8蛋白质化学6理化性质与分离分析

1、 蛋白质蛋白质分子量大分子量大，介于，介于一万到百万一万到百万之间，故其分子之间，故其分子的大小已达到的大小已达到胶粒胶粒1-100 nm范围之内。球状蛋白质的范围之内。球状蛋白质的表面多亲水基团表面多亲水基团，具有强烈吸引水分子的作用，使蛋，具有强烈吸引水分子的作用，使蛋白质分子表面常为多层水分子所包围白质分子表面常为多层水分子所包围-水化膜水化膜，从而，从而阻阻止蛋白质颗粒的相互聚集止蛋白质颗粒的相互聚集。 与低分子物质相比，蛋白质分子与低分子物质相比，蛋白质分子扩散速度慢扩散速度慢，不易不易透过半透膜，粘度大透过半透膜，粘度大，在分离提纯蛋白质过程中，可，在分离提纯蛋白质过程中，可以利用

2、蛋白质的这一性质，将混有小分子杂质的蛋白以利用蛋白质的这一性质，将混有小分子杂质的蛋白质溶液置于质溶液置于半透膜半透膜制成的制成的透析袋或管透析袋或管内，浮于流动水内，浮于流动水或适宜的缓冲液中，小分子杂质皆易从袋中透出，保或适宜的缓冲液中，小分子杂质皆易从袋中透出，保留了比较纯的蛋白质留了比较纯的蛋白质-透析透析(dialysis)。-+-颗粒大小：在颗粒大小：在1-100 nm之间，属之间，属胶体胶体，因，因此溶于水，成为亲水此溶于水，成为亲水胶体。胶体。 稳定亲水胶体的因素：稳定亲水胶体的因素： 水化膜水化膜 表面电荷相同表面电荷相同 不通透性：半透膜不通透性：半透膜(semiperme

3、able membrane)蛋白质溶液是一种蛋白质溶液是一种分散分散系统系统，蛋白质分子颗粒，蛋白质分子颗粒是分散相，水是分散介是分散相，水是分散介质。分散相质点小于质。分散相质点小于1 nm为真溶液，大于为真溶液，大于100 nm为悬浊液，介于为悬浊液，介于1-100 nm为胶体溶液。为胶体溶液。透析透析即用半透膜（透析袋）将大分子蛋白质分即用半透膜（透析袋）将大分子蛋白质分离出来。在生物大分子制备过程中离出来。在生物大分子制备过程中除去盐除去盐、少量少量有机溶剂有机溶剂、生物小分子杂质生物小分子杂质和和浓缩样品浓缩样品，透析法，透析法最简便。最简便。透析时，小于透析时，小于mwco（截留分

4、子量）的分子在（截留分子量）的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜，其透析膜，其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度：膜面积。常用温度：4，升温、更换袋外透析，升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器，均能提高透析速度。液或用磁力搅拌器，均能提高透析速度。 mwco: molecular weight cut-off蛋白质大分子溶液在一定溶剂中蛋白质大分子溶液在一定溶剂中超速离心时可发超速离心时可发生沉降。沉降速度

5、与向心加速度之比值即为蛋白质的沉生沉降。沉降速度与向心加速度之比值即为蛋白质的沉降系数降系数s。 s=v/2r s是沉降系数是沉降系数(sedimentation coefficient)，是离心是离心转子的角速度（弧度转子的角速度（弧度/秒），秒），r是到旋转中心的距离，是到旋转中心的距离，v是沉降速度。沉降系数以是沉降速度。沉降系数以每单位重力的沉降时间表示每单位重力的沉降时间表示，蛋白质、核酸、核糖体、病毒等的沉降系数通常为蛋白质、核酸、核糖体、病毒等的沉降系数通常为1-200 10-13秒秒范围，范围，10-13这个因子叫做沉降单位这个因子叫做沉降单位s（斯维德贝格单位，（斯维德贝格单

6、位，svedberg unit），即），即1s=10-13秒，秒，如血红蛋白的如血红蛋白的s约为约为410-13秒或秒或4s。大多数蛋白质和核大多数蛋白质和核酸的沉降系数在酸的沉降系数在4s和和40s之间之间，核糖体及其亚基在，核糖体及其亚基在30s和和80s之间，多核糖体在之间，多核糖体在100s以上。以上。 1924年年svedberg（离心法创始（离心法创始人人-瑞典蛋白质化学家）对瑞典蛋白质化学家）对沉沉降系数降系数的定义：的定义：颗粒在单位离颗粒在单位离心力场中粒子移动的速度心力场中粒子移动的速度。 蛋白质由氨基酸组成，分子中除蛋白质由氨基酸组成，分子中除两端的游离氨基两端的游离氨基

7、和羧基和羧基外，外，侧链上还有一些侧链上还有一些解离解离基团基团，如如glu、asp残残基中的基中的和和-羧基羧基，lys残基中的残基中的-氨基氨基，arg残基的残基的胍胍基基和和his的的咪唑基咪唑基。作为带电颗粒，可以在电场中移动，。作为带电颗粒，可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷性质移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷性质。蛋白质。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量性和酸性氨基酸的含量，又受，又受所处溶液所处溶液ph影响影响。当处。当处于某一于某一ph时，蛋白质兼性离子时，蛋白质兼性离子(

