溶血对生化检验结果的影响PPT课件

1、溶血的定义溶血对生化检验结果的影响溶血标本的处理标本溶血的原因如何避免溶血第1页/共30页一、溶血的定义溶血是红细胞破坏溶血是红细胞破坏, ,红细胞的一些组分释红细胞的一些组分释放进入血清或血浆，导致实验样品出现特有的放进入血清或血浆，导致实验样品出现特有的红色增加。很多因素都可以使红细胞破坏，发红色增加。很多因素都可以使红细胞破坏，发生溶血，从而干扰监测，使检验结果失去真实生溶血，从而干扰监测，使检验结果失去真实性和准确性，影响疾病的诊断和治疗。性和准确性，影响疾病的诊断和治疗。第2页/共30页溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素。和影响因素。溶

2、血后溶血后显著增高显著增高的有的有ASTAST、ALTALT、LDHLDH、K+K+、TBILTBIL、TPTP、ALBALB等；等；溶血后溶血后显著降低显著降低的项目有的项目有GLUGLU、CRCR等。等。第3页/共30页（一）溶血对肝功能测定的影响1.天门冬氨酸氨基转移酶（AST） 溶血造成AST升高可能是由以下两个方面的原因引起(1)人类红细胞中AST活性约为血清中的40倍，当标本溶血时红细胞破裂后释放AST，势必引起血清AST活性的升高从而使溶血标本的结果明显高于未溶血标本。(2)溶血后血清颜色加深，致使测得的吸光度值增高。第4页/共30页2 2、谷氨酸、谷氨酸- -丙酮酸转氨酶（丙酮

3、酸转氨酶（ALTALT） 红细胞中红细胞中ALTALT活性约是血清中活性约是血清中7 71515倍。严重溶血（倍。严重溶血（HbHb约约6.5g/L6.5g/L）时，可使）时，可使血清血清ALTALT由由20U/L20U/L增高到增高到26.5U/L26.5U/L（增加约（增加约27%27%）。因此溶血后）。因此溶血后ALTALT含量测定的增高含量测定的增高主要来源于细胞内主要来源于细胞内ALTALT的大量释放。的大量释放。 可见与可见与ASTAST相比，相比，ALTALT受溶血影响轻受溶血影响轻些。些。第5页/共30页3 3、乳酸脱氢酶（、乳酸脱氢酶（LDHLDH） 红细胞和血小板中含有丰富

4、的红细胞和血小板中含有丰富的LDHLDH，红细胞中，红细胞中LDHLDH的含量是血清的的含量是血清的160160200200倍，故受溶血影响最大。在倍，故受溶血影响最大。在测定环节上都有可能发生不同程度的测定环节上都有可能发生不同程度的血小板破坏，而影响血小板破坏，而影响LDHLDH测定，使其测定，使其测定结果偏高。测定结果偏高。第6页/共30页4 4、谷氨酰转肽酶（谷氨酰转肽酶（GGTGGT） 由于红细胞内由于红细胞内GGTGGT含量很低，轻含量很低，轻微溶血对其测定结果影响不大，但重微溶血对其测定结果影响不大，但重度溶血则有影响度溶血则有影响第7页/共30页5 5、总蛋白（总蛋白（TPTP

5、） 总蛋白的测定通常选用双缩脲法，总蛋白的测定通常选用双缩脲法，主波长主波长540nm,540nm,而血红蛋白在而血红蛋白在555nm555nm有吸收有吸收峰，试验表明如果溶血标本中峰，试验表明如果溶血标本中HbHb 0.5g0.5gL L时无干扰；而高时无干扰；而高HbHb，会使结，会使结果偏高，可以做样品空白来消除影响。果偏高，可以做样品空白来消除影响。第8页/共30页6 6、总胆红素（、总胆红素（TBILTBIL） 重氮法测定重氮法测定TBILTBIL，最后生成红紫色，最后生成红紫色的偶氮胆红素，主要在波长为的偶氮胆红素，主要在波长为540nm540nm560nm560nm处有光吸收。而

6、处有光吸收。而HbHb在波长在波长540nm540nm550nm550nm处有光吸收，恰与偶氮胆红素的比处有光吸收，恰与偶氮胆红素的比色波长相近。因此溶血后细胞破裂时大色波长相近。因此溶血后细胞破裂时大量量HbHb进入血清进入血清, ,势必造成势必造成TBILTBIL测定值的升测定值的升高高, ,是是TBILTBIL测定的正向干扰因素。测定的正向干扰因素。第9页/共30页 此外，由于此外，由于HbHb重氮试剂反应形成的重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素，溶血对重氮法产物可破坏偶氮胆红素，溶血对重氮法测定胆红素同时存在负向干扰，使测定测定胆红素同时存在负向干扰，使测定结果偏低，但该作用较轻微

