检验中级考试小结

1、最深刻的脚步留在最泥泞的路上！ 天明精心制作临床检验基础1、 血液检验真空采血管 灰色-氟化钠、草酸钾抗凝-测定血糖 金黄色-分离胶血涂片制备技术：血滴越大、角度越大、推片速度越快则血膜越厚。进行红细胞渗透脆性试验时使用的抗凝剂为肝素凝血项目使用109mmol/l枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:9。血沉用枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:4。1. 血细胞手工检验（1）血细胞形态嗜多色红细胞属于未完全成熟的红细胞，由于胞质中含有RNA而被染成灰色、蓝色，嗜多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃，常见于溶血性贫血。H-J小体位于成熟或幼红细胞胞质中，是保内残留的RNA，常见于巨幼细胞性贫血、溶

2、血性贫血及脾切除术后。点彩红细胞见于铅中毒、溶血性贫血患者等。 卡波环出现原因是核膜残余物或胞质脂蛋白变性。Russell 小体是浆细胞胞质内的一种数目不等、大小不一、染成肉红色的球形小体，是浆细胞内质网分泌免疫球蛋白受阻或黏蛋白变性所致，常见于多发性骨髓瘤、伤寒、疟疾。粒细胞自晚幼粒开始失去分裂能力，逐渐发育成熟。涂片法白细胞分类时，涂片尾部幼稚细胞多中性粒细胞增多并核左移称再生性左移，常见于各种病原体的感染，特别是急性化脓性细菌感染。核左移伴中性粒细胞减少或者正常称为退行性核左移，多见于机体抵抗力低下的严重感染，常见于伤寒感染。杆状粒细胞5%称轻度左移 10% 中度 25%并出现幼稚粒细胞

3、时成为重度核左移（2）血细胞计数血细胞计数板手工计数 白细胞 四角大方格 N/4*10*106*稀释倍数 红细胞、血小板 中央大方格中的四角+中央中方格 N*5*10*106*稀释倍数 嗜酸性粒细胞、精子 10个大方格 N*106*稀释倍数 *计数域的误差属于固有误差，无法避免，不属于技术性误差。Miller窥盘计数Ret 大、小方格面积比为9:1小方格计数红细胞数，大方格计数网织红细胞数。少儿在6-9天和4-5岁时，外周血淋巴细胞与中性粒细胞基本相等约为50%。正常人外周血涂片中，中性杆状粒细胞比例为1-5%。 HCT测定WHO推荐的首选常规方法为微量离心管，经典方法-温氏法。温氏法血细胞比

4、容测定，EDTA-K2抗凝血加入温氏管中离心后血液分为5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层、帯氧红细胞层。读数时读取还原红细胞层柱高即为血细胞比容。典型MCHC增高仅见于球形红细胞增多症，但罕见超过380g/l。巨幼细胞性贫血直方图波峰右移，峰底增宽，明显的大细胞不均一性。缺铁性贫血时RDW最早出现变化。 嗜酸性粒细胞稀释液中乙醇、丙酮、乙二醇等作用为嗜酸性粒细胞保护剂，伊红、固绿等为嗜酸性粒细胞着色剂，甘油可以防止乙醇等液体挥发，碳酸钾、草酸铵可破坏其他细胞和增强嗜酸性粒细胞着色。嗜酸性粒细胞计数结果可应用于观察急性传染病的预后、判断肾上腺皮质功能、观察

5、大手术患者和烧伤患者的预后。猩红热急性期，可能乙型溶血性链球菌产生酶激活补体，引起嗜酸性粒细胞增多。血沉减慢见于红细胞数量明显增多以及纤维蛋白原含量下降。红细胞渗透脆性试验多用于红细胞膜缺陷筛查，对遗传性球形红细胞增多症具有重要诊断价值。Ham试验对诊断PNH有重要价值。Coombs试验对免疫性溶血性贫血有重要诊断价值。血红蛋白电泳对异常血红蛋白病有重要诊断价值。纤维蛋白原、球蛋白、CM、胆固醇等升高均加快血沉；清蛋白、卵磷脂增加能减缓红细胞沉降率。正常人血浆比密约为1.025-1.030。浓缩血小板在20-24度温度下，保存期为7天。再生障碍性贫血中MPV降低2.血细胞分析仪国际血液学标准化

6、委员会公布的血细胞分析仪的性能评价指标：可比性、准确性、总重复性、精密度、线性范围。血细胞计数参考方法：红细胞、白细胞计数参考方法为单通道电阻抗法；血小板为流式细胞仪。网织红细胞生成指数（RPI）=网织红细胞计数（%）*（患者HCT/正常人HCT）*（1/网织红细胞成熟天数），反映的是网织红细胞生成速度是正常人的多少倍。使用血细胞分析仪计数网织红细胞时，血小板聚集可引起假性升高。Hb测定：1.ICSH推荐参考方法-氰化高铁血红蛋白比色法：高铁氰化钾将各种血红蛋白转化为高铁血红蛋白（SHb除外，无法转化SHb），而后与CN-结合成HiCN，最大吸收峰540nm，转化液推荐使用文-齐液。试剂保存不

7、得使用塑料瓶，可冷藏，不可冰冻，因前两者均会造成CN-丢失造成HB转化不完全，测定结果偏低。缺点：试剂有毒；SHb无法转化为氰化高铁血红蛋白。2. SDS-Hb法 无公害血细胞分析仪采用多角度偏振光散射法（MAPSS）测定时：1、0度前角光散射可粗略测定细胞大小；2、10度狭角光散射可测定细胞内部结构相对特征3、90度垂直光散射测定细胞内部颗粒和核分叶情况；4、90度垂直去偏振散射光区分中粒与嗜酸粒。激光与细胞化学法即应用激光散射与细胞化学法进行白细胞分类过氧化物酶活性：嗜酸性粒细胞中性粒细胞单核淋巴、嗜碱性粒细胞=0激光散射法血小板计数时，高角度（5 -10）主要检测细胞折射指数；

