VK3安全性评价

1、维生素维生素k3的安全性评价的安全性评价化学药物刺激性、过敏性和溶血性概述化学药物刺激性、过敏性和溶血性概述 化学药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、化学药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、静脉旁和鞘内等非口直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、静脉旁和鞘内等非口服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和过敏性等）服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和过敏性等）和和/或对全身产生的毒性（如过敏性和溶血性等）。它是临床前或对全身产生的毒性（如过敏性和溶血性等）。它是临床前安全性评价的组成部分。安全性评价的组成部分。 药物的活性

2、成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如（如ph值、渗透压等）均有可能引起刺激性和值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和或过敏性和/或或溶血性的发生，而严重的毒性可以影响用药的安全有效性，因溶血性的发生，而严重的毒性可以影响用药的安全有效性，因此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围、临床研究监测指标并为临床解毒或解救性靶器官、安全范围、临

3、床研究监测指标并为临床解毒或解救措施提供参考，保障临床用药的安全有效。措施提供参考，保障临床用药的安全有效。实验项目实验项目1.刺激性（皮肤刺激性试验；眼刺激性试验；注射给药部位刺刺激性（皮肤刺激性试验；眼刺激性试验；注射给药部位刺激性试验：血管刺激性实验、肌肉刺激性实验。）激性试验：血管刺激性实验、肌肉刺激性实验。）2.过敏性过敏性3.溶血性实验溶血性实验试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。试验用药物应与用于人体的制剂一致试验用药物应与用于人体的制剂一致观察部位应选择给药部位，同时观察部位应选择给药部位，同时考虑选择周围组织或可能暴露于考虑选择周围组织

4、或可能暴露于受试药物的部位。受试药物的部位。刺激性试验刺激性试验刺激性是指非口服药物制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎刺激性是指非口服药物制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎症改变，若给药部位产生了不可逆性的组织损伤则称为腐蚀性。症改变，若给药部位产生了不可逆性的组织损伤则称为腐蚀性。【实验目的实验目的】 观察动物局部接触受试物后所产生的刺激反应，提示药物观察动物局部接触受试物后所产生的刺激反应，提示药物临床应用后给药部位可能出现的炎症反应、组织的变性和临床应用后给药部位可能出现的炎症反应、组织的变性和坏死等不良反应。坏死等不良反应。刺激性试验设计中应考虑的问题刺激性试验设计中应考虑的问题实验动

5、物的选择实验动物的选择 依据观察指标和拟采用试验模型选择试验依据观察指标和拟采用试验模型选择试验动物，一般每个试验选择一种动物进行评价。动物，一般每个试验选择一种动物进行评价。给药的频率与期限给药的频率与期限 给药频率和期限应依据拟定临床应用的给药频率和期限应依据拟定临床应用的情况来决定。重复给药试验，一般每天给药一次，给药期情况来决定。重复给药试验，一般每天给药一次，给药期限最长不超过限最长不超过4周。偶尔给药的受试物可用单次给药的方周。偶尔给药的受试物可用单次给药的方法进行试验。法进行试验。可逆性观察可逆性观察 为明确毒性反应的恢复情况，建议进行停药后为明确毒性反应的恢复情况，建议进行停药

6、后恢复期的观察。局部毒性反应的可逆性评价应包括局部及恢复期的观察。局部毒性反应的可逆性评价应包括局部及相关部位的反应。相关部位的反应。刺激性试验设计中应考虑的问题刺激性试验设计中应考虑的问题受试物受试物 受试物应与用于人体的制剂一致。受试物应与用于人体的制剂一致。 对照组对照组 以溶媒和以溶媒和/或赋形剂作为阴性对照。必要时采用阳性或赋形剂作为阴性对照。必要时采用阳性对照或已上市制剂。对照或已上市制剂。 剂量剂量 剂量设计主要应该考虑受试物浓度和总剂量。一般采剂量设计主要应该考虑受试物浓度和总剂量。一般采用与临床制剂相同浓度，设一个剂量组，可以通过改变给用与临床制剂相同浓度，设一个剂量组，可以

7、通过改变给药频率进行剂量的调整，但皮肤给药刺激性研究通过增加药频率进行剂量的调整，但皮肤给药刺激性研究通过增加涂敷厚度或加大涂布面积来提高给药剂量是不合适的。必涂敷厚度或加大涂布面积来提高给药剂量是不合适的。必要时应该进行不同浓度的刺激性试验。要时应该进行不同浓度的刺激性试验。刺激性试验设计中应考虑的问题刺激性试验设计中应考虑的问题给药方式给药方式 7.1给药方案应尽量与临床用药方案一致。给药方案应尽量与临床用药方案一致。 7.2给药途径和给药部位应与临床用药一致。给药途径和给药部位应与临床用药一致。 7.3设计给药容积，给药速率和给药频率时，应考虑所选用动设计给药容积，给药速率和给药频率时，