8、zwitterion)的净电荷为的净电荷为0，此时溶液的此时溶液的ph值为蛋白质的值为蛋白质的等电点等电点(isoelectric point，pi)。处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。蛋白质溶液的蛋白质溶液的ph大于等电点，该蛋白质颗粒带负电荷，大于等电点，该蛋白质颗粒带负电荷，反之则带正电荷。反之则带正电荷。 ph=pi时，蛋白质分子所时，蛋白质分子所带净电荷为零带净电荷为零，蛋白，蛋白质分子在质分子在电场中不移动电场中不移动。 phpi时，蛋白质分子时，蛋白质分子所带净电荷为负所带净电荷为负，蛋，蛋白质分子在电场中白质分子在电场中向阳极移动

9、向阳极移动。 phpi时，蛋白质分子时，蛋白质分子所带净电荷为正所带净电荷为正，蛋，蛋白质分子在电场中白质分子在电场中向阴极移动向阴极移动。 在在pi时，蛋白质时，蛋白质失去了胶体的稳定条件失去了胶体的稳定条件，即，即没有相同电荷相互排斥的作用，所以不稳定，没有相同电荷相互排斥的作用，所以不稳定，溶溶解度最小，易沉淀解度最小，易沉淀。ph与盐浓度对蛋白与盐浓度对蛋白质溶解度的共同作用质溶解度的共同作用天然蛋白质的严密结构在某些天然蛋白质的严密结构在某些物理或物理或化学因素化学因素作用下，其作用下，其特定的空间结构被破特定的空间结构被破坏坏，从而，从而导致理化性质改变和生物学活性导致理化性质改变

10、和生物学活性的丧失的丧失，如酶失去催化，如酶失去催化活力、激素活力、激素丧失活丧失活性，即蛋白质的性，即蛋白质的变性作用变性作用(denaturation)。变性只是蛋白质变性只是蛋白质空间构象的破坏空间构象的破坏，一般认，一般认为蛋白质变性的本质是为蛋白质变性的本质是次级键、二硫键的次级键、二硫键的破坏，并不涉及一级结构的变化破坏，并不涉及一级结构的变化。 引起蛋白质变性的原因可分为引起蛋白质变性的原因可分为物理物理和和化学化学因素两大类。物理因素可以是因素两大类。物理因素可以是加热加热、加压加压、脱水脱水、搅拌搅拌、振荡振荡、紫外线照射紫外线照射、超声波超声波的作用等；化学因素有的作用等；

11、化学因素有强酸强酸、强碱强碱、尿素尿素、重金属盐重金属盐、十二烷基磺酸钠十二烷基磺酸钠(sds)等。在临床医学上，变性因素常被应用于等。在临床医学上，变性因素常被应用于消毒及灭菌消毒及灭菌。反之，注意防止蛋白质变性。反之，注意防止蛋白质变性就能有效地就能有效地保存蛋白质制剂保存蛋白质制剂。在变性因素的作用下，可在变性因素的作用下，可导致各种变性现导致各种变性现象象。首先是。首先是生理活性丧失生理活性丧失，如酶变性后，失去，如酶变性后，失去催化功能；激素变性后，失去生理调节功能；微催化功能；激素变性后，失去生理调节功能；微生物体内的蛋白质变性后，微生物失去生命生物体内的蛋白质变性后，微生物失去生

12、命力而死亡。这是变性作用力而死亡。这是变性作用最主要的特征最主要的特征。此外，。此外，变性后的蛋白质还表现出各种变性后的蛋白质还表现出各种物理和化学性物理和化学性质的改变质的改变。天然蛋白质变性后，多肽链松弛伸展，。天然蛋白质变性后，多肽链松弛伸展，导致导致粘度增大粘度增大，内部的，内部的侧链疏水基团暴露侧链疏水基团暴露于表面，导致于表面，导致溶解度下降溶解度下降而易沉淀。同时由于变而易沉淀。同时由于变性后，结构松散，侧链基团暴露，还使得其性后，结构松散，侧链基团暴露，还使得其易于发生化学反应易于发生化学反应，例变性蛋白质，例变性蛋白质容易被酶水解容易被酶水解。由于疏水侧链暴露，可能导致由于疏

13、水侧链暴露，可能导致紫外吸收增加紫外吸收增加。 变性变性并非完全是并非完全是不可逆的变化不可逆的变化，当，当变性程度较轻变性程度较轻时，时，去除变性因素，有的蛋白质仍能去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复恢复或或部分恢复其原部分恢复其原来的构象及功能来的构象及功能，变性的可逆变化称为，变性的可逆变化称为复性复性(renaturation)。如核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键，。如核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键，在在-巯基乙醇巯基乙醇和和8 m尿素尿素作用下，发生变性，失去生物作用下，发生变性，失去生物学活性，变性后如经过学活性，变性后如经过透析透析去除尿素，去除尿素，-巯基乙醇，并巯基乙醇，并对空气

14、对空气缓慢氧化缓慢氧化使疏基氧化成二硫键，酶蛋白又可恢使疏基氧化成二硫键，酶蛋白又可恢复其原来的构象，酶学活性也几乎全部恢复，称为复其原来的构象，酶学活性也几乎全部恢复，称为变变性核糖核酸酶的复性性核糖核酸酶的复性。 许多蛋白质变性时被许多蛋白质变性时被破坏严重破坏严重，即使撤去变性因素也，即使撤去变性因素也不能恢复，称为不能恢复，称为不可逆性变性不可逆性变性。rnase的变性与复性的变性与复性在蛋白质溶液中在蛋白质溶液中加入大量的中性盐加入大量的中性盐以以破坏破坏蛋白质胶体的稳定性而使其析出蛋白质胶体的稳定性而使其析出，这种方法称，这种方法称为为盐析盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯。常

15、用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及所需的盐浓度及ph不同不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的调节蛋白质溶液的ph至至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好好。