8、低角度（2-3）主要测量细胞大小。电阻抗法血小板计数时采用浮动界标技术。电阻抗、射频及特殊染色法进行血细胞分类时，检测幼稚细胞加入硫化氨基酸，幼稚细胞结合更多硫化氨基酸，因此幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，成熟细胞随后被破坏。3.血型检验卫生部要求：抗A、抗B效价128，亲和力15s，凝集素效价1:4，必须具有检出A2、A2B的能力。Rh血型阴性确证应做弱D鉴定，弱D抗原较弱一般不与盐水中抗D试剂反应凝聚，必须采用酶法、抗球蛋白法、凝集胺试验等检测。低离子凝聚胺技术对kell血型系统中的抗K不敏感。简易致敏红细胞血小板血清试验是检测血小板血型较为理想的方法。ABO血型4种表现型、6种基因型ABO基

9、因位于9号染色体短臂ABO基因中B编码的糖基转移酶是D-半乳糖转移酶，A编码的是N-乙酰-D-半乳糖转移酶。 血型物质不存在于脑脊液中 RH抗原目前仅发现在红细胞上存在，血小板表面存在血小板特异抗原以及ABO、HLA等相关抗原。 患者红细胞直接抗人球蛋白试验阳性可以导致Rh血型鉴定出现假阳性。孟买血型基因型为hh，但h基因为无效基因，其红细胞表面无A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗体。稀有血型血液保存方式一般选用冷冻红细胞。引起非溶血性发热反应最常见的原因是抗白细胞抗原的抗体，因此可用少白红细胞预防非溶血性发热反应。为预防TA-GVHD，临床选用辐照红细胞，破坏免疫活性淋巴细胞。选用

10、洗涤红细胞来预防因输血发生的严重过敏反应。输注全血补充血小板时12h内的全血视为新鲜血；补充粒细胞时8h内全血视为新鲜血；补充凝血因子时24h内全血视为新鲜血。用酶处理过的红细胞进行血型鉴定时，MN抗原会被破坏。2、 尿液检验：1. 尿液理化检验甲醛对尿中细胞、管型有固定作用，用于Addis计数防腐甲苯可在尿液表面形成一层薄膜，常用于尿糖、尿肌酐、蛋白等化学成分测定防腐；浓盐酸用于17羟、17酮类固醇激素测定的防腐；冰乙酸用于24H尿醛固酮测定的防腐。痰液观察分层情况，可用少量苯酚防腐。正常人尿液中GLU含量为5.0mmol/24h尿液T-H蛋白紫外光谱分析出现最大吸收峰的波长为277nm尿本

11、周蛋白检测：筛选方法-热沉淀-溶解法、对甲苯磺酸法 确诊方法 SDS-PAGE、免疫电泳、免疫固定电泳本周蛋白的本质是免疫球蛋白轻链。肾小管重吸收功能受损多为小分子蛋白尿，肾病综合征多为选择性蛋白尿。重金属中毒多引起肾间质性肾炎，主要表现为肾小管损伤，重吸收与浓缩功能减退。Mb蛋白尿的特点 Mb能溶于80%饱和硫酸铵溶液正常人尿胆红素阴性，尿胆原阴性或弱阳性。苯丙酮酸尿症患者新鲜尿液具有“老鼠屎”样臭味。尿胆原测定常用Ehrlich法，苯丙酮酸尿症的筛查试验为三氯化铁定性法，酪氨酸尿的过筛试验为亚硝基萘酚定性法。加热乙酸法测定本周蛋白尿PH要求为4.5-5.5。2. 尿沉渣检验肾移植后发生排斥

12、反应尿液细胞学检查改变：核退变，红细胞、白细胞、上皮细胞形成混合细胞团块，淋巴细胞，肾小管细胞，管型和背景坏死物。其中两项恒定指征为淋巴细胞和肾小管细胞。人巨细胞病毒感染，尿液中含有巨细胞病毒包涵体的细胞是上皮细胞。尿管型显微镜检查应在低倍镜下观察20个视野，正常人尿液检查RBC0-3/HP，WBC0-5/HP。Addis 1h 尿白细胞计数，正常女性白细胞14万/小时。正常人尿渗量为600-1000mOsm/(Kg H2O)3. 尿液分析仪检验干化学法中，高浓度尿蛋白可使尿比重测定偏高；Vc可尿糖测定假阴性；青霉素药物偏酸可使尿蛋白测定假阴性；青霉素类药物可使尿白细胞测定减少或假阴性；Vc可

13、使尿隐血试验假阴性。干化学法测定尿胆原时，胆色素原、胆红素、吲哚、吩噻嗪类都可产生干扰；大多数尿液试剂带没有测定尿胆原阴性，因此干化学不能用于梗阻性黄疸尿胆原测定。干化学法测定尿胆红素时，维生素C、亚硝酸盐、氯丙嗪、盐酸苯偶氮吡啶都可产生干扰。CCCLS规定：干化学法的确证实验 尿蛋白确证实验-磺基水杨酸法；尿葡萄糖确证实验-葡萄糖氧化酶定量法；尿胆红素确证实验-Harrison法；尿白细胞和红细胞-镜检；尿比重-折射仪法三、排泄物与分泌物检验1.粪便检验：检查钩虫卵用饱和盐水漂浮法，蛲虫卵用透明膜试纸法，蛔虫卵用离心沉淀集卵法，血吸虫卵用毛蚴孵化法；阿米巴滋养体直接镜检 大便镜检到巨噬细胞常