7、，因此溶血结果偏低，但该作用较轻微，因此溶血后由于后由于HbHb对测定结果的干扰，对测定结果的干扰，TBILTBIL的测的测定结果往往偏高。定结果往往偏高。第10页/共30页（二）溶血对血脂测定的影响1 1、总胆固醇（、总胆固醇（TCTC） 试验表明如果溶血标本中试验表明如果溶血标本中HbHb1.5g1.5gL L无干扰；而高浓度时因无干扰；而高浓度时因HbHb的固有颜色的固有颜色干扰，会使结果偏高。干扰，会使结果偏高。第11页/共30页2 2、甘油三酯（甘油三酯（TGTG） 除去上述如总胆固醇影响因素外，除去上述如总胆固醇影响因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶目前所用甘油磷酸氧化酶过氧化物过氧化

8、物酶法和乙酰丙醇显色法都以测量甘油酶法和乙酰丙醇显色法都以测量甘油为基础，而红细胞膜磷脂可被磷脂酶为基础，而红细胞膜磷脂可被磷脂酶作用，产生游离甘油，所以溶血后测作用，产生游离甘油，所以溶血后测定结果偏高。定结果偏高。第12页/共30页3 3、载脂蛋白载脂蛋白A(APOA)A(APOA)及载脂蛋及载脂蛋(APOB)(APOB) 免疫透射比浊法使用最广泛，以免疫透射比浊法使用最广泛，以抗原抗体为基础，血红蛋白可使测定抗原抗体为基础，血红蛋白可使测定结果升高，故标本溶血后测定结果偏结果升高，故标本溶血后测定结果偏高。高。第13页/共30页（三）溶血对肾功能测定的影响1 1、尿素（尿素（UREA)U

9、REA) 无论是二乙酰无论是二乙酰肟法还是脲酶肟法还是脲酶法，溶血均可导致光谱蓝色部分吸法，溶血均可导致光谱蓝色部分吸光度值升高对结果都有干扰，导致光度值升高对结果都有干扰，导致结果偏高。结果偏高。第14页/共30页2 2、尿酸、尿酸(UA) (UA) 试验表明如果溶血标本中试验表明如果溶血标本中HbHb1g1gL L会干扰；是因为测定波长会干扰；是因为测定波长546mm546mm时因时因HbHb固有颜色固有颜色潜在影响使测定结果潜在影响使测定结果偏高偏高( (比色法比色法) ) 。 第15页/共30页3 3、肌酐（、肌酐（CreCre） 苦味酸法测定苦味酸法测定CreCre的特异性较差，的特

10、异性较差，易受其它还原性物质影响，主要是维易受其它还原性物质影响，主要是维生素生素C C、酮体、丙酮酸等假肌酐干扰。、酮体、丙酮酸等假肌酐干扰。假肌酐物质亦可与苦味酸形成颜色反假肌酐物质亦可与苦味酸形成颜色反应，导致测定值发生偏差。这种假肌应，导致测定值发生偏差。这种假肌酐物质红细胞中最多，血清中较少，酐物质红细胞中最多，血清中较少，故溶血后红细胞中假肌酐物质的释放故溶血后红细胞中假肌酐物质的释放是造成测定值发生偏差的主要原因。是造成测定值发生偏差的主要原因。第16页/共30页 溶血释放出的物质导致溶血释放出的物质导致JaffeJaffe反应反应 而致测定结果的升高。而致测定结果的升高。Jaf

11、feJaffe反应指血反应指血浆中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，生浆中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，生成黄红色的苦味酸肌酐复合物的反应。成黄红色的苦味酸肌酐复合物的反应。第17页/共30页（四）溶血对电解质测定的影响1 1、钾（、钾（K K+ +） 细胞内液的主要阳离子，约细胞内液的主要阳离子，约9898的钾存于细胞内，红细胞内钾浓的钾存于细胞内，红细胞内钾浓度约为度约为105mmol/L105mmol/L，而血清中仅有，而血清中仅有3.5 mmol/L3.5 mmol/L5.4 mmol/L5.4 mmol/L，红细胞，红细胞中钾的含量比血清中高中钾的含量比血清中高2323倍。因此倍。因此溶血造成血

12、清钾明显升高，增高主溶血造成血清钾明显升高，增高主要来源于红细胞内钾的大量释放。要来源于红细胞内钾的大量释放。第18页/共30页 有报道表明血清游离血红蛋白有报道表明血清游离血红蛋白在在2.52.52.8g/L2.8g/L时血清钾增高时血清钾增高14%14%16%16%，血清游离血红蛋白达，血清游离血红蛋白达6.6g/L6.6g/L时血清钾增高可达时血清钾增高可达41%41%，所以应在，所以应在样品采集后样品采集后1h1h内应将红细胞与血清内应将红细胞与血清分离。并且在分析血清钾的结果时分离。并且在分析血清钾的结果时应引起高度注意。应引起高度注意。第19页/共30页2 2、氯（、氯（CLCL-