16、硫酸铵对马血红蛋白的溶解度的影响硫酸铵对马血红蛋白的溶解度的影响离子强度（硫酸铵浓度）离子强度（硫酸铵浓度）(precipitation) 蛋白质分子蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象凝聚从溶液中析出的现象-蛋白质沉淀蛋白质沉淀，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。 蛋白质所形成的蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即，即颗粒表面的水化层颗粒表面的水化层和和电荷电荷。若无外加条件，不致互相凝。若无外加条件，不致互相

17、凝集。然而除掉这两个稳定因素集。然而除掉这两个稳定因素(如如调节溶液调节溶液ph至至pi和和加加入脱水剂入脱水剂)，蛋白质便容易凝集析出。但如将溶液，蛋白质便容易凝集析出。但如将溶液ph调调节到蛋白质节到蛋白质pi，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若

18、先使蛋白质脱水，然后再相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节调节ph到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。+-+-（沉淀沉淀）（疏水胶体）（疏水胶体）（疏水胶体）（疏水胶体） 蛋白质可以与蛋白质可以与重金属离子重金属离子如如汞、铅、铜、银汞、铅、铜、银等等结合结合成盐成盐沉淀，沉淀的条件以沉淀，沉淀的条件以ph稍大于等电点稍大于等电点为宜。因为此时蛋白质分子为宜。因为此时蛋白质分子有较多的负离子有较多的负离子，易，易与重金属离子结合成盐。重金属沉淀的蛋白质与重金属离子结合成盐。重金属沉淀的蛋白质常常是变性的是变性的，但若在，但若在低温条件低温条件

19、下，并下，并控制重金属离控制重金属离子浓度子浓度，也可用于，也可用于分离制备不变性的蛋白质分离制备不变性的蛋白质。 临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性质，质，抢救误服重金属盐中毒的病人抢救误服重金属盐中毒的病人，给病人，给病人口服口服大量蛋白质大量蛋白质，然后用，然后用催吐剂催吐剂将结合的重金属盐呕将结合的重金属盐呕吐出来解毒。吐出来解毒。 蛋白质可与蛋白质可与生物碱试剂生物碱试剂(如苦味酸、钨酸、如苦味酸、钨酸、鞣酸鞣酸)以及以及某些酸某些酸(如如三氯醋酸、过氯酸、三氯醋酸、过氯酸、硝酸硝酸)结合成结合成不溶性的盐沉淀不溶性的盐沉淀，沉淀的条件，

20、沉淀的条件应当是应当是ph小于等电点小于等电点，这样蛋白质带正电，这样蛋白质带正电荷易于与酸根负离子结合成盐。荷易于与酸根负离子结合成盐。 临床血液化学分析时常利用此原理临床血液化学分析时常利用此原理除去除去血液中的蛋白质血液中的蛋白质，此类沉淀反应也可用于，此类沉淀反应也可用于检验尿中蛋白质检验尿中蛋白质。可可与水混合的有机溶剂与水混合的有机溶剂，如酒精、甲，如酒精、甲醇、丙酮等，对水的亲和力很大，能醇、丙酮等，对水的亲和力很大，能破坏破坏蛋白质颗粒的水化膜蛋白质颗粒的水化膜，在等电点时使蛋白，在等电点时使蛋白质沉淀。在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质质沉淀。在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变

21、性往往引起变性。例如酒精消毒灭菌就是如。例如酒精消毒灭菌就是如此，但若在此，但若在低温条件低温条件下，则变性进行较缓下，则变性进行较缓慢，可用于慢，可用于分离制备各种血浆蛋白质分离制备各种血浆蛋白质。 指沉淀出来的蛋白质分子，其指沉淀出来的蛋白质分子，其内部结构发生了内部结构发生了较大的改变较大的改变，蛋白质已，蛋白质已失去了原来的生物活性失去了原来的生物活性，即使沉淀因素消失，即使沉淀因素消失，沉淀也不重新溶解沉淀也不重新溶解。 在蛋白质溶液中加入某些在蛋白质溶液中加入某些水溶性的有机溶剂水溶性的有机溶剂，如丙酮、乙醇等，由于这些溶剂与水的亲和力如丙酮、乙醇等，由于这些溶剂与水的亲和力大于蛋

22、白质，破坏了蛋白质胶体外层的水化膜，大于蛋白质，破坏了蛋白质胶体外层的水化膜，并可逐步进入蛋白质的内部，有利于蛋白质的并可逐步进入蛋白质的内部，有利于蛋白质的沉淀，此种作用在沉淀，此种作用在短时间及低温时，沉淀是可短时间及低温时，沉淀是可逆的逆的，但，但作用时间长或温度较高作用时间长或温度较高时，则是时，则是不可不可逆沉淀逆沉淀。三氯乙酸、苦味酸、磷钨酸、鞣酸等三氯乙酸、苦味酸、磷钨酸、鞣酸等生物生物碱碱沉淀试剂，能与蛋白质阳离子结合生成沉淀试剂，能与蛋白质阳离子结合生成不溶物不溶物, 而使蛋白质发生不可逆沉淀。如：而使蛋白质发生不可逆沉淀。如： +h3n-pr-coo- + cl3c-coo

23、- h2n-pr-coo-o-co-ccl3 cu2+、hg2+、pb2+、ag+等重金属阳离子，等重金属阳离子，能与蛋白质阴离子结合生成不溶物，使蛋能与蛋白质阴离子结合生成不溶物，使蛋白质发生不可逆沉淀。例如：白质发生不可逆沉淀。例如： h2n-pr-coo- +ag+ h2n-pr-cooag(coagulation) 将接近于等电点附近的蛋白质溶液将接近于等电点附近的蛋白质溶液加热加热，可使蛋白质，可使蛋白质发生发生凝固而沉淀凝固而沉淀。加热首先使蛋白质变性，。加热首先使蛋白质变性，有规则的肽有规则的肽链结构被打开呈松散状不规则的结构链结构被打开呈松散状不规则的结构，分子的不对称性，分子

