南医大微免实验三

1、微生物与免疫学实验（三）微生物与免疫学实验（三）血清学反应（二）：血清学反应（二）：l录像：免疫标记技术录像：免疫标记技术l操作：操作：elisal示教：免疫荧光（示教：免疫荧光（c301）细菌学总论：细菌学总论：l细菌基本形态、特殊结构细菌基本形态、特殊结构l操作：革兰染色操作：革兰染色（三）补体结合试验（三）补体结合试验l方法：方法： 待检系统：待检系统：ag（未知）（未知）+ab（已知）（已知）+补体补体 指示系统：绵羊红细胞（指示系统：绵羊红细胞（ag）溶血素（）溶血素（ab）l结果：溶血结果：溶血阴性阴性 不溶血不溶血阳性阳性（四）中和反应（四）中和反应（neutralization

2、）病毒中和试验病毒中和试验毒素中和试验毒素中和试验（五）免疫标记技术（五）免疫标记技术 将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。生物素、电子致密物等。免疫荧光技术（荧光抗体技术）免疫荧光技术（荧光抗体技术）【原理原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，

3、具有特异、敏感、快速的特点。将荧展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称异硫氰基荧光黄，简称fitc）与特异性抗）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。光显微镜加以观察。【方法方法】主要有直接法和间接法。主要有直接法和间接法。免疫荧光免疫荧光酶联免疫吸附试

4、验（酶联免疫吸附试验（elisa）（enzyme linked lmmunosorbent assay）【原理原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原

5、的量成正比。成正比。【方法方法】主要有间接法和双抗体夹心法。主要有间接法和双抗体夹心法。elisa：间接法：间接法-用于测定抗体用于测定抗体elisa：双抗体夹心法：双抗体夹心法-用于测定抗原用于测定抗原 elisa：双抗体夹心法检测尿：双抗体夹心法检测尿hcgl 器材：器材：1个小杯个小杯/人，标本人，标本1、标本、标本2 a、b、c液液l 方法：小杯内加标本两滴方法：小杯内加标本两滴 甩干、水洗三次甩干、水洗三次 加一滴加一滴c液（红色）液（红色） 甩干、水洗三次甩干、水洗三次 加加a、b液各一滴液各一滴 置于白纸上，观察结果置于白纸上，观察结果l 结果判断：蓝色为阳性结果判断：蓝色为阳性

6、 *瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！5min5min细细 菌菌 总总 论（一）论（一）革兰染色法：革兰染色法：1884年年gram创建，是细菌学中创建，是细菌学中最为经典的染色法。最为经典的染色法。意义：意义： 对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。致病性等有重要意义。原理：原理： 与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 细菌的基本形态细菌的基本形态细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（形体微小，一般以微米（m）作为测量单位。）

7、作为测量单位。细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约径约1m，杆菌长，杆菌长2 5m，宽，宽0.3 1m。球菌（球菌（coccus）杆菌（杆菌（bacillus）螺形菌（螺形菌（spiral bacterium）弧菌：一个弯曲弧菌：一个弯曲 螺菌：多个弯曲螺菌：多个弯曲细菌的特殊结构细菌的特殊结构荚膜、鞭毛、芽胞、荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛菌毛荚膜（荚膜（capsule）鞭毛（鞭毛（flagellum）芽胞（芽胞（spore）革兰染色革兰染色操作步骤操作步骤【涂片涂片】 取载玻片取载玻片 接种环取混合菌液接种环取混合菌液1-21-2环涂片（直径环涂片（直径约约1cm1cm） 自然干燥自然干燥 固定（通过火焰三次）固定（通过火焰三次）【染色染色】 结晶紫结晶紫1min 1min 水洗水洗 碘液碘液1min 1min 水洗水洗 酒精脱色酒精脱色30s 30s 水洗水洗 稀释复红稀释复红1min 1min 水洗水洗 吸水纸印干吸水纸印干 油镜观察油镜观察 * *注意无菌操作！注意无菌操作！ 有菌玻片放在水池旁玻片缸内有菌玻片放在水池旁玻片缸内!