8、应考虑所选用动物模型给药部位的解剖和生理特点。物模型给药部位的解剖和生理特点。只要相互之间不影响且全身耐受性许可，则可在同一动物只要相互之间不影响且全身耐受性许可，则可在同一动物身上进行不同给药途径的刺激性试验研究，并可在对侧进身上进行不同给药途径的刺激性试验研究，并可在对侧进行对照试验。行对照试验。刺激性试验刺激性试验皮肤刺激性试验皮肤刺激性试验 皮肤刺激性是指动物经皮肤给予受试物后在皮肤上产生的可逆皮肤刺激性是指动物经皮肤给予受试物后在皮肤上产生的可逆性炎症改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为皮肤腐蚀性。性炎症改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为皮肤腐蚀性。 目的目的 观察动物皮肤接触受试

9、物后所产生的刺激反应，提示药物观察动物皮肤接触受试物后所产生的刺激反应，提示药物临床应用后皮肤可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。临床应用后皮肤可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。 皮肤刺激性试验皮肤刺激性试验试验方法试验方法 试验动物：首选家兔，动物数试验动物：首选家兔，动物数48只，雌、雄各半。应设赋形只，雌、雄各半。应设赋形剂对照，采用同体左右侧自身对比法。试验前剂对照，采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时对给药区小时对给药区（通常在背部）进行脱毛处理（可剪、剃或用适宜的脱毛剂）。（通常在背部）进行脱毛处理（可剪、剃或用适宜的脱毛剂）。去毛范围左、右各去毛范围左、右各3c

10、m3cm。给药前应检查去毛皮肤是否因去。给药前应检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不宜进行试验。但若需考察破损皮毛而受损伤，有损伤的皮肤不宜进行试验。但若需考察破损皮肤的刺激性，则可在用药部位用砂纸磨或划肤的刺激性，则可在用药部位用砂纸磨或划“井井”字并以渗血字并以渗血为度。为度。 皮肤刺激性试验皮肤刺激性试验试验方法试验方法 受试物的给予：取受试物受试物的给予：取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布（然后用二层纱布（2.5 cm2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另

11、一侧涂布赋型剂做对照。再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋型剂做对照。贴敷时间至少贴敷时间至少4小时。贴敷结束后，除去受试物并用温水或无刺小时。贴敷结束后，除去受试物并用温水或无刺激性溶剂清洁给药部位。多次给药皮肤刺激性试验应连续在同激性溶剂清洁给药部位。多次给药皮肤刺激性试验应连续在同一部位给药，每次给药时间相同，贴敷期限一般不超过一部位给药，每次给药时间相同，贴敷期限一般不超过4周。周。 皮肤刺激性试验皮肤刺激性试验试验方法试验方法 动物观察：在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。单次给动物观察：在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后药皮肤刺激性

12、试验，在去除药物后30-60分钟，分钟，24、48和和72小时小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。对出现中度肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。对出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行病及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行病理组织学检查。理组织学检查。 刺激性试验刺激性试验眼刺激性试验眼刺激性试验眼刺激性是指动物经眼给予受试物后在眼前部表面产生的可逆眼刺激性是指动物经眼给予受试物后在眼前部表面产生的可逆性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐蚀性。性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐蚀性。 。 目的目的 观察动物经眼给予受试

13、物后所产生的刺激性反应，提示药观察动物经眼给予受试物后所产生的刺激性反应，提示药物临床应用后眼可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。物临床应用后眼可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。 眼刺激性试验眼刺激性试验试验方法试验方法试验动物：首选家兔，动物数每组不少于试验动物：首选家兔，动物数每组不少于3只。应设置生理盐水只。应设置生理盐水对照组，可采用同体左右侧自身对比法。试验前对照组，可采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时内对每小时内对每只动物的双眼进行检查（包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺只动物的双眼进行检查（包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于

14、试验。激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。 眼刺激性试验眼刺激性试验给药方法：每只眼睛滴入给药方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷或涂敷0.1g受试物，然后轻合眼受试物，然后轻合眼睑约睑约10s。一般不需冲洗眼睛。用药周期应根据药物拟用于临床。一般不需冲洗眼睛。用药周期应根据药物拟用于临床的情况来决定，多次给药一般不超过的情况来决定，多次给药一般不超过4周。周。 眼刺激性试验眼刺激性试验眼部观察：单次给药眼刺激试验，在给药后眼部观察：单次给药眼刺激试验，在给药后1、24、48和和72小时小时对眼部进行检查；多次给药眼刺激试验，每天给药前以及最后对眼部进行检查；多次给药眼刺激试验，每天给