14、见于急性菌痢。消化道出血50ml开始出现黑便，粪便隐血阳性消化道出血5ml左右。消化道寄生虫虫卵中体积最小的是华支睾吸虫卵。艾滋病相关性腹泻，由寄生虫引起腹泻最常见的是隐孢子虫。2.阴道分泌物检验：BV 的常见病原体是阴道加德纳菌，患者白带性状多为奶油状，含大量粘液与中性粒细胞。诊断加德纳菌性阴道炎的指标是：1.线索细胞；2.分泌物PH4.5；3.胺试验阳性；4.阴道分泌物稀薄均匀。阴道正常PH为4.0-4.5四、体腔液检验1.脑脊液检验：脑脊液蛋白质定量比色法优于比浊法，正常人脑脊液中蛋白质含量不到血浆蛋白的1%；Froin综合征是一种梗阻性脑病；潘氏实验灵敏度高，部分正常脑脊液可以呈极弱阳

15、性。 脑脊液蛋白电泳有前清蛋白带，血清蛋白电泳一般无前清蛋白带。 化脓性脑膜炎 LDH明显增高，经治疗，LDH无明显减低甚至进一步增高，提示预后不好。结核性脑膜炎ADA增高明显，多发性硬化症脑脊液中髓鞘碱性蛋白MBP含量上升，MBP可以作为多发性硬化症的辅助诊断指标。正常人脑脊液无红细胞，白细胞(0-10)*106 主要是淋巴与单核细胞。化脓性脑膜炎，脑脊液明显浑浊，静置后可形成凝块或沉淀；结核性脑膜炎，脑脊液毛玻璃样轻度浑浊，静置后表面可有网膜形成；蛛网膜下腔梗阻，脑脊液可呈黄色胶冻样。脑脊液同时出现胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离，称为Froin-Nonne综合征，是蛛网膜下腔梗阻的特点

16、。正常人脑脊液压力为80-180mmH2O，健康人腰穿所得脑脊液比密为1.006-1.008，正常人脑脊液PH为7.31-7.34。2.浆膜腔积液检验：引起胸腔积液最常见的恶性肿瘤是肺癌，以周围型肺癌常见。恶性间皮瘤染色质分布于核的一侧，病理性核分裂象多见，多核瘤细胞多见。小细胞未分化癌特征性表现-癌细胞体积小、胞质少、裸核样，核染色深呈墨水滴样。 心包积液草黄色常见于尿毒症引起的心包积液，黄色多见于黄疸。胸腔积液中最常见的肺癌细胞类型为腺癌女性腹水常见类型为浆液性乳头状囊腺癌3.关节积液检验：类风湿患者关节积液中可发现胆固醇结晶RA主要累及小关节、肿大僵硬；关节腔积液白细胞5000*106

17、葡萄糖不明显降低。化脓性关节炎时WBC6000*106 葡萄糖明显降低。正常人关节积液WBC（0-50）*106 /L。4.羊水检验：粘多糖沉积病产前诊断简易指标是羊水细胞内甲苯胺蓝定性试验和糖醛酸半定量测定，胰腺纤维囊性病产前诊断最佳指标是羊水r-谷氨酰转移酶测定五、脱落细胞学检验：绝经期妇女阴道涂片中可见到阴道上皮高度萎缩，细胞出现退化现象，核染色质疏松或消失，称为“早熟角化细胞”。挖空细胞特指HPV感染出现的核周空穴细胞；瓢形核是产后性外底层细胞的特征；核内包涵体多见于HSV病毒感染，印戒细胞是胃腺癌的一种细胞。宫颈癌以鳞状细胞癌为主，脱落细胞中找到挖空细胞应做HPV分型或活检。宫颈鳞癌

18、以非角质化型常见。支气管肺泡灌洗液，结节病时以T淋巴细胞为主；特发性肺间质纤维化以中性粒细胞增多为主，伴嗜酸粒增多；卡氏肺孢子虫感染时，以淋巴细胞增多为主；急性呼吸窘迫综合征以中性粒细胞为主。判断细胞良性或恶性，主要依靠细胞核的改变判断细胞分化倾向主要依靠细胞质的改变临床免疫学检验1、 免疫分子及其检测（1） 抗原抗体 抗原制备：颗粒性抗原 可溶性抗原：组织和细胞破碎，抗原粗提，而后是抗 1、 抗原抗体反应与制备 原提纯（超速离心、选择性沉淀、层析、电泳法） 免疫球蛋白片段与人工抗原制备 抗体制备：多抗（纯化-SPA与IgG结合亲和层析、鉴定） 单抗制备 基因工程抗体木瓜蛋白酶可以将IgG裂解

19、成一个Fc和两个Fab片段胃蛋白酶将IgG裂解成F(ab)2与小肽片段。制备单抗隆抗体时常用的细胞融合剂是PEG1000-2000。基因工程抗体较于杂交瘤单抗隆抗体最重要特点：非异源性免疫球蛋白分型依据是CL抗原性不同进行分类PEG 沉淀法或比浊法常用于检测CIC，简单易行，但特异性差；常用PEG最终浓度为3-4%，PEG沉淀试验不能反映小分子循环免疫复合物，2%只能沉淀大分子，5%选择性沉淀CIC的能力消失。PEG沉淀法中PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，所用PEG浓度越小，分离血清免疫复合物一般采用PEG6000。补体参与检测CIC方法包括C1q固相法、抗C3-CIC-ELIS

20、A法，由于IgA不能结合补体，所以补体参与检测CIC法不能检测IgA抗体。离子种类对免疫复合物形成速度的影响：H2P04->SO42->NO3->CLO4->SCN-单克隆抗体的特异性取决于克隆细胞的筛选免疫监视功能-肿瘤发生免疫自稳功能-自身免疫病2、 抗原抗体反应类型：凝集与沉淀反应（1）凝集反应RF采用散射比浊法检测的主要是IgM胶乳凝集试验所用载体多为0.8um聚苯乙烯胶乳，（2）沉淀反应免疫散射比浊中，颗粒直径远小于入射波长时，则散射光分布比较均匀，称为Ray-leigh散射。若颗粒直径接近或大于入射波长时，则散射光分布不均匀，称为Mie散射。介于两者之间，则