13、 -） 血浆中氯约为血浆中氯约为103mmol/L103mmol/L，红，红细胞中氯约为细胞中氯约为4954mmol/L4954mmol/L。溶血。溶血会导致细胞内的氯离子转移到血清会导致细胞内的氯离子转移到血清中，从而引起了血清氯离子测定值中，从而引起了血清氯离子测定值的升高的升高第20页/共30页3 3、磷（、磷（P P） 实验表明如果溶血标本中实验表明如果溶血标本中HbHb1g/L1g/L影响很小，而在影响很小，而在HbHb等于等于2.8g2.8gL L时影响较大，所以应在采血时影响较大，所以应在采血后后30min30min内分离血细胞，否则会因磷内分离血细胞，否则会因磷酸酯从酸酯从RB

14、CRBC中释放而会使结果偏高。中释放而会使结果偏高。 第21页/共30页（五）溶血对葡萄糖测定的影响葡萄糖葡萄糖(GLU)(GLU) 葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖氧化酶法测定GLUGLU的特异的特异性较强，干扰物较少，但过氧化氢酶性较强，干扰物较少，但过氧化氢酶易受到其它物质的影响，如维生素易受到其它物质的影响，如维生素C C、谷胱苷肽均因能竞争谷胱苷肽均因能竞争H H2 2O O2 2而导致负偏而导致负偏差，样品中某些强的酶会促使差，样品中某些强的酶会促使GLUGLU降降解而导致测定值明显下降的。如果在解而导致测定值明显下降的。如果在血清或血浆加入血清或血浆加入NaFNaF、KFKF作为酵解抑作

15、为酵解抑制剂样品收集后立即去蛋白时，溶血制剂样品收集后立即去蛋白时，溶血样品也可以用。样品也可以用。第22页/共30页（六）溶血对心肌酶谱测定的影响 由于由于LDH LDH 、HBDHHBDH在红细胞内的含在红细胞内的含量皆明显高于胞外，故溶血后结果都量皆明显高于胞外，故溶血后结果都升高，虽然红细胞中不含升高，虽然红细胞中不含CK CK ，但含，但含有大量的腺苷酸激酶有大量的腺苷酸激酶(AK)(AK)，可干扰测，可干扰测定定CK CK 的偶联法的反应体系，人为地的偶联法的反应体系，人为地引起引起CKCK结果的升高。结果的升高。第23页/共30页三、标本溶血的原因1 1、环境温度变化，气温较低时

16、血清、环境温度变化，气温较低时血清不易分离，标本需经多次离心，离心不易分离，标本需经多次离心，离心后容易出现溶血现象。后容易出现溶血现象。2 2、标本运送过程中导致碰撞，从而、标本运送过程中导致碰撞，从而使离心后也会出现溶血现象。使离心后也会出现溶血现象。3 3、采血量不足，相对低渗抗凝导致、采血量不足，相对低渗抗凝导致溶血。溶血。第24页/共30页4 4、特殊人群如肥胖者、小孩等血管、特殊人群如肥胖者、小孩等血管不易找到或太细导致抽血时多次操不易找到或太细导致抽血时多次操作或压迫时间过长也会引起溶血现作或压迫时间过长也会引起溶血现象。象。5 5、针头过细或抽血速度过快，负压、针头过细或抽血速

17、度过快，负压太大，红细胞通过针尖时破坏而溶太大，红细胞通过针尖时破坏而溶血。血。第25页/共30页四、溶血标本的处理1 1、主动与临床联系，结合临床首先、主动与临床联系，结合临床首先排除体内溶血的可能，若不是体内溶排除体内溶血的可能，若不是体内溶血，建议重新采取标本，否则应在检血，建议重新采取标本，否则应在检验报告单上注明验报告单上注明“标本溶血标本溶血”，以提，以提醒临床医生注意醒临床医生注意. .2 2、利用溶血指数变化值，根据各项、利用溶血指数变化值，根据各项目的回归方程，对易受溶血影响的目的回归方程，对易受溶血影响的ASTAST、CKCK、CK-MBCK-MB、LDH,LDH, K K+ + 的测定结的测定结果进行部分纠正，尤其对轻中度溶血果进行部分纠正，尤其对轻中度溶血效果较好，但对重度溶血标本则应重效果较好，但对重度溶血标本则应重新复查。新复查。第26页/共30页3 3、从方法学上克服或减少溶血的干、从方法学上克服或减少溶血的干扰，如通过设置样品空白或改用双扰，如通过设置样品空白或改用双波长比色、导数分光光