高效液相色谱检查十一酸其他甾体课件

1、高效液相色谱高效液相色谱检查检查十一酸睾酮十一酸睾酮其他甾体其他甾体 何伟康 陈忠坚过程 查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等） 进行讨论，确定方法，制定仪器清单 实验 成果实验方案进一步修改查资料 药典 药物的理化性质，检查方法及具体操作 网络 结构式，功效及一些产品名 文献 同类药物高效液相色谱法的使用情况 分析化学和药物分析教材 高效液相色谱法实验方案 主成分自身对照法（无杂质对照品） 将供试品稀释成与杂质限度相当的浓度，作为对照溶液。分别取供品试溶液和对照溶液进样，计算供试品溶液色谱图上各杂质峰面积总和，与对照溶液主成分峰面积比较，确定杂质是否超过限量。 供试品溶液配制 取本品

2、约0.1g，精密称定，加入流动相约20ml，溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供试品溶液）。 自身对照品溶液配制 精密量取供试品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg）。实验清单 仪器： 高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，（柱长？柱长？） 乙腈异丙醇水（40:40:20）为流动相；检测温度室温，检测波长为240nm。（灵敏度？流速？灵敏度？流速？） 50ml容量瓶2 1ml移液管 电子天平 小漏斗 250ml 烧杯 50ml量筒 滤纸 洗耳球方案修改 供试品溶液 2mg 1ml 0.5mg1ml 自身对照溶液 0.04 mg 1ml 0.01

3、mg1ml 色谱条件的确定 ： 色谱柱：agilent c185um（1504.6mm） 流动相的确定：？ 流速：1.0mlmin 灵敏度：0.01档溶液配置及仪器操作供试品溶液配置：0.5mg/1ml精密称定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流动相定容至10ml（乙腈-水=75：25）自身对照品溶液配制：0.01mg/ml移液管移取供试品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml）液相色谱仪器操作 开始：装柱 检漏 甲醇冲洗0.5h 流动相冲洗0.5h 设定参数 待基线稳定后进样 结束：用冲柱水冲洗1h 纯甲醇冲洗1h 收

4、好柱子。药典方法药典方法流动相 乙腈-异丙醇-水4040：4040：2020下色谱图下色谱图 主峰 r:1.960 t: 1.258 n:9443r:1.960 t: 1.258 n:9443思考： 1.主成分峰与杂质的分离度不够（1.960） 2.主成分出峰时间太长（21.538min）如何改变条件呢？流动相配比流动相乙腈异丙醇 水19055285105380155乙腈-异丙醇-水（90：5：5）r: 1.182 t: 1.329 n: 10321乙腈：异丙醇：水（85：10：5）r:3.709 t: 1.834 n: 9309乙腈：异丙醇：水（80：15：5）r: 1.591 t: 1.7

5、32 n:10495 流流动动相相rtn出峰时间（min）11.1821.329 10321 11.1712 3.791.84 930916.12931.5911.732 10495 13.529 第二次思考： 乙腈价格昂贵，毒性大。 而甲醇粘度小，柱压低，价格便宜，适用范围广，常用于色谱分析的流动相，激素类药物中较常用。 药典为什么不用甲醇代替乙腈呢？ 甲醇甲醇-异丙醇异丙醇-水水=90：5：5 r: 1.225 t: 1.338 n: 8099甲醇-异丙醇-水=80：15：5r：1.208 t : 1.334 n:8564结论甲醇替代乙腈后分离度较低，柱效有所下降，所以在实验中使用乙腈较为合适。 选取流动相，进行杂质限量检查。 乙腈-异丙醇-水=80：15：5 1.进溶剂 2.进低浓度对照溶液 3.进高浓度供试品溶液溶剂峰高浓度（高浓度（0.5mgml）低浓度低浓度0.01mgml计算及结论 自身对照溶液主峰峰面积：1691935 样品溶液杂质峰总峰面积：666831 样品溶液杂质峰总峰面积自身对照溶液主峰 峰面积 即杂