21、称为Rayleigh-Mie散射。速率散射比浊中，加入PEG的目的是加速抗原抗体复合物的形成，缩短反应时间，常用PEG8000。速率散射比浊免疫分析是抗原抗体结合反应的动态测定。速率散射比浊法，为避免出现后带现象，常使抗体过量；此外还加入了抗原过量检测系统，反应后再加入适量抗原，若出现第二峰信号，则提示第一峰信号均由待测抗原产生且结果可靠；若未出现第二峰信号提示待测抗原过量。火箭免疫电泳作为抗原定量只能测定ug/ml单向扩散试验若应用多克隆抗体测量M蛋白时，测定会偏高？双向扩散试验试管法先后加入试管的是：含抗体的琼脂、普通琼脂、含抗原的琼脂。目前临床检验中不推荐使用对流免疫电泳与火箭免疫电泳，

22、共同原因是电泳载体的电渗作用？火箭免疫电泳结合放射自显影技术灵敏度可提升1000倍CIEP counter immunnoelectrophoresisRIE rocket immunoelectrophoresisIEP immunoelectrophoresisIFE immunofixation electrophoresis对流免疫电泳中IgG抗体四个亚型表现不同，IgG1和IgG2由于电渗作用向阴极移动，而IgG3和IgG4向阳极移动。化学交联法常用炭化二亚胺将胶乳上的羟基与被交联物上的氨基缩合在一起包被过程中最常用的缓冲液为PH9.6 PBS3、 标记免疫技术（1）荧光免疫技术FI

23、TC 激发光490-495nm 发射光520-530nm 黄绿色荧光RB200 570nm 600nm 橘红色荧光TRITC 550nm 620nm 橙红色荧光，适合与FITC配对双标记PE 490nm 595nm 红色 ，多与FITC用于流式细胞仪双标荧光抗体效价常用倍比稀释，非特异性染色最弱的稀释度作为其效价；若采用琼脂双扩散法测定，荧光抗体效价需大于1:16.荧光抗体染色技术中直接法较其他方法特异性高、非特异性染色少。FITC 在酸性溶液中荧光强度显著降低荧光素标记抗体的鉴定：抗体效价（抗体活性）、荧光素和蛋白质结合比（F/P）。F/P越高，说明抗体上结合的荧光素越多，反之越少。一般用于

24、固定标本的抗体F/P=1.5左右，用于活细胞染色F/P=2.4为宜。荧光偏振免疫测定主要用于测定小分子抗原，是临床药物浓度检测的首选方法；缺点是不适用于大分子物质。（2）放射免疫技术RIA为标记抗原竞争法测定抗原；IRMA分为直接和双抗体夹心法均为标记抗体测定抗原。125I衰变产生r射线，3H衰变产生的是射线比放射性是指单位质量标记物的放射强度，常用Bq/ug，Ci/g或Ci/mol表示，一般标记抗原的比放射性越高，试验灵敏度高。放射化学纯度是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，一般要求95%放免技术中滴度常采用一株抗血清做系列稀释后再与标记抗原反应。（3） 酶免疫技术（4）化学发光

25、免疫分析技术发光免疫分析根据化学反应不同可以分为三类：1、直接参与发光反应 ，如吖啶酯类标记物2、 以发光酶标记，如AP；3、以能量传递参与氧化还原反应的非酶标记物，如三联吡啶钌标记物。（5）胶体金免疫技术（6）免疫组化免疫复合物与游离标记物分离的方法：1、 活性炭吸附法主要用于测定小分子抗原或药物。（2） 补体及检测CRP、甘露糖结合凝集素（MBL）与IgM、IgG1/2/3免疫复合物可以激活补体经典途径，而凝集的Ig、病原微生物（内毒素等）可以激活补体替代途径。 补体结合试验含三个系统：反应系统、补体系统、指示系统。有五种成分参与：已知抗体、待测抗原、绵羊红细胞、溶血素、补体。若标本中无待

26、测抗原，则已知抗体与溶血素-绵阳红细胞结合，激活补体，产生溶血作用，若标本中含待测抗原，则抗体与抗原结合，不产生溶血现象。 补体成分测定： CH50测定经典途径总补体活性，免疫溶血法测定的是单个补体的活性；补体结合试验是用于检测某种抗原或者抗体，火箭免疫电泳可用于测定单个补体的含量。血清补体C3含量最高，C2含量最低抗体与相应抗原结合后，CH2补体结合位点暴露出来才能激活补体。补体激活后C2b裂解为小片段。补体参与的溶血试验应使用2个单位的溶血素，CH50法测定的是总补体活性，单位U/ml经典途径激活补体的IC，可以用C1q结合试验来测定。（3） 细胞因子及其受体检测IL-4能够促进免疫球蛋白

27、类别转换，IL-2能促进B细胞增生、分泌抗体，同时IL-2可以促进T细胞增殖与活化。IFN-r是由受抗原刺激后活化的T细胞产生（Th1细胞产生），抑制Th0向Th2分化。IL-5不仅能刺激嗜酸性粒细胞增殖和分化，而且对嗜酸性粒细胞有趋化作用IL-1、TNF-可阻止或减轻革兰阴性菌感染所致休克的发生。IL-6常用于刺激B细胞杂交瘤细胞增殖。IL-1、IL-6刺激肝脏分泌急性期蛋白，TNF-刺激产生IL-1、IL-6。IL-18具有趋化活性细胞因子多数是低分子量蛋白质、多以单体形式存在，以非特异性方式发挥作用，不受MHC限制。（4） 粘附因子与白细胞分化抗原检测2、 免疫细胞分离及检测（一）免疫细

