种技术研究- 8 -2.12.1 PDAPDA 培养基灭菌处理培养基灭菌处理图 1 结果表明，PDA 培养基灭菌效果与灭菌时间呈正比，即 PDA 培养基的污染率随着灭菌时间的延长而降低。空白对照组 PDA 培养基在适宜温度培养 72 h 后污染率可达到 100 %；而采用家用压力锅灭菌 10 min 后，于适宜温度下培养 72 h，培养基上无杂菌生长。这可能是因为在制作 PDA 培养基过程中周围环境较为干净杂菌孢子的量少；也可能与家用压力锅灭菌时，由加热开始到计时时刻，需要长达 30 min 以上的持续加热时间有关。当采用压力锅灭菌 10 min 后，置于适当条件下培养 72 h 后污染

20、率可降至零，因而为保证彻底杀灭 PDA 培养基中的杂菌孢子，在对培养基进行无菌处理时可采用家用压力锅对 PDA 培养基进行灭菌处理，且灭菌时间不少于 15 min。0.0020.0040.0060.0080.00100.00120.0002510153045灭菌时间/min污染率/%家用压力锅图 1 PDA 培养基灭菌效果图2.22.2 原种原种培养基培养基灭菌处理灭菌处理图 2 结果表明，原种培养基灭菌效果与灭菌时间呈正比，原种培养基的污染率随着灭菌时间的延长而降低。利用家用压力锅对原种培养基进行 15 min 以上灭菌，置于适宜温度下培养 72 h，原种培养基均无污染，家用压力锅对原种培养

21、基的灭菌处理方式可行。这可能是浸泡棉籽壳时，添加了 5 %的石灰进行浸料，将部分杂菌杀死；也可能是采购的实验材料为新分离的棉籽壳，杂菌孢子少，同时浸泡棉籽壳的过程，促使杂菌孢子萌发，萌发后的孢子更容易被杀灭；还可能与家用压力锅灭菌时，由加热开始到计时时刻，需要长达 30 min 以上的持续加热时间有关。原种培养基在家用压力锅中灭菌 15 min 即可达到彻底灭菌的效果，但考虑到生产的实际要求，为保证测定将培养基中的杂菌孢子杀死，应当根据实际情况（如培养基的量、培养基成分、培养基广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 9 -类型等

22、）适当调整浸料时间，并严格控制好灭菌时间。0.0020.0040.0060.0080.00100.00120.00025101530456075灭菌时间/min污染率/%家用压力锅图 2 原种培养基灭菌效果图2.32.3 食用菌组织食用菌组织分离分离制作原种制作原种表 2 结果表明，常见食用菌组织分离制作原种中，平菇、草菇和杏鲍菇的子实体组织分离接种至原种培养基后，于适宜条件下培养 34 d，子实体组织的菌丝即可萌发，而姬松茸子实体组织菌丝的萌发则需要 7 d 左右。利用食用菌子实体组织分离制作原种时，平菇、草菇、杏鲍菇和姬松茸组织分离技术均可用于制作其原种，杏鲍菇子实体组织菌丝的平均生长速度

23、最快，达到 4.65 mm/d，而姬松茸子实体组织的菌丝平均生长则最慢，仅为 1.88 mm/d。在洁净工作台取食用菌子实体的组织，接种至原种培养基制作原种，平菇的污染率最高，为 28.71 %，而杏鲍菇组织分离制作原种则无污染。综合考虑食用菌子实体组织菌丝萌发平均时间、菌丝平均生长速度和污染率，杏鲍菇子实体组织分离制作原种时菌丝生长速度快、污染率低、成功率高，是中小学实验探究中理想的食用菌子实体组织制作原种的食用菌种类；姬松茸子实体组织菌丝萌发时间较长、菌丝平均生长速度慢，但姬松茸子实体组织分离制作原种的污染率低，且经济效益较高，姬松茸栽培的原种也可采用子实体组织分离制作原种技术；平菇和草菇

24、子实体组织分离制作原种的污染率相对较高，但两者均为日常生活中常见的食用菌种类，栽培范围广，且子实体组织分离制种的菌丝生长速度也较快，严格无菌操作时可尽量降低菌种污染率，平菇和草菇子实体组织分离制种也是值得采用的原种制种技术。实验中选用的 4 种食用菌子实体因组成成分的差异，使得组织分离接种中存在分离组织方法的难题，食用菌组织分离制作原种可据食用菌的组成成分选择适合可行的接种方法。其中平菇纤维化程度高，利用解剖刀和接种环进行接种操作时难度较大，广东第二师范学院广东第二师范学院 本科毕业论文本科毕业论文食用菌简易制种技术研究食用菌简易制种技术研究- 10 -接种效率低，且容易造成接种失败。实验发现

25、接种前将所有接种用具于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，在洁净工作台酒精灯火焰旁用解剖剪剪取黄豆大小的剥去平菇子实体外表皮的组织于培养基，再用镊子进行接种，提高接种效率的同时，还有效降低了平菇组织分离制作原种的污染率。表 2 几种常见食用菌组织分离制作原种菌丝生长情况食用菌种类平菇草菇杏鲍菇姬松茸菌丝萌发平均时间(d)3348菌丝平均生长速度（mm/d）3.924.324.651.88污染率（%）28.7118.1805.563.3. 结论结论本研究以探究一种简易的食用菌制种方法为出发点，运用家用压力锅对食用菌的PDA 培养基和原种培养基进行灭菌时间梯度处理。结果表明，家用压力锅在食用菌制种中的灭菌效果好

26、，其中 PDA 培养基灭菌 10 min、原种培养基灭菌 15 min 可彻底灭菌。应用中为了提高制种成功率，保证食用菌菌种的质量，采用家用压力锅灭菌时，建议 PDA 培养基至少灭菌 15 min、菌种培养基至少灭菌 30 min，现实应用中因培养基不同，培养基酸碱度及浸泡时间存在差异，灭菌时间可据实际情况适当延长。利用 4种常见食用菌子实体组织分离制作原种的试验中，平菇、草菇、杏鲍菇和姬松茸的子实体组织均可用于食用菌菌种制作。相对而言，杏鲍菇子实体组织分离制种效果最好，在食用菌简易栽培生产、高校食用菌栽培课程及中小学课外研究性学习等领域，均可采用杏鲍菇组织分离制种技术获得杏鲍菇原种；姬松茸制种周期相对较长，但污染率低，经济效益较高；对于常见的食用菌平菇和草菇的子实体组织分离制种，也是不错的简易制种技术。生活中可根据具体需要，综合协调各方面因素，选择适合的食用菌种类进行组织分离制种获得所需食用菌原种。试验中，主要在家用压力锅的食用菌培养基灭菌效果和生活中的 4 种食用菌组织分离制种技术进行探究。PDA 培养基和菌种培养基分别于家用压力锅中灭菌 15 min、30 min 以上能达到彻底灭菌的效果，该结果与张建新等学者对家用电压力锅用于WS 琼脂灭菌的探讨结果相符2。