15、药前以及最后一次给药后一次给药后1、24、48和和72小时对眼部进行检查。如果在小时对眼部进行检查。如果在72小时小时未见任何刺激症状，试验则可结束。如存在持久性损伤，有必未见任何刺激症状，试验则可结束。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限。但一般不超过要延长观察期限。但一般不超过21天。天。 溶血性试验溶血性试验溶血性是指药物制剂引起的血管外或血管内溶血和红细胞凝聚溶血性是指药物制剂引起的血管外或血管内溶血和红细胞凝聚等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。免疫性等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。免疫性溶血是药物通过免疫反应产生抗体而引起的溶血，为溶血是药物通过免疫反应

16、产生抗体而引起的溶血，为型和型和型过敏反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性型过敏反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性溶血和药物制剂引起血液稳态的改变而出现的溶血和红细胞凝溶血和药物制剂引起血液稳态的改变而出现的溶血和红细胞凝聚等。聚等。 注射给药部位刺激性试验注射给药部位刺激性试验 注射给药部位刺激性是指动物经注射给予受试物后在注射部位注射给药部位刺激性是指动物经注射给予受试物后在注射部位产生的可逆性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐产生的可逆性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐蚀性。蚀性。目的目的 观察动物注射受试物后所产生的刺激性反应，提示药物临观察

17、动物注射受试物后所产生的刺激性反应，提示药物临床应用后注射部位可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反床应用后注射部位可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。应。 注射给药部位刺激性试验注射给药部位刺激性试验试验方法试验方法 1.1.试验动物：试验动物：首选家兔，动物数每组不少于首选家兔，动物数每组不少于3只。应设生理盐水只。应设生理盐水对照，可采用同体左右侧自身对比法。用药部位根据药物的给对照，可采用同体左右侧自身对比法。用药部位根据药物的给药途径确定，可选用耳缘静脉，耳中心动脉（其它动物可选用药途径确定，可选用耳缘静脉，耳中心动脉（其它动物可选用前、后肢静脉及股动脉等），股和背部肌肉，侧胸

18、壁皮下组织，前、后肢静脉及股动脉等），股和背部肌肉，侧胸壁皮下组织，静脉旁组织等。静脉旁组织等。 2.2.给药方法：给药方法：按临床使用情况给予受试物，给药容积和速率应按临床使用情况给予受试物，给药容积和速率应根据动物情况进行相应的调整。给药期限应根据药物拟用于临根据动物情况进行相应的调整。给药期限应根据药物拟用于临床的情况来决定，多次给药一般不超过床的情况来决定，多次给药一般不超过7天。天。 注射给药部位刺激性试验注射给药部位刺激性试验试验方法试验方法3.3.动物观察：动物观察：单次给药刺激性试验，在给药后单次给药刺激性试验，在给药后48-96小时对动物小时对动物和注射部位进行肉眼观察；多次

19、给药刺激性试验，每天给药前和注射部位进行肉眼观察；多次给药刺激性试验，每天给药前以及最后一次给药后以及最后一次给药后48-96小时对动物和注射部位进行肉眼观察。小时对动物和注射部位进行肉眼观察。观察期结束时应对部分动物进行给药部位组织病理学检查。留观察期结束时应对部分动物进行给药部位组织病理学检查。留下的动物根据受试物的特点和刺激性反应情况，继续观察下的动物根据受试物的特点和刺激性反应情况，继续观察1421天再进行病理组织学检查，以了解刺激性反应的可逆程度。天再进行病理组织学检查，以了解刺激性反应的可逆程度。4.4.结果评价：结果评价：根据肉眼观察和病理检查的结果，对受试物使用根据肉眼观察和病

20、理检查的结果，对受试物使用的安全性进行评价。的安全性进行评价。 实验材料实验材料器材：注射器器材：注射器 1ml 5支。支。药品：维生素药品：维生素k3注射液、生理盐水。注射液、生理盐水。动物：动物：2.02.2 kg家兔家兔4只，雌雄各半。只，雌雄各半。 家兔股四头肌法家兔股四头肌法 方法与步骤方法与步骤取家兔取家兔4只只,每只家兔一侧股四头肌内注射维生素每只家兔一侧股四头肌内注射维生素k3注射液注射液1 ml，另一侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉，另一侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应有无充血、水肿等反应, 注射后注射后48 h后用空气栓塞法处死动

21、物，后用空气栓塞法处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，按肌肉刺激反应分级标准计算相应的反应级，并进行局部组织按肌肉刺激反应分级标准计算相应的反应级，并进行局部组织病理学检查，提供病理照片。病理学检查，提供病理照片。实验结果与讨论实验结果与讨论实验结果与讨论实验结果与讨论【结果与讨论结果与讨论】根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。实验材料实验材料器材：注射器器材：注射器 1ml 5支。支。药品：维生素药品：维生素k3注射液、生理盐水。注射液、生理盐水。

