饲料非常规检测手册

1、非常规项目检测方法手册二00八年九月目 录一、 饲料中粗纤维含量的测定-3二、 中性洗涤纤维检测方法-5三、 油脂TBA值的测定方法-6四、 KOH溶解度的测定方法-7五、 尿素酶活性(快速简单的估测方法)-8六、 挥发性盐基氮(半微量定氮法) -9七、 枸溶磷含量的测定-11八、 水溶液磷含量的测定-12九、 油脂中过氧化值的测定-12十、 皂化价的测定-13十一、 油脂酸价的测定-15十二、 玉米脂肪酸值测定方法-15十三、 油脂碘价的测定-19十四、 真蛋白的测定-21十五、 糊化度的测定-22十六、 配合饲料混合均匀度的测定-25十七、 玉米酒精糟浆液测定判断-26一、饲料中粗纤维含量

2、的测定1、原理用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维，它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。2、试剂本方法试剂使用分析纯，水为蒸馏水。标准溶液按GB601制备。2.1硫酸(GB 625)溶液0.128±0.005mol/L：氢氧化钠标准溶液标定，7ml/1000。2.2氢氧化钠(GB 629)溶液，0.313±0.005mol/L：邻苯二甲酸氢钾法标定13.04g/1000ml。2.3酸洗石棉HG 3-1062。2.4 95%乙醇(GB

3、679)。2.5乙醚(HG 3-1002)。2.6正辛醇(防泡剂)。3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机。 分样筛：孔径1mm，(18目)。3.3分析天平：感量0.0001g。3.4电加热器(电炉)，可调节温度。3.5电热恒温箱(烘箱)：可控制温度在130。3.6高温炉：有高温计可控制温度在500600。3.7消煮器：有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶。3.8抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶和漏斗。(滤器使用200目不锈钢网或尼龙滤布)。3.9古氏坩埚：30mL，预先加入酸洗石棉悬浮液30mL(内含酸洗石棉0.20.3g)再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。上下铺两层玻璃纤维有助于过滤

4、。3.10干燥器，以氯化钙或变色硅胶为干燥剂。3.11粗纤维测定仪器：国内外生产的符合本标准测定原理，且测定结果一致的仪器。4、操作步骤称取12g试样，准确至0.0002g，用乙醚脱脂，(含脂肪大于10%必须脱脂，含脂肪不大于10%，可不脱脂)，放入消煮器(3.7)，加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液(2.1)200mL和1滴正辛醇，立即加热，应使其在2min内沸腾，调整加热器，使溶液保持微沸，且连续微沸30min，注意保持硫酸浓度不变。试样不应离开溶液沾到瓶壁上。随后抽滤，残渣用沸蒸馏水洗至中性后抽干。用浓度准确且已沸腾的氢氧化钠溶液(2.2)将残渣转移至原容器中并加至200mL，同样准确微沸30

5、min，立即在铺有石棉的古氏坩埚上过滤，先用25mL硫酸溶液洗涤，残渣无损失地转移到坩埚(3.9)中，用沸蒸馏水洗至中性，再用15mL乙醇(2.4)洗涤，抽干。将坩埚(3.9)放入烘箱(3.5)，于130±2下烘干2h，取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温，称重，再于550±25高温炉中(3.6)灼烧30min，取出后于干燥器中(3.10)冷却至室温后称重。推荐方法：称12g试样(脱脂步骤同手工方法)于G2玻璃沙漏斗中，用坩埚夹将漏斗插入热萃取器；从顶部加入预先煮沸的硫酸溶液200mL和两滴正辛醇，将加热旋扭开到最大位置，待溶液沸腾后，将旋扭调到合适位置，使溶液保持微沸3

6、0min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，加入预先煮沸的氢氧化钠溶液200mL，同样准确微沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，将坩埚(3.9)转移至冷萃取器，加入25mL95%乙醇，抽干，将漏斗转移到烘箱(3.5)，于130±2下烘干2h，取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温，称重。再放入500±25高温炉(3.6)中灼烧1h，干燥器(3.10)中冷却至室温后称重。型号不同的仪器具体操作步骤见该仪器使用说明书。5、计算粗纤维(%)(m1-m2)/m式中：m1130烘干后坩埚及试样残渣重，g；m2550(或500)灼烧后坩埚及试样残渣重，g；m试样(未脱脂)质量，g。6、注意