24、的不对称性增加，增加，疏水基团暴露疏水基团暴露，进而，进而凝聚成凝胶状的蛋白块凝聚成凝胶状的蛋白块。如。如煮熟的鸡蛋，蛋黄和蛋清都凝固。煮熟的鸡蛋，蛋黄和蛋清都凝固。 蛋白质的变性、沉淀、凝固之间有密切的关系。但蛋白质的变性、沉淀、凝固之间有密切的关系。但蛋蛋白质变性后并不一定沉淀白质变性后并不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近变性蛋白质只在等电点附近才沉淀才沉淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固沉淀的变性蛋白质也不一定凝固。如蛋白质被。如蛋白质被强酸、强碱变性后由于蛋白质颗粒带有大量电荷，仍溶强酸、强碱变性后由于蛋白质颗粒带有大量电荷，仍溶于强酸或强减之中。但若将强碱或强酸溶液的于强酸或强减之中

25、。但若将强碱或强酸溶液的ph调节调节到到pi，则变性蛋白质凝集成絮状沉淀物，若将此絮状物，则变性蛋白质凝集成絮状沉淀物，若将此絮状物加热，则分子间相互盘缠而变成较为坚固的凝块。加热，则分子间相互盘缠而变成较为坚固的凝块。波长波长：280 nm引起紫外吸收的因素：主要是引起紫外吸收的因素：主要是色氨酸色氨酸( trp）和）和酪氨酸酪氨酸（ tyr)的共轭双键，的共轭双键，phe在在紫外光区也紫外光区也有光吸收。有光吸收。可用于可用于蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定。波长范围：波长范围：200-400 nm1. 双缩脲反应双缩脲反应(biuret reaction)，蛋白质在，蛋白质在碱碱性溶液中

26、与性溶液中与硫酸铜硫酸铜作用呈现作用呈现紫红色紫红色，称，称双缩脲反双缩脲反应应。凡分子中含有。凡分子中含有两个以上两个以上conh键的化键的化合物都呈此反应合物都呈此反应，蛋白质分子中氨基酸是以肽键，蛋白质分子中氨基酸是以肽键相连，因此相连，因此所有蛋白质都能与双缩脲试剂发生反所有蛋白质都能与双缩脲试剂发生反应应。2. 米伦反应米伦反应(millon reaction)，蛋白质溶液中，蛋白质溶液中加入加入米伦试剂米伦试剂(亚硝酸汞、硝酸汞及硝酸的混和亚硝酸汞、硝酸汞及硝酸的混和液液)，蛋白质首先沉淀，加热则变为红色沉淀蛋白质首先沉淀，加热则变为红色沉淀，此，此为为酪氨酸的酚核所特有的反应酪氨

27、酸的酚核所特有的反应，因此，因此含有酪氨酸含有酪氨酸的蛋白质均呈的蛋白质均呈米伦反应（米伦反应（5 mg/ml）。3. 茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction) ，氨氨基酸与水合茚三酮基酸与水合茚三酮(苯丙环三酮戊烃苯丙环三酮戊烃)作用时，产作用时，产生蓝色反应，由于蛋白质是由许多生蓝色反应，由于蛋白质是由许多氨基酸组氨基酸组成的，所以也呈此颜色反应。成的，所以也呈此颜色反应。4. 黄蛋白反应黄蛋白反应，蛋白质分子中若存在，蛋白质分子中若存在含有含有苯环的氨基酸苯环的氨基酸（如（如tyr、phe等），当其等），当其与硝酸与硝酸共热共热时，则时，则呈黄色呈黄色，再，再加碱则颜

28、色变为橙黄加碱则颜色变为橙黄。这一反应称为这一反应称为黄蛋白反应黄蛋白反应。一般蛋白质常含有。一般蛋白质常含有tyr和和phe残基，因此这一反应是蛋白质较为普残基，因此这一反应是蛋白质较为普遍的颜色反应。遍的颜色反应。 5. 含硫蛋白质含硫蛋白质的反应，如果蛋白质分子中的反应，如果蛋白质分子中含有含有cys或或met残基，当残基，当与碱及醋酸铅共热时与碱及醋酸铅共热时，分解产生的分解产生的硫遇铅硫遇铅盐即产生盐即产生黑色的硫化铅沉淀黑色的硫化铅沉淀。6. 色氨酸反应色氨酸反应，将蛋白质溶液与几滴，将蛋白质溶液与几滴乙醛乙醛酸酸混合后，再沿器壁慢慢加入混合后，再沿器壁慢慢加入浓硫酸浓硫酸，如果蛋

29、白，如果蛋白质分子侧链中有质分子侧链中有吲哚环吲哚环，则两液层的界面上会出，则两液层的界面上会出现现紫色环紫色环，这个反应称为，这个反应称为色氨酸反应色氨酸反应，又称为，又称为乙乙醛酸反应或霍普金（醛酸反应或霍普金（hopking）反应）反应。可用来检。可用来检验蛋白质或肽的分子中是否有验蛋白质或肽的分子中是否有trp残基。残基。一般说来，一般说来，动物性食品的蛋白质含量高于植物性动物性食品的蛋白质含量高于植物性食品食品，以下几种食品的蛋白质含量大约为：，以下几种食品的蛋白质含量大约为： 牛肉牛肉 20.0% 猪肉猪肉 9.5% 兔肉兔肉 21% 鸡肉鸡肉 20% 牛乳牛乳 3.5% 带鱼带鱼