28、胞分离、检测淋巴细胞分离1、 外周单个核细胞分离 聚蔗糖-泛影葡胺分层液法最为常用Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离方法，Percoll分离液法是一种连续密度梯度离心分离法。2、 淋巴细胞与单核细胞分离 经分离后的PBMC中主要是单核细胞与淋巴细胞，少量血小板与RBC（RBC可用NH4Cl或低渗法去除，血小板可多次离心去除） 单核细胞去除可以利用单核细胞粘附玻璃、塑料和葡聚糖的特性以及吞噬铁粉的能力去除。对玻璃和塑料制品的粘附性：巨噬细胞树突状细胞B细胞T=RBC，常利用单核细胞这个特性将其分离。 另外也可以用Percoll连续密度梯度离心法，四层：死细胞层（死细胞、血小板）

29、、单核细胞层、淋巴细胞层、红细胞和粒细胞层。3、 淋巴细胞亚群的分离 E花环分离法 成熟T细胞都表达CD2，即E受体（绵羊红细胞受体） 尼龙绵柱分离法 利用B细胞易粘附于尼龙棉表面 补体细胞毒法 剔除表达特定抗原的细胞，借助补体介导的细胞毒作用 亲和板分离 利用特定抗原抗体结合 免疫磁珠 流式细胞仪分选淋巴细胞数量检测：正常人外周血B细胞占淋巴细胞的8%-15%，T细胞占淋巴细胞的60%-80%，NK细胞占5%-8%。1、 表面CD抗原：所有T细胞表面均表达CD3、TCR；成熟T细胞均表达CD2；部分表达CD4/CD8。2、 微量细胞毒试验 利用抗原抗体反应激活补体依赖的细胞毒作用，以此作为显

30、示系统3、 花环试验B细胞数量检测：表面标志物所有B细胞均表达SmIgM，成熟B表达SmIgM、SmIgD、CD19、CD20，B1细胞CD5+、CD23-；B2则CD5-/CD23+B细胞表面具有IgG Fc受体及补体受体，用相应抗体致敏的红细胞（EA）能与B细胞结合成EA花环，或EA与补体结合后，借助补体受体与B细胞结合成EAC花环。B细胞表面EB病毒受体-C3d受体。Raji细胞是由B细胞建株而来，表面有大量C3b、C1q和C3d受体，没有SmIg，利用这些受体与结合补体的循环免疫复合物结合，再加入标记的抗人球蛋白，可检测循环免疫复合物。CD19主要表达于外周血成熟B细胞，CD5用于区分

31、B1/B2细胞。外周血中，未成熟B细胞表达mIgM，成熟B表达SmIgM和SmIgD，根据是否表达CD5可以将B细胞分为：B1和B2细胞。B1细胞表达CD5，不表达CD23；B2不表达CD5，表达CD23；B1、B2细胞都表达CD19、CD20、CD22。B1细胞与机体的免疫调节、自身免疫病以及B细胞源性肿瘤有关。B2细胞是执行体液免疫的主要细胞，是外周血主要的B细胞群。CD2表达在全部T细胞和部分NK细胞，CD3表达于全部T细胞，是T细胞的共同抗原；CD4、CD8只表达于部分T细胞。CD80主要表达在活化的B淋巴细胞表面，能与T细胞表面的CD28分子相互作用，刺激T细胞活化。淋巴细胞功能检测

32、：1、 T细胞增生试验，也称淋巴细胞转化试验 体外刺激T细胞增生的刺激物可分为非特异性（PHA、刀豆素、美洲商陆）和特异性（PPD和白假丝酵母菌、白喉类毒素等），PHA仅能刺激T细胞增殖，LPS仅能刺激B细胞增殖。 刀豆蛋白A、PHA、美洲商陆能刺激T细胞增殖分化，细菌脂多糖只能刺激B细胞增殖活化，PPD主要特异性刺激T细胞，也能刺激B细胞增殖。2、 T细胞介导细胞毒试验 主要用于检测Tc细胞3、 T细胞分泌功能测定 细胞因子测定Th1细胞分泌IL-2、IFN-r 、TNF-，促进细胞免疫Th2 细胞分泌IL-4、IL-10、IL-5、IL-13，促进体液免疫，抑制细胞免疫IL-4能够增强Th

33、2细胞反应，促进IgE类别转换的一类细胞因子，支气管哮喘与过敏反应可见其上升。IL-4启动休止期B细胞进入DNA合成期。IL-6是支持浆细胞增殖分化的关键因子，骨髓瘤患者的骨髓间质细胞和浆细胞瘤本身可以分泌高水平的IL-6。4、 体内试验 OT试验、PHA试验等当特异性抗原记忆T细胞再次与过敏原接触时，可迅速增殖分化为CD4+ Th1细胞（TTDH细胞）和CTL细胞。DiGeorge综合征发病机制先天性胸腺发育不良B细胞功能检测1、B细胞增生试验 刺激物有LPS、SPA等2、酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验是一种既能检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量的方法。原理是利用抗原包被固相载体，再加入

34、抗体产生细胞，诱导抗体分泌，ELISA，测定出抗体分泌量，并且可以在光镜下观察抗体形成细胞。3、溶血空斑试验 反向溶血空斑试验是一种体外检测人类Ig分泌细胞的方法，利用SPA-RBC与IgG结合。4、各种Ig量定量测定 重要指标NK活性测定 测定人NK细胞活性多以K562细胞株为靶细胞，测定小鼠NK细胞活性则以YAC细胞株为靶细胞。吞噬细胞功能检测中粒细胞功能检测趋化功能： 1、Boyden小室、皮窗试验Chediak-Higashi综合征时中性粒细胞趋化功能下降 吞噬、杀菌能力与单核巨噬细胞比较，中粒细胞的吞噬杀伤活性最强。中粒吞噬能力明显下降见于补体或抗体缺陷中粒细胞酶代谢能力降低-慢性肉