7、事项：每个试样取两平行样进行测定，以算术平均值为结果。粗纤维含量在10%以下，绝对值相差0.4。粗纤维含量在10%以上，相对偏差为4%。二、中性洗涤纤维检测方法1、试剂（1）中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O ）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O ），一同放入1000mL烧杯中，加入600mL蒸馏水，加热溶解后，加入30g十二烷基硫酸钠(C12H25NaO4S )和10mL乙二醇乙醚,搅拌并微热使其溶解;另称取4.56g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中，加200mL蒸馏水微微加热溶解后，倒入第一个

8、烧杯中，在容量瓶中稀释至1000mL。此溶液PH值在6.9-7.1左右。（PH值一般不需要调整）（2）无水亚硫酸钠 AR2、步骤（1） 称量0.5-1.0g(准确至0.001g)样品于250mL三角烧瓶中(样品粉碎20-40目)。（2）向三角烧瓶中加入事先煮沸的中性洗涤剂100mL,消泡剂3滴，加约0.5无水亚硫酸钠。（3）在三角烧瓶上放置一个漏斗，将三角烧瓶放在电炉上保持微沸1h.其间要多次适量的向三角瓶中补充一些蒸馏水(保持100mL)。（4）煮沸完毕后冷却10min,将已恒重的G1(G0)砂芯坩埚安在抽滤瓶上，将三角瓶内的物质全部移入砂芯坩埚中，抽滤，并用适量的沸水冲洗2次。（5）用20

9、mL丙酮冲洗两次，抽滤。（6）取下坩埚在105ºC烘干到恒重(约3-4h),冷却后称重。 3、计算NDF%=(烘干后总重量空坩埚重量)/样品质量*100指标：NDF<32% 质量佳， NDF<35% 合格。 三、油脂TBA值的测定方法1、原理油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。2、试剂2.1 TBA水溶液：准确称取TBA0.288g溶于水中，并稀释至100mL（如TBA不易溶解

10、，可加热至全溶澄清，然后稀释至100mL），相当于0.02M；2.2 三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100mL；2.3 氯仿（分析纯）；2.4 丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL，此溶液每mL相当于丙二醛100g，置于冰箱内保存。准确吸取10mL，稀释至100mL，此溶液每mL相当于丙二醛10g，备用。3、操作步骤（1）标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛10g的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置于纳氏比色管中，加水至总体积为5mL，加入5mLTBA溶液

11、，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。（2）样品测定：准确称取融化均匀的油脂样品30g，置于100mL有盖三角瓶内，加入50mL三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在70水浴上略微加热使之融化后继续振摇）用双层滤纸过滤，除去油脂。滤液重复用双层滤纸过滤一次。准确移取上述滤液5mL置于25mL比色管内，加入5mLTBA溶液，混匀，加塞，置于90水浴内保温40min，取出，冷却1h，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。4、计算 丙二醛含量（mg/kg）=C×50 5×m式中C从标准曲线查得丙二

12、醛的微克数(ug) m-样品质量（g）四、KOH溶解度的测定方法1、试剂 （1）0.2%的氢氧化钾(KOH)溶液，相当于0.042当量,pH为12.5。 （2）其它试剂为凯氏定氮所需的试剂。 （3）称取2.360g KOH于溶量瓶中，加水溶解并稀释至1000mL。 注意补充KOH试剂的纯度。2、测定步骤 （1）称取1.5g过 60目筛的豆粕，置于 250mL烧杯中，加入 75mL0.2%的KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分钟； （2）之后，移入50mL溶液于离心管中，以2700转分的速度离心10分钟。 （3）取15mL上清液进行凯氏定氮。 （4）用标准定氮法测定15mL溶液中的蛋白质含量，若

13、按此法测定，该15mL上清液相当于0.3g原样本。3、计算方法 蛋白溶解度(%)=0.3g样本的粗蛋白含量原样本的粗蛋白含量。 注：当比较不同豆粕样品时，它们的粒度应一致的，样品在0.2% KOH溶液中搅拌的时间也应一致。五、尿素酶活性（快速简单的估测方法）一、尿素苯酚磺法1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。2、设备 （1）稀硫酸（H2SO4)0.2N或更稀些，带滴管。 （2）尿素一苯酚磺试剂。 a 将1.2克苯酚磺溶解于30mL0.2N的NaOH中。 b 用蒸馏水将之稀释至约300mL。 c 加入10g尿素并溶解之。 d 用蒸馏水稀释

14、至2L。 e 加入7mL 1.0N的H2SO4或70mL 0.1N的H2SO4。 f 用蒸馏水稀释至最后体积3L。 g 溶液应具明亮的琥珀色。3、测定步骤 （1）在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。若溶液已转变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。 （2）量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于陪替氏（petri）培养皿中。 （3）在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。若仍有干豆饼斑点，则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。 （4）放置5分钟后观察： a.没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。 b.有少量红点：少