30、 18.0% 大豆大豆 40% 面粉面粉 9.9% 菠菜菠菜 2.4% 黄瓜黄瓜 1.0% 苹果苹果 1.4% 测定食品中的蛋白质的含量，对于测定食品中的蛋白质的含量，对于评价食品的营养评价食品的营养价值、合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食价值、合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食品配方、指导经济核算及生产过程控制品配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极其重要均具有极其重要的意义。的意义。1、根据化学组成测定最低分子量根据化学组成测定最低分子量用化学分析方法用化学分析方法测出蛋白质中某一微量元素的含量测出蛋白质中某一微量元素的含量，并，并假设分子中只有一个这种元素的原子假设分子

31、中只有一个这种元素的原子，就可以计算出蛋白质的，就可以计算出蛋白质的最低分子量最低分子量。如肌红蛋白含铁如肌红蛋白含铁0.335%，其最低分子量：，其最低分子量：最低分子量最低分子量铁的原子量铁的原子量铁的百分含量铁的百分含量100=16700与其他方法测定结果极为接近，可见肌红蛋白中只含一个铁原与其他方法测定结果极为接近，可见肌红蛋白中只含一个铁原子。真实分子量是最低原子量的子。真实分子量是最低原子量的n倍，倍，n是蛋白质中铁原子的数是蛋白质中铁原子的数目，肌红蛋白目，肌红蛋白n1。血红蛋白铁含量也是血红蛋白铁含量也是0.335%，最低分子量也是，最低分子量也是16700，因为含因为含4个铁

32、原子，所以个铁原子，所以n4，因此其真实分子量为，因此其真实分子量为66800。有时蛋白质分子中有时蛋白质分子中某种氨基酸含量很少某种氨基酸含量很少，也可用这种方，也可用这种方法法计算最低分子量计算最低分子量。如牛血清白蛋白含色氨酸。如牛血清白蛋白含色氨酸0.58%，最低分，最低分子量为子量为35200，用其他方法测得分子量为，用其他方法测得分子量为69000，所以其分子中，所以其分子中含两个色氨酸。含两个色氨酸。最低分子量只有与其他方法配合才能确定真实最低分子量只有与其他方法配合才能确定真实分子量分子量。2、渗透压法、渗透压法理想溶液中，理想溶液中，渗透压是浓度的线性函数渗透压是浓度的线性函

33、数，而与，而与溶质的形状无关。所以可用渗透压计算蛋白质的分子溶质的形状无关。所以可用渗透压计算蛋白质的分子量。但是量。但是实际的高分子溶液与理想溶液有较大偏差实际的高分子溶液与理想溶液有较大偏差，当蛋白质浓度不大时，可用以下公式计算：当蛋白质浓度不大时，可用以下公式计算： /c =rt/m + kc m=rt/lim( /c) 其中其中r是气体常数是气体常数(0.082)，t是绝对温度是绝对温度， 是渗透压是渗透压（以大气压计），（以大气压计），c溶质浓度溶质浓度（g/l）。测定时需测定）。测定时需测定几个不同浓度的渗透压，几个不同浓度的渗透压，以以 /c对对c作图作图并外推求并外推求出出c为

34、为零时零时的的 /c值值，带入公式求出分子量带入公式求出分子量（1-100000）。）。方法简单准确，与蛋白质的形状和水化程度无方法简单准确，与蛋白质的形状和水化程度无关，但关，但要求样品均一要求样品均一，否则测定结果是样品中各种蛋，否则测定结果是样品中各种蛋白的平均分子量。白的平均分子量。 c03、沉降分析法、沉降分析法蛋白质在溶液中受到强大离心力作用时，如其密蛋白质在溶液中受到强大离心力作用时，如其密度大于溶液密度，就会沉降。用超速离心机（每分钟度大于溶液密度，就会沉降。用超速离心机（每分钟68万转）测定蛋白质的分子量有两种方法：万转）测定蛋白质的分子量有两种方法：沉降速度沉降速度法法和和

35、沉降平衡法沉降平衡法。沉降速度法沉降速度法： m=rtsd (1v)其中其中d是扩散系数，是扩散系数，v是蛋白质的偏微分比容，是蛋白质的偏微分比容，是溶剂是溶剂的密度。的密度。偏微分比容的定义偏微分比容的定义是：当加入是：当加入1克干物质于无克干物质于无限大体积的溶剂中时，溶液的体积增量。限大体积的溶剂中时，溶液的体积增量。蛋白质溶于蛋白质溶于水的偏微分比容约为水的偏微分比容约为0.74立方厘米每克立方厘米每克。为获得准确结。为获得准确结果，果，s和和d的值应外推到无限稀释的值应外推到无限稀释。其中的。其中的r是气体常数，是气体常数，在采用厘米在采用厘米.克克.秒制时，等于秒制时，等于8.31

36、4107尔格尔格/秒。秒。沉降平衡法沉降平衡法 在离心过程中，外围高浓度区的蛋白质向在离心过程中，外围高浓度区的蛋白质向中心扩散，如转速较低，二者可达到稳定平衡。中心扩散，如转速较低，二者可达到稳定平衡。此时测定离心管中不同区域的蛋白浓度，可按此时测定离心管中不同区域的蛋白浓度，可按下式计算分子量：下式计算分子量： m=2rtln(c2/c1)2(1v)(x22x12)其中其中c2和和c1是离轴心距离为是离轴心距离为x2和和x1时的蛋白时的蛋白质浓度，质浓度，x为蛋白质界面到旋转中心的距离，为蛋白质界面到旋转中心的距离， 为溶剂的密度，为溶剂的密度， 为角速度，为角速度，v为蛋白质的偏微为蛋白