35、芽肿 显微镜检查白假丝酵母菌吞噬率 溶菌法 硝基蓝四氮唑还原试验（NBT）（活性与磷酸己糖旁路代谢活性相关，即与G6PD酶活性相关；慢性肉芽肿患者NBT阳性细胞降低）巨噬细胞功能检测 1、炭粒廓清试验2、斑蝥敷贴法测吞噬功能 3、溶酶体酶测定 4、细胞毒作用测定巨噬细胞具有直接吞噬和杀伤病原体和肿瘤细胞的能力，还具有抗原加工、提呈和免疫调节的作用，巨噬细胞直接参与II和IV型超敏反应，不直接参与I、III型超敏反应。巨噬细胞表面含清道夫受体、FcrR、TLR、补体受体。淋巴细胞转化试验是检测淋巴细胞免疫功能的经典试验，其中PHA属于非特异性刺激物。临床常见的B细胞功能缺陷是X连锁无丙种球蛋白血

36、症。锡克试验是接种白喉类毒素，观察机体是否产生抗毒素反应；该实验用以评价体液免疫功能(2) 流式细胞术流式细胞仪测定细胞内细胞因子浓度要防止细胞因子向细胞外释放和漏出，所以活化时需要加入莫能菌素等阻止蛋白质运输到细胞膜。流式细胞仪中收获率与纯度之间有负向对应关系，鞘液的主要作用是包裹在样本流周围，使其处于喷嘴中心位置保证检测精确性，同时可防止样本细胞靠近喷孔壁堵塞喷孔。3、 免疫器官（略）4、 临床免疫疾病与检验1、超敏反应性疾病与免疫检验变应原在偏酸或偏碱环境可出现假阳性IgE与IgG4参与I型超敏反应I型超敏反应效应细胞是肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞。目前诊断I型超敏反应方法多用：

37、皮内试验+特异性IgE测定，放射变应原吸附试验RAST用于检测特异性IgE，斑贴试验主要用于寻找接触性皮炎的过敏原。放射变应原吸附试验（RAST）是将纯化的变应原吸附于固相载体，加入待测血清，再用放射性核素标记的抗IgE抗体，定量检测特异性IgE水平。皮试时常设置阴性和阳性对照，变应原的稀释保存液或生理盐水用于作阴性对照。阳性对照用盐酸组胺。皮试假阳性见于：变应原变质或污染，变应原稀释液偏酸或偏碱，患者有皮肤划痕症。II型超敏反应（ADCC效应）IgG和IgM与NK、巨噬细胞表面FcrR结合，激活补体产生溶细胞复合体，损伤细胞。糖尿病患者反复注射胰岛素，体内产生了大量抗胰岛素抗体，再次注射胰岛

38、素时，形成免疫复合物沉积于血管基底膜上，激活补体，血管通透性增加，局部出现红肿、出血，为人类局部过敏。 使用化妆品引起面部水肿、渗出、痒痛等，属于皮肤再次接触相同抗原发生的IV型变态反应，即接触性皮炎。接触性皮炎-IV型变态反应血清病-、SLE、RA、链球菌感染后肾小球肾炎等-III型变态反应新生儿溶血-II型荨麻疹-I型2、 自身免疫病与免疫检验ANA性质主要是IgG，无器官特异性和种属特异性，间接免疫荧光法为抗核抗体检测的最佳方法，免疫芯片法最敏感。高滴度抗RNP见于混合结缔组织病（MCTD）I型自身免疫性肝炎血清标记性抗体是高滴度的ASMA抗体。柯萨奇病毒能够感染机体并激发机体免疫系统攻

39、击胰岛细胞引起糖尿病。抗着丝点抗体对CREST综合征有很高的敏感性和特异性自身红细胞凝集试验所用标本为受检者的全血3、 免疫增生病与检验IL-4可启动休止期B细胞进入DNA合成期，IL-5促进B细胞增生，IL-6促使B细胞分化为浆细胞，正常情况下IL-6可反馈抑制IL-4。高水平IL-6是浆细胞瘤的原因之一。M区带的电泳位置可以大致反映出免疫球蛋白的类型，一般IgG型多位于-慢r区，IgA型位于-快r区，IgM型多位于2或r区，IgD多位于或r区。轻链病患者尿中可以检测到本周蛋白，由于其分子量小，容易迅速从肾脏排出，故血中反而呈阴性，检出率不如尿标本。4、 免疫缺陷病与检验HIV除感染CD4+

40、T细胞外，还能感染巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和脑组织中的小胶质细胞。（抗原递呈细胞）HIV早中期B细胞克隆增多、Ig增多。ADA缺陷是种联合免疫缺陷病，见于婴儿。普通易变型免疫缺陷病属于B细胞免疫缺陷病。5、 感染性疾病与检验6、 肿瘤与免疫检验7、 移植免疫检验同系移植是指移植物取自遗传基因与受者完全相同或基本相似的供者，如同卵双生者。HLA I类分子表达于各种有核细胞表面，以淋巴细胞、白细胞表面最高；血小板与网织红细胞也有表达，但成熟红细胞、神经细胞与滋养层细胞不表达。HLA II类抗原主要表达于B细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞及其他抗原递呈细胞表面。移植反应中受者T细胞对供者MHC分