22、动物：动物：2.02.2 kg家兔家兔4只，雌雄各半。只，雌雄各半。 家兔耳壳法家兔耳壳法 是注射剂刺激性初试的一种方法。因家兔耳壳较薄，将药物注是注射剂刺激性初试的一种方法。因家兔耳壳较薄，将药物注射于耳壳皮下后，其刺激性反应易于在透光检查中发现，而不射于耳壳皮下后，其刺激性反应易于在透光检查中发现，而不需处死动物，试验成本相对较低。需处死动物，试验成本相对较低。方法与步骤方法与步骤取家兔取家兔4只，每只家兔一侧耳缘静脉内注射维生素只，每只家兔一侧耳缘静脉内注射维生素k3注射液注射液1ml，另一侧注射同体积生理盐水。注射另一侧注射同体积生理盐水。注射48 96 h后观察注射部位肌后观察注射部

23、位肌肉有无充血、水肿等反应肉有无充血、水肿等反应, 观察结束后用空气栓塞法处死动物，观察结束后用空气栓塞法处死动物，进行给药部位组织病理学检查，并提供病理照片。进行给药部位组织病理学检查，并提供病理照片。【结果与讨论结果与讨论】根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。溶血性试验溶血性试验目的目的 考察药物是否能够引起血管外或血管内溶血和红细胞凝考察药物是否能够引起血管外或血管内溶血和红细胞凝聚等反应。聚等反应。 凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的其他药物制剂均应进行溶血性试

24、验。其他药物制剂均应进行溶血性试验。 溶血性试验溶血性试验溶血性试验方法溶血性试验方法 1、常规的体外试管法、常规的体外试管法(肉眼观察法肉眼观察法) 1.1 血细胞悬液的配制血细胞悬液的配制取兔血取兔血(或羊血或羊血)数毫升数毫升,放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇 10 分钟分钟,或用玻璃棒搅动血液或用玻璃棒搅动血液,除去纤维蛋白原除去纤维蛋白原,使成脱纤血液使成脱纤血液.加入加入 0.9%氯化钠溶液约氯化钠溶液约10 倍量倍量,摇匀摇匀,1000-1500r/min 离心离心 15 分钟分钟,除去上除去上清液清液,沉淀的红细胞再用沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按

25、上述方法洗涤氯化钠溶液按上述方法洗涤 2-3 次次,至上清液不显红色为止至上清液不显红色为止.将所得红细胞用将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成氯化钠溶液配成 2%的混悬液的混悬液,供试验用供试验用. 溶血性试验溶血性试验溶血性试验方法溶血性试验方法 1、常规的体外试管法、常规的体外试管法(肉眼观察法肉眼观察法) 1.2 受试物的制备受试物的制备除另有规定外除另有规定外,临床用于非血管内途径给药的注射剂临床用于非血管内途径给药的注射剂,以各药品使以各药品使用说明书规定的临床使用浓度用说明书规定的临床使用浓度,用用0.9%氯化钠溶液氯化钠溶液 1 3 稀释后稀释后作为供试品溶液作为供试品溶液;用

26、于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。临床使用浓度作为供试品溶液。溶血性试验溶血性试验溶血性试验方法溶血性试验方法 1、常规的体外试管法、常规的体外试管法(肉眼观察法肉眼观察法) 1.3 试验方法试验方法取洁净试管取洁净试管 7 只只,进行编号进行编号,1-5 号管为供试品管号管为供试品管,6 号管为阴性对号管为阴性对照管照管,7 号管为阳性对照管号管为阳性对照管.按下表所示依次加入按下表所示依次加入 2%红细胞悬液、红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水氯化钠溶液或蒸馏水,混匀后混匀后,立即置立即置 370.5的恒温箱的恒温

27、箱中进行温育中进行温育,开始每隔开始每隔 15 分钟观察分钟观察 1 次次,1 小时后小时后,每隔每隔 1 小时观小时观察察 1 次次,一般观察一般观察 3 小时小时. 按下列顺序加入各种溶液按下列顺序加入各种溶液溶血性试验溶血性试验结果观察结果观察 若试验中的溶液呈澄明红色若试验中的溶液呈澄明红色,管底无细胞残留或有少量红细管底无细胞残留或有少量红细胞残留胞残留,表明有溶血发生表明有溶血发生;如红细胞全部下沉如红细胞全部下沉,上清液体无色澄明上清液体无色澄明,表明无溶血发生表明无溶血发生.若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀,振摇后不振摇后不分散分散,表明有红细胞凝聚发生表明有红细胞凝聚发生.如有红细胞凝聚的现象如有红细胞凝聚的现象,可按下法可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚进一步判定是真凝聚还是假凝聚.若凝聚物在试管振荡后又能均若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散匀分散,或