37、质的偏微比容。比容。沉降平衡法的优点是沉降平衡法的优点是不需要扩散系数不需要扩散系数，且且离心速度较低离心速度较低（800020000转每分），但要转每分），但要达到达到平衡常常需要几天时间平衡常常需要几天时间。4、分子排阻层析法分子排阻层析法层析柱中填充凝胶颗粒，凝胶的网格大小层析柱中填充凝胶颗粒，凝胶的网格大小可通过交联剂含量控制。可通过交联剂含量控制。小分子物质可进入网小分子物质可进入网格中，流出慢格中，流出慢；大分子被排阻在颗粒外，流经大分子被排阻在颗粒外，流经距离短，流出快距离短，流出快。此方法较简单，但与分子形。此方法较简单，但与分子形状有关。测分子量时，标准蛋白的分子形状应状有关

38、。测分子量时，标准蛋白的分子形状应与待测蛋白相同。与待测蛋白相同。 lgmk1k2 ve其中其中ve是洗脱体积，即从加样到出峰时流是洗脱体积，即从加样到出峰时流出的体积，出的体积，k1和和k2是常数，随实验条件而定。是常数，随实验条件而定。先测定几种标准蛋白质的先测定几种标准蛋白质的ve, 以它们的以它们的logm对对ve作图得标准曲线，由待测样品的作图得标准曲线，由待测样品的ve可求得。可求得。5、 sds聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质电泳时的迁移率与其所带净电荷、分子蛋白质电泳时的迁移率与其所带净电荷、分子大小和形状有关，加入大小和形状有关，加入sds后，每克蛋白可结合后，每克

39、蛋白可结合1.4克克sds，将原有电荷掩盖，而且使分子变成棒状。由，将原有电荷掩盖，而且使分子变成棒状。由于凝胶的分子筛效应，相对迁移率于凝胶的分子筛效应，相对迁移率r与分子量有如与分子量有如下关系：下关系： lgm=k1k2r其中其中k1和和k2是与试验条件有关的常数，是与试验条件有关的常数，r为为相对迁移率相对迁移率=样品迁移距离样品迁移距离/染料前沿迁移距离染料前沿迁移距离。用已。用已知分子量的标准蛋白作标准曲线，即可求出未知蛋知分子量的标准蛋白作标准曲线，即可求出未知蛋白的分子量。有些蛋白不适宜采用这个方法，如带白的分子量。有些蛋白不适宜采用这个方法，如带电荷较多的（组蛋白），带较大辅

40、基的（糖蛋白），电荷较多的（组蛋白），带较大辅基的（糖蛋白），结构特殊的（胶原）等。结构特殊的（胶原）等。6、激光解吸电离飞行时间曲线、激光解吸电离飞行时间曲线(ldi-tof-ms)高度纯化的蛋白质样品与有机酸混高度纯化的蛋白质样品与有机酸混合，在靶金属表面干燥；合，在靶金属表面干燥；激光发出的射线使蛋白质离子化，激光发出的射线使蛋白质离子化，离子经加速后飞入自由漂移区，最离子经加速后飞入自由漂移区，最后到达检测器；后到达检测器；飞行时间与分子量成反比，与电量飞行时间与分子量成反比，与电量成正比；成正比；测定误差测定误差0.0001。浓硫酸加热降解蛋白质后测定浓硫酸加热降解蛋白质后测定nh3

41、cuso4与肽链的氨基结合与肽链的氨基结合芳香族氨基酸侧链发色芳香族氨基酸侧链发色280 nm处的紫外吸收处的紫外吸收 (1 od280 = 1 mg/ml) 考马斯亮兰考马斯亮兰 ( coomassie brilliant blue g250)与肽链结合后吸收谱变化与肽链结合后吸收谱变化蛋白质的含氮量一般为蛋白质的含氮量一般为15-17%，有上下浮动的差别，可以测出总氮有上下浮动的差别，可以测出总氮(n) = n6.25 = 蛋白质含量蛋白质含量 1833年，由年，由kieldhl提出定氮法，现已提出定氮法，现已发展为常量、微量、自动定氮仪法，半微发展为常量、微量、自动定氮仪法，半微量法及改

42、良凯氏法。量法及改良凯氏法。16%n原理：样品原理：样品与浓硫酸和催化剂与浓硫酸和催化剂一同加热一同加热消化消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨，有机氮转化为氨，与硫与硫酸结合成酸结合成硫酸铵硫酸铵；然后；然后加碱蒸馏加碱蒸馏，使氨蒸出。，使氨蒸出。用用h3bo3吸收吸收后再以后再以标准标准hcl溶液滴定溶液滴定。根据标准。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。也可以用过量的标准也可以用过量的标准h2so4或标准或标准hcl溶液吸收后溶液吸收后再以标准再以标

43、准naoh滴定过量的酸。滴定过量的酸。 整个过程分为：整个过程分为：消化、蒸馏、吸收与滴定。消化、蒸馏、吸收与滴定。1、原理及适用范围同前、原理及适用范围同前2、与常量法不同点：、与常量法不同点：加入硼酸量由加入硼酸量由50 ml 10 ml,滴定用盐酸浓度由滴定用盐酸浓度由0.1 mol/l 0.01 mol/l ,可用微量滴定管。可用微量滴定管。微量凯氏定氮蒸馏装置微量凯氏定氮蒸馏装置原理及适用范围同前原理及适用范围同前 特点：特点：（1）消化装置用优质玻璃制成的）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，凯氏消化瓶，红外线加热的消化炉红外线加热的消化炉。（2）快速：一次可）快速：一次可同时消化