41、子直接识别称为直接途径，间接途径是受者T细胞识别经过受者APC加工处理的、来源于供者MHC分子肽。间接识别以CD4+T细胞为主。移植物保存或处理不当时，血液中存在微生物等可导致超急性排斥反应。HLA分型试验可用细胞分型、血清分型、基因分型和混合淋巴细胞反应，淋巴细胞转化试验用于检测T细胞功能。常用于检测HLA抗原的血清学试验是补体依赖的细胞毒试验-微量淋巴细胞毒试验。混合淋巴细胞反应，常用于检测HLA-D抗原的细胞反应。B受者细胞与经丝裂霉素C处理的A供体细胞之间的单相混合淋巴细胞反应可以预测相容性，结果可靠。移植前如果受者血清中存在抗供者淋巴细胞抗体，80%会发生超急性排斥反应，因此必须做H

42、LA交叉配型，常用交叉配型试验是淋巴细胞交叉毒性试验。HLA-DR、DQ等II类抗原仅分布于B细胞或巨噬细胞等递呈细胞表面，其检测需排除HLA I类抗原干扰，多采用待测细胞为纯化的B细胞。PCR-SBT方法是一种通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定。MHCII类基因决定免疫应答发生及强弱。 MHC基因是复等位基因，均为共显性，决定MHC分子多态性。HLA II类分子的免疫球蛋白样区是1、1区8、 衰老免疫检验9、 生殖免疫检验10、 神经系统免疫检验临床生物化学检验1、 三大营养物质、维生素、微量元素等生化检验（1） 蛋白质和含氮化合物生化检验清蛋白功能：1、维持血浆胶体渗透压 2、运

43、输营养物质与其他 3、组织修补材料前清蛋白功能：1、运输甲状腺激素、视黄醇等 2、组织修补材料醋酸膜纤维蛋白电泳时，1带含1抗胰蛋白酶、1酸性糖蛋白以及HDL、AFP2带主要含铜蓝蛋白、结合珠蛋白以及2巨球蛋白带有LDL、转铁蛋白、C3/C4以及2微球蛋白、纤维蛋白原r带主要是免疫球蛋白与CRP正常人血清蛋白电泳中白蛋白染色带最深，1带最浅。凝胶过滤法利用蛋白质分子量大小不同进行分离琼脂糖凝胶电泳主要利用蛋白所带电荷以及分子量大小不同分离，SDS-PAGE去除蛋白所带电荷大小的影响，主要根据分子量大小精密分离。稳态电泳，又称为置换电泳，是指分子颗粒的电泳迁移在一定时间后达到稳态，如等电聚焦电泳

44、和等速电泳。电泳按原理可以分为：移动界面电泳、区带电泳和稳态电泳双缩脲测定蛋白质波长为546nm。改良酚试剂测定蛋白质反应后有色物质最大吸收峰在750nm附近。成人体内水分占70%（二）糖代谢生化检验糖原中主要化学键是1,6糖苷键糖原合成：由1-磷酸葡萄糖与UTP生成UDP葡萄糖，即葡萄糖的活化，而后每分子UDP葡萄糖加入糖原链。肌肉中含糖原的量最多饥饿一天时血糖主要来源是糖异生小肠上皮细胞吸收葡萄糖的主要形式是继发性主动运输，I型糖原累积症缺乏葡萄糖-6-磷酸酶，6-PG不能转化为GLU，智力低下多早亡。II型糖原累积症全身糖原堆积，多早亡。III型糖原累积症-脱枝酶缺乏IV型糖原累积症-分

45、枝酶缺乏葡萄糖测定IFCC推荐参考方法为己糖激酶法，我国常用方法为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法。 糖尿病出现白内障，主要是由于过高的葡萄糖计入晶状体转化成山梨醇，而山梨醇脱氢酶减少导致山梨醇堆积溢出晶状体，最终导致蛋白质变性沉淀，形成白内障。OGTT试验-75g葡萄糖，250ml水溶解，5min内口服完IGT-血浆FPG<7.0mmol/l，OGTT>=7.8mmol/l且<11.1mmol/l。ADP/AMP促进糖分解产能，ATP促进糖异生低血糖是指GLU<2.8mmol/lHbA1c>6.5%说明糖尿病控制不良（3） 脂质和脂蛋白代谢生化检验正常人血清胆固醇酯占

46、总胆固醇的70%甘油三酯合成过程中第一个中间产物是磷脂酸，而后才是甘油一酯。甘油本身并不是脂类肝内脂肪运出障碍是导致脂肪肝的主要原因LDL受体能与ApoB、ApoE以及氧化修饰的LDL结合，介导LDL/VLDL、ox-LDL等进入细胞代谢。清道夫受体能与残粒ApoE、ox-LDL等有高亲和力，是LDL受体途径以外的脂质摄取途径。ApoC II 激活脂蛋白脂肪酶LPL，ApoA I 能激活卵磷脂脂蛋白脂酰转移酶（LCAT）。脂肪动员中限速酶是脂蛋白脂肪酶即甘油三酯脂肪酶，其他参与酶有：肝脂酶、LCAT等。TG酶法测定是先将TG水解为甘油和脂肪酸，然后利用甘油激酶测定甘油，所以TG酶法测定实际上是

47、测定游离甘油+甘油三酯。HDL-C测定的参考方法是超速离心法，超速离心后HPLC测定。Friedewald公式：LDL-C=TC-(HDL-C+TG*0.2) 使用条件：1、空腹血清不含CM；2、TG<4.6mmol/l；3、III型高脂血症除外。（4） 酶学生化检验一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。二级标准品：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级

48、标准品比较而确定。主要用于常规方法的标化和控制物的定值。决定性方法-一级标准品-参考方法-二级标准品-常规方法在形成酶-底物复合物时，主要是酶的构象发生变化对维持红细胞正常生理环境具有极其重要意义的氧化还原体系是谷胱甘肽（GSH）人体中GGT含量最高组织是肾，血中GGT主要来自肝脏，红细胞中几乎没有GGT。rGT同工酶中，rGT2/3见于正常人，rGT1仅见于重症肝炎者，rGT4与胆红素升高有关。 朗伯比尔定律 A=K（摩尔吸光系数）C（溶液浓度）L（光径），同一溶液A只与溶液浓度和光径相关，与光强度无关。K=（V总*106）/(E *V样品*L光径)POD作为工具酶时，4-氨基安替比林（4-

