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文档简介
1、液相色谱仪原理 液相色谱分离系统由两相固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相、离子交换树脂或多孔性凝胶;流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子(以下称溶质)与溶剂(即流动相或洗脱液)以及固定相分子间的作用,作用力的大小,决定色谱过程的保留行为。第1页/共31页液相色谱仪原理液相色谱的应用 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用
2、受到一定程度的限制,据统计只有大约20%20%的有机物能用气相色谱分析;而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制,它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析,大约占有机物的70 70 80% 80%。 第2页/共31页液相色谱仪原理液相色谱的组成 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据分析系统 等五大部分组成。 第3页/共31页高压输液泵液相色谱仪原理 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一,其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细,
3、所填固定相粒度很小,因此,对流动相的阻力较大,为了使流动相能较快地流过色谱柱,就需要高压泵注入流动相。 第4页/共31页高压输液泵液相色谱仪原理 输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动,流量精度和重复性为0.5%0.5%左右。此外,还应耐腐蚀,密封性好。第5页/共31页FL2200液相色谱仪介绍采用步进电机驱动凸轮的双柱塞双级密封机构,保证泵运行平稳、无泄漏;采用步进电机驱动细分技术及压力反馈技术降低运行噪声,更进一步减低压力波动并可实现恒流、恒压控制。高压输液泵主要的特点和功能第6页/共31页FL2200液相色谱仪介绍采用大屏幕LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运行参数,且全部显示均
4、汉化。高压输液泵主要的特点和功能第7页/共31页FL2200液相色谱仪介绍采用单片机控制,可实现许多智能化功能,如色谱文件设置及存贮(可存贮10个以上的文件),设置参数菜单化、自动诊断、维修提示、各种历史参数储存、操作使用提示等功能,符合GLP规范,且显示界面全是中文,阅读十分方便。高压输液泵主要的特点和功能第8页/共31页FL2200液相色谱仪介绍采用自动压力反馈技术,当泵压力出现波动时,控制泵的步进电机转速,来补偿压力的变化,保证输液压力更稳定;采用流动相压缩率补偿技术,保证在梯度淋洗时,减少由于流动相组份变化而引起的混合液压缩率发生变化而造成的流量波动,保证流量更加稳定;高压输液泵主要的
5、特点和功能第9页/共31页FL2200液相色谱仪介绍高压输液泵主要的特点和功能双泵对控梯度淋洗,只要两个同型号的泵加一个高压混合器即可实现二元高压梯度淋洗,不需要专用的带梯度控制的控制器或工作站;与工作站联用可实现高压多元梯度淋洗;第10页/共31页FL2200液相色谱仪介绍高 压 输 液 泵 工 作 模 式 等度模式:为最常用的模式,流量输出为恒流。 程序模式:有二种工作方式,第一种与另外一个泵配合完成梯度 流量控制;第二种为根据设定的时间流量程序进行流量控制。 恒压模式:此种方式是以柱前压为恒定方式来工作。 从控方式:这种工作方式是在梯度方式工作时,使被设定泵工作 于另一个泵的从属模式,此
6、时另一个泵必定是程序模式。 设定方式:开机进入工作界面后,将光标一移至模式,然后 根据屏幕最底行的提示进行设定。第11页/共31页FL2200液相色谱仪介绍高压输液泵工作界面(等度)第12页/共31页FL2200液相色谱仪介绍梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的。 第13页/共31页FL2200液相色谱仪介绍高压输液泵工作界面(梯度)第14页/共31页紫外检测器紫外检测器FL2200液相色谱仪介绍原理:基于被分析组分对特定波长紫外光的选择
7、性吸收定量基础:比耳定律,AKCL优点:1)对温度和流速不敏感 2)可用于梯度洗提第15页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外/可见光检测器的主要性能指标波长范围:195600nm波长精度: 1nm 波长重复性: 0.1nm基线噪声:110-5AU/h 基线漂移:210-4AU/h光谱带宽:8nm流过池体积:8ul第16页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器主要的特点和功能 单色器采用1200条/mm的全息凹面光栅,双光束光路,波长调节使用正弦丝杆与步进电机,氘灯和光电池全部采用日本滨松公司的产品第17页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器主要的特点和功能采用微处理器作
8、为控控制核心,具有自检、波长自动校正、自动点燃氘灯等。仪器采用5英寸的带背光液晶点阵显示屏,既可显示字母、数字,又可显示色谱图形,仪器的设定界面全部中文化,使人一目了然,良好的人机对话界面第18页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器主要的特点和功能仪器的工作模式有以下三种:1.单波长检测;2.时间-波长程序检测3.停泵扫描检测。单波长检测和扫描检测时屏幕上均有色谱图显示。由于采用了大屏幕液晶显示,屏幕上除了显示色谱图以外,还可显示实时波长位置,时间,AU或光源能量值等等,信息量丰富。第19页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器主要的特点和功能仪器具有二路色谱数据处理机(色谱
9、数据工作站接口),还有与PC机连接的RS232接口。仪器还具有可记录灯的更换日期、点灯的累计时间、灯能量、等与GLP对应的功能.第20页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫 外 检 测 器 工 作 模 式 单波长检测模式:为最常用的模式,以某一特定波长为检测基础。 扫描检测模式:以某一段波长为检测范围,观察样品在这一段波长 上的紫外吸收变化。在此模式工作时,必须停止泵的运转。 时间波长程序模式:在检测过程中,波长可以根据设定的时间而 变化。 设定方式:进入开机界面后,按1号键进入单波长或时间波 长模式,按2号键进入波长扫描模式 第21页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫 外 检 测 器
10、开 机 界 面F U L IF U L I第22页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器工作界面(单波长检测)FL2200FL2200第23页/共31页FL2200液相色谱仪介绍紫外检测器工作界面(波长扫描检测)第24页/共31页FL2200液相色谱仪介绍仪 器 的 组 成 1FL2200等度液相色谱仪的组成:1.高压输液泵2.高压进样阀3.液相色谱柱4.紫外检测器5.溶剂箱第25页/共31页FL2200液相色谱仪介绍仪 器 的 组 成 2FL2200梯度液相色谱仪的组成:1.高压输液泵2台2.梯度混合器3.高压进样阀4.液相色谱柱5.紫外检测器6.溶剂箱第26页/共31页FL2200液相色谱仪介绍FL2200定性、定量重现性
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