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文档简介
1、学习必备精品知识点基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过:赋予生物以 ,创造出< 基因工程是在 上进行设计和施工的,又叫做 (一)基因工程的基本工具1.”分子手术刀"_(1)来源:主要是从 中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种 的核甘酸序列,弁且使每一条链中 部位的两个核甘酸之间的 断开,因此具有 性。(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式: 和。2 . ”分子缝合针"一一 (1)两种 DNA连接酶(E - coliDNA 连接酶和 T4-DNA连接酶)的比较:相同点:都缝合 键。区别:E co
2、liDNA 连接酶来源于 ,只能将双链 DNA 片段互补的 之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合 ,但连接平末端的之间的效率较 。(2)与DNA聚合酶作用的异同 :DNA聚合酶只能将 加到已有的核甘酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端,形成磷酸二酯键。3 .“分子运输车" 一一 (1)载体具备的条件: 。 。(2)最常用的载体是 ,它是一种 裸露的、结构简单的、独立于 ,弁具有的双链DNA 分子。(3)其它载体:(二)基因工程的基本操作程序第一步:1 .目的基因是指: 。2 .原核基因采取 获得,真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法有 和3 .P
3、CR技术扩增目的基因(1)原理: (2)过程:第一步:加热至 9095 c第二步:冷却到 5560 C, -第三步:加热至 7075 C, 二第二步:1 .目的:使目的基因在受体细胞中 ,弁且可以 ,使目的基因能够。2 .组成:+(1)启动子:是一段有特殊结构的 ,位于基因的 ,是 识别和结合的部位,能驱动基因,最终获得所需的 。(2)终止子:也是一段有特殊结构的 ,位于基因的 。(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中,从而将 筛选出来。常用的标记基因是 。第三步:1 .转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,弁且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2 .常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞
4、:采用最多的方法是,其次还有 和等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 O此方法的受体细胞多是 O将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是,最常用的原核细胞是 ,其转化方法是:先用 处理细胞,使其成为,再将 溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA分子,完成转化过程。3 .重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是。第四步:1 .首先要检测 ,方法是采用2 .其次还要检测 ,方法是采用 3 .最后检测 ,方法是从转基因生物中提取 ,用相应的 进 行。4 .有时还需进行 的鉴定。如 (三)基因工程的应用1 .植物基因工程: 二2
5、.动物基因工程: 二3 .基因治疗: 二(四)蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以 作为基础,通过 ,对现有蛋白质进行 ,或制造一种 ,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产的蛋白质)蛋自质工程D岫合成jrRNA分千设计:氤基酸序列B 1肽读 折卷蛋白质三维结构4 期功能生物功能转录翻译中心法则答案专题1 基因工程基因工程的概念更符合人们需要的新的生物类型和生物产品因体外DNA重组和转基因技术新的遗传特性DNA分子水平DNA重组技术(一)基因工程的基本工具1.限制性核酸内切酶(限制酶)(1)原核生物(2)特定 特定磷酸二酯键专一(3) 黏性末端平末端 。2 . DNA连接酶磷酸二
6、酯T_4_噬菌体黏性末端两种末端低。(2)单个核甘酸两个DNA片段3 .载体(1) 能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA片段插入具有标记某因:供重组DNA的鉴定和诜择 。(2)质粒细菌染色体之外自我复制能力环状(3) 噬菌体的衍牛物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取一1 .编码新白质的结构基因。2 .直接分离人工合成反转录法 _化学合成法 _。3 . ( 1) DNA双链复制_(2) DNA解链;引物结合到互补DNA链;热稳.定 DNA聚合蘸从引物起始互补链的合成第二步: 基因表达载体的构建1 .稳定存在遗传至下一代表达和发挥作用。2
7、 .目的基因 +启动子+终止子 +标记基因(1) DNA片段首端 RNA 聚合酶 转录出 mRNA 蛋白质。(2) DNA片段 尾端。(3)是否含有目的基因含有目的基因的细胞抗生素基因。第三步: 将目的基因导入受体细胞 2 .农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射技术受精卵2+繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 大肠杆菌Ca感受态细胞重组表达载体 DNA分子3 .标记基因是否表达 。第四步:目的基因的检测和表达1 .转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因DNA分子杂交技术 。2 .目的基因是否转录出了mRNA用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3 .目的基因是否翻译成蛋白质蛋白质 的 抗体抗原-抗体杂交 。4 .个体生物学水平转基因抗虫植物是否出现抗虫性状(三)基因工程的应用1 .抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。2
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