49、AAP）最后呈色为红色；邻联甲苯胺最后呈蓝色。 1-抗胰蛋白酶缺乏可导致青壮年肺气肿，延胡索酸乙酰乙酸水解酶缺陷可导致I型酪氨酸血症；甲硫氨酸合成酶缺陷可导致同型胱氨酸尿症，苯丙氨酸羟化酶缺陷可导致苯丙酮尿症，患儿有智力障碍。 生物芯片利用介电电泳分离待测标记样品，大大提高了分离效率盐析法常用于粗提蛋白，吸附分离法多用于酶的粗制品分离，酶活性不受影响，有机溶剂沉淀法分辨率高，不需拖延，但易失活。（5） 维生素和微量元素代谢生化检验宏量元素主要是：Na、K、Cl、Ca、Mg、N、S、P等微量元素是指占人体重量的1/10000以下，每人每天需要量在100mg以下，主要是铁、锰、锌、铜、铬、钴、硒、

50、碘、氟等。有害元素主要：镉、汞、铅、铝肝豆状核变性又称为Wilson病，是常染色体遗传的铜代谢障碍病。慢性铜中毒会在眼角膜形成沉积环，可有语音含糊不清、震颤等症状。锌缺乏可表现异食癖、性发育障碍。VD缺乏-佝偻病B2缺乏-口角炎PP缺乏-癞皮病VC-坏血病B12-恶性贫血甲硫氨酸合成酶的辅酶是维生素B12，四氢叶酸是一碳传递单位。胰岛素辅助因子的元素是铬，LDH与ALP中含有Cu微量元素硒能调节维生素A、C、E、K吸收与消耗原子吸收分光光度法测定锌时，光源应采用锌元素空心阴极灯。（6） 体液、酸碱平衡紊乱检验高渗性脱水，细胞外液水丢失多于钠丢失，细胞内外液均减少，水从细胞内流向细胞外，以细胞内

51、液减少为主。等渗性脱水以血液浓缩为主，组织间液与细胞内液变化不明显。低渗性脱水，细胞内外液均减少，以组织间液减少为主，细胞外渗透压下降，水从组织间液流入细胞。血清钠、钾测定的参考方法是火焰光度法，常用方法为离子选择性电极法。神经细胞动作电位产生是由于细胞外钾离子顺电势差流入细胞内，静息时神经细胞外正内负，复极时是Ca2+外流。所以钾升高时，神经细胞兴奋性增强，而心肌细胞静息电位差下降，兴奋性下降。心肌细胞动作电位由Na离子快速流入，Ca流入也参与其中，复极时主要是钾离子流出与钠钾泵。Ca离子上升时，心肌细胞兴奋性增强，而神经细胞由于复极效率下降，兴奋性下降。光谱技术可以分为发射光谱、吸收光谱和

52、散射光谱分析；紫外分光光度、原子吸收分光光度法都属于吸收光谱分析，原子吸收分光光度法按激发原子化的方式分为火焰原子吸收分光光度法、化学原子吸收分光光度法、石墨炉原子吸收光度法。血氧含量是指隔绝空气条件下，血液中实际含氧量。氧容量是指HB最大结合氧量。血液中缓冲碱BB包括HB、血浆蛋白、HCO3-/H2PO4-等波尔效应是指PH改变会影响Hb携氧能力的现象，何尔登效应是氧气与血红蛋白的结合促使CO2释放。血气标本不能及时测定，需要保存在有冰块的水中，目的是防止糖代谢消耗O2，产生CO2，PH下降。持续呕吐或鼻胃吸入使大量H+丢失，肾脏对HCO3-重吸收减少，使尿Cl-排除减少，引起Cl-响应型代

53、谢性碱中毒。原发性醛固酮增多使H+、K+排除增多，HCO3-与Na重吸收增加，Cl-排出增多，引起Cl-抵抗型代谢性碱中毒。酸中毒，HCO3-/H2CO3<20;碱中毒，HCO3-/H2CO3>20。二、各器官、各系统疾病生化检验（1） 肝胆疾病生化检验AFP半衰期4-5天结合胆红素中葡萄糖醛酸的主要供体是UDPGA血胆红素测定标本须避免阳光直接照射，以免胆红素结构变型。肝脏是生成尿素的唯一器官，是因为肝脏含有精氨酸酶，能催化精氨酸水解成鸟氨酸和尿素，还含有CPS-I，胞质中含有精氨酸代琥珀酸合成酶、精氨酸酶。人体内次级胆汁酸包括脱氧胆酸和石胆酸以及甘氨酸、牛磺酸的结合物。 初级胆

54、汁酸是指鹅脱氧胆酸和胆酸及其结合物。游离胆红素与重氮试剂反应慢，为间接反映阳性；结合胆红素与重氮试剂迅速作用产生颜色反应，称为直接反应阳性。溶血性黄疸，IBIL高度增加，尿胆原强阳性，尿胆红素阴性肝细胞性黄疸DBIL、IBIL均增加（肝细胞活性下降与胆道堵塞均存在），尿胆原正常或升高，尿胆红素增加。阻塞性黄疸时DBIL高度增加，尿胆原减少或消失，尿胆红素强阳性（2） 肾脏疾病生化检验慢性肾衰竭时活性VD3生成不足是导致低钙血症的主要原因。NAG反映肾小管（近曲小管）损伤一次性尿渗量可鉴别肾前性少尿与肾小管坏死导致的少尿，肾前性少尿，其肾小管浓缩稀释功能正常，一次性尿渗量>450mOsm/(kg*H2O)；肾小