44、同时消化8个样品，个样品，30分钟可分钟可消化完毕消化完毕。（3）自动：）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动数字显示装置自动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，。可计算总氮百分含量并记录，12分钟完成分钟完成1个样品的测定个样品的测定。1.测定范围：测定范围：0.1-200 mg氮氮 2.蒸馏时间：蒸馏时间：3.5分钟分钟/样品样品（30 mg氮）氮）3.蒸馏能力：蒸馏能力：40 ml/分钟分钟4.滴定精度：滴定精度：3.8 ul/步，最快步，最快40 ml/分钟分钟5.重现性：重现性：1%相对误差（包相对误差（包括消化过程）括消化过程）6.回收率：回收

45、率：99.5% （1-200 mg 氮）氮）7.数据存储：数据存储：400个样品个样品8.试管排空：试管排空：200 ml在在2秒内秒内完成完成9.试剂泵体积：试剂泵体积：0-150 ml，10 ml/级级kjeltec 2300 自动凯氏定自动凯氏定氮仪氮仪 丹麦丹麦 蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在反应。在碱性溶液中蛋白质与碱性溶液中蛋白质与cu2形成紫红形成紫红色络合物色络合物，其，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比正比，而，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关关，因此被广泛地应用。，

46、因此被广泛地应用。 在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于准蛋白质溶液同时反应，并于540-560 nm下下比色测定光密度（比色测定光密度（od或或a），可以），可以通过标准通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度度。标准蛋白质溶液可以用结晶的牛（或人）。标准蛋白质溶液可以用结晶的牛（或人）血清清蛋白、卵清蛋白或粉末配制。血清清蛋白、卵清蛋白或粉末配制。原理：脲（尿素）原理：脲（尿素）nh2conh2 加热至加热至150160时，两分子缩合成双缩脲。时，两分子缩合成双缩脲。双缩脲能双缩

47、脲能与碱性硫酸铜与碱性硫酸铜溶液生成溶液生成紫红（或蓝紫）紫红（或蓝紫）色络和物色络和物，这种反应叫，这种反应叫双缩脲反应双缩脲反应。（缩二脲反应）蛋。（缩二脲反应）蛋白质分子中含有肽键白质分子中含有肽键 conh，与双缩脲结构相，与双缩脲结构相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定范围内，其似。在同样条件下也有呈色反应，在一定范围内，其颜颜色深浅与蛋白质含量成正比色深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计来测其吸，可用分光光度计来测其吸光度，确定含量（光度，确定含量（560 nm） 。nh2conhconh2 + nh3nh2conh2 + nh2conh2folin-酚试剂法包括两步反应：第一

48、步是在酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络铜络合物合物；第二步是此；第二步是此络合物将磷钼酸络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂磷钨酸试剂（folin 酚试剂）酚试剂）还原还原，产生，产生深蓝色深蓝色（磷钼蓝和（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高灵敏度比双缩脲法高100 倍倍，定，定量范围为量范围为5-100g 蛋白质。蛋白质。folin 试剂显色反应试剂显色反应由由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样

49、品中引起，因此样品中若含有若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。也称使显色强度稍有不同。也称改良改良lowry法法。 大多数蛋白质由于有大多数蛋白质由于有trp和和tyr的存在，在紫外的存在，在紫外280 nm有吸收高峰，以此可以进行蛋白质含量的测定。有吸收高峰，以此可以进行蛋白质含量的测定。 通常以浓度通常以浓度1 mg蛋白质蛋白质/ml溶液的溶液的a280为为1.0进行估算。进行估算。若已知该蛋白质的文献值，可直接计算出样品溶液若已知该蛋白质的

50、文献值，可直接计算出样品溶液中蛋白质的浓度。中蛋白质的浓度。 蛋白质浓度蛋白质浓度(mg/m1)=1.45 a280-0.74 a260 (假设假设1mg蛋蛋白质白质/ml溶液的溶液的a280为为1.0) 蛋白质含量蛋白质含量（mg/ml）=1.55 a280-0.76 a260 215 nm和和225 nm的吸收差法的吸收差法，蛋白质的肽键在，蛋白质的肽键在200-250 nm有强的紫外光吸收，其光吸收强弱在一定范有强的紫外光吸收，其光吸收强弱在一定范围内与浓度成正比，且波长越短光吸收越强。围内与浓度成正比，且波长越短光吸收越强。蛋白蛋白质浓度质浓度(mg/ml)=0.144(a215-a2

51、25) (测定范围为测定范围为20-100g蛋白质蛋白质/ml) a205a280a205a215a225 a280a260 a235a280a230a260the protein protocols handbook , by john m.walker, humana press. 碱性溶液中，蛋白质将二价铜碱性溶液中，蛋白质将二价铜(cu2+)还原成还原成一价铜一价铜(cu+ )，后者与测定试剂中，后者与测定试剂中bca bicinchoninic acid，双辛丹宁双辛丹宁(金鸡宁金鸡宁)生成一生成一个在个在562 nm处具有最大光吸收的处具有最大光吸收的紫色复合物紫色复合物。复合物的

52、复合物的光吸收强度与蛋白质浓度正比光吸收强度与蛋白质浓度正比。此法。此法测定范围测定范围100-1200g蛋白质蛋白质/ml。bca法操作简法操作简单，灵敏度虽与单，灵敏度虽与folin-酚法相似，但它的试剂十酚法相似，但它的试剂十分稳定，因此对时间控制不需那么严格。显色分稳定，因此对时间控制不需那么严格。显色后，后，1h内读内读a562值无变化，抗试剂干扰的能力强。值无变化，抗试剂干扰的能力强。（coomassie brilliant blue, cbb1976年由年由bradford建立的建立的考马斯亮兰法考马斯亮兰法-bradford法法，根据，根据蛋白质与蛋白质与cbb结合结合的原理设

53、计。这种测定法的原理设计。这种测定法具有超过其他几种方法突出的优点，得到广泛的应用。具有超过其他几种方法突出的优点，得到广泛的应用。是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。cbb g-250染料染料在酸性溶液中与蛋白质结合，使在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的染料的最大吸收峰的位置由位置由465 nm变为变为595 nm，溶液的，溶液的颜色也由棕黑色变颜色也由棕黑色变为兰色为兰色。染料主要是与。染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。595 nm下测下测定的吸光度值

54、定的吸光度值a595，与蛋白质浓度成正比。，与蛋白质浓度成正比。优点优点：（1）灵敏度高，最低蛋白质检测量可达）灵敏度高，最低蛋白质检测量可达1 ug。（2）快速、简便，只需加一种试剂。）快速、简便，只需加一种试剂。（3）干扰物质少。）干扰物质少。缺点缺点：（1）由于各种蛋白质中的）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同量不同，因此，因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g-球蛋白为标球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。准蛋白质，以减少这方面的偏差。（2）

55、仍有一些物质干扰此法的测定，主要的）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质干扰物质有：去污剂、有：去污剂、 triton x-100、十二烷基硫酸钠（、十二烷基硫酸钠（sds）和和0.1n的的naoh。（3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用beer定定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。浓度。 纯化蛋白质（酶）的最终目标：增加纯度纯化蛋白质（酶）的最终目标：增加纯度或比活性，并使产量达到最高值。或比活性，并使产量达到最高值。 1.1.前处理前处理 （提取）（提取）2.2.粗分级粗分级 （

56、初提纯）（初提纯）3.3.细分级细分级 （精纯化）（精纯化）basic principles of protein purificationammonium sulfate fractionationcellorganellehomogenizationmacromoleculenucleic acidcarbohydrate(lipid)sizechargepolarityaffinitysmall moleculecell debrisproteinamino acid, sugar,nucleotides, etc gel filtration,sds-page,ultrafiltrat

57、ionion exchange,chromatofocusing,disc-page,isoelectric focusingreverse phasechromatography,hic,salting-outaffinitychromatography,hydroxyapatitejuang rh (2004) bcbasics 研究研究蛋白质的蛋白质的性质、功能、氨基酸组成性质、功能、氨基酸组成及序列测定及序列测定，必须制备纯的蛋白质。一，必须制备纯的蛋白质。一个细胞含有成千上万种不同的蛋白质，个细胞含有成千上万种不同的蛋白质，如何由其中分离获得其中的某个蛋白质？如何由其中分离获得其中的

58、某个蛋白质？ 分离纯化蛋白质的方法分离纯化蛋白质的方法利用了不同蛋白利用了不同蛋白质分子之间不同的理化性质质分子之间不同的理化性质，如：许多，如：许多蛋白质能高特异性地与其他生物分子结蛋白质能高特异性地与其他生物分子结合，这些蛋白质的分离纯化就可以利用合，这些蛋白质的分离纯化就可以利用这一特性。这一特性。蛋白质的来源通常是蛋白质的来源通常是生物组织生物组织或或微生物细微生物细胞胞。分离纯化的。分离纯化的第一步是要破碎这些细胞第一步是要破碎这些细胞，将其，将其中的蛋白质释放到溶液中中的蛋白质释放到溶液中粗提液粗提液(crude extract)。如果需要，可以用。如果需要，可以用不同的离心力不同

59、的离心力对样对样品进行离心，制备品进行离心，制备亚细胞组分亚细胞组分或或分离特定的细胞分离特定的细胞器器。细胞器如核、线粒体、溶酶体等，它们大小。细胞器如核、线粒体、溶酶体等，它们大小不同，离心时的沉降速度不同，在不同的密度梯不同，离心时的沉降速度不同，在不同的密度梯度中由于不同的比重，浮沉的位置不同。不同的度中由于不同的比重，浮沉的位置不同。不同的离心可以获得不同的组分。离心可以获得不同的组分。subcellular fractionation of tissuefractionationisopycnic centrifugation等密度（梯度）离心等密度（梯度）离心一旦完成提取物粗抽提

60、或细胞器的制备，一旦完成提取物粗抽提或细胞器的制备，多种方法可以用于纯化其中的蛋白质。通常，多种方法可以用于纯化其中的蛋白质。通常，利利用蛋白质的大小或带电特性用蛋白质的大小或带电特性将混合物中的蛋白质将混合物中的蛋白质分离成不同的组分分离成不同的组分分部分离分部分离。早期纯化的分部。早期纯化的分部分离利用蛋白质的分离利用蛋白质的溶解度的不同溶解度的不同，其中涉及其中涉及ph、温度、盐浓度及其他因素温度、盐浓度及其他因素。通常蛋白质在高盐浓。通常蛋白质在高盐浓度下的溶解度降低度下的溶解度降低盐析盐析(salting out)，在蛋白，在蛋白质溶液中增加盐，可以在一些蛋白质处于溶解时质溶液中增加