15、量尿素酶活性，豆饼可用。 c.豆饼表面约有25为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。 d.豆饼表面约有50为红点覆盖：有尿素酶活性。 e.豆饼表面的75100为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。 二、酚红法1、适用范围：适用于大豆制品,但不能作为仲裁法2、原理：酚红指示剂在pH6.4-8.2时由黄变红,大豆制品中所含的尿素酶,在室温可将尿素水解产生氨.释放的氨可使酚红指示剂变红,根据变红时间的长短来判断尿酶活性的大小.3、仪器和试剂(1)粉碎装置 (2)天平 感量0.01g (3)试管 (4)尿素 (5)0.1酚红乙醇溶液4、测定步骤:将试样研细,称取0.02g,转入试

16、管中,加入0.02g结晶尿素及2滴酚红指示剂,加20mL至30mL蒸馏水,摇动10s.观察溶液颜色,记下呈红色的时间。5、尿素酶活性的测定结果表示1min内呈粉红色为:活性很强；1-5min 活内呈粉红色为:活性强5-15min内呈粉红色为:有点活性；15-30min内呈粉红色为:没有活性注: 通常10min以上不显粉红或红色的大豆制品,其尿素酶活性认为合格。六、挥发性盐基氮(半 微 量 定 氮 法 )1、原理 挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸滴定计算含量。2、试剂 2.1

17、氧化镁混悬液（ 10g/L ）：称取 1.0g 氧化镁，加 100mL 水，振摇成混悬液。 2.2 硼酸吸收液（ 20g/L ）。 2.3 盐酸 c(HCl)=0.01mol/L 或硫酸 c(1/2H2 SO4 )=0.01mol/L 的标准滴定溶液。 2.4 甲基红乙醇指示剂（ 2g/L ）。2.5 次甲基蓝指示剂（ 1g/L ）。 3、仪器 3.1 半微量定氮器 3.2 微量滴定管：最小分度 0.01mL 。 4、分析步骤 样品处理：精确取 10g 试样（粉碎好的样品）于 200mL 磨口三角瓶中，加 100.0mL(V总) 蒸馏水于振荡器上振荡 30 分钟， 4000 转离心。 蒸馏滴定

18、：将盛有 2 0.0 mL 吸收液及 5-6 滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取 10.0mL （ V 分取 ）上述样品上清液于蒸馏器反应室内，加 10 mL 氧化镁混悬液（ 10g/L ），迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏 5min 即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（ 0.01mol/L ）或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。 5、计算式及结果表述： 挥发性盐基氮（ W ）以每 100g 样品含氮毫克数表示。W 样品中挥发性盐基氮的含量， mg/100g; V1 测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积， mL; V

19、2 试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积 ,mL; C 盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度， mol/L; 14 与 1.00mL 标准标准滴定溶液 c(HCl)=1.000mol/L 或硫酸标准滴定溶液 c(1/2H2SO4 )=1.000mol/L 相当的氮的质量， mg；m 样品质量， g 。 结果的表述：报告算术平均值的三位有效数。 6、允许差 相对误差 10% 。七、枸溶磷含量的测定1、原理：用中性柠檬酸铵溶液溶解和提取试样中的磷酸根，按42磷含量测定方法测定磷，当磷含量大于13%时被认为该样品是磷酸氢钙。2、试剂: 柠檬酸 无水乙醇 氨水中性柠檬酸铵溶液: 溶解74g柠檬酸于300mL水中

20、，加69 mL氨水，在酸度计上用氨水调节pH值为70，用比重计测其相对密度为109(20)。将溶液贮存于密闭的瓶中备用(如长期使用，用前校正其酸度)。3、仪器: 酸度计：分度值为02pH，配有玻璃电极和饱和甘汞电极，比重计。4、步骤:称取1g试样(精确至0.0002g)，置于250mL容量瓶中，加入100mL中性柠檬酸铵溶液，将容量瓶置于(65±1)的水浴中保温1 h，时常打开瓶塞，每隔15 min摇动一次，每次摇动约30 s，取出容量瓶，冷却至室温，加水至刻度，摇匀。干过滤，弃去初始的30mL滤液，用移液管移取20mL试验溶液A和空白溶液分别置于250mL烧杯中，加入10 mL硝酸

21、溶液，加水至总体积约100mL，加热煮沸5min后，加入50mL喹钼柠酮溶液，盖上表面皿，保温30s(在加入试剂和加热过程中，不得使用明火，不得搅拌，以免凝结成块)冷却。在冷却过程中搅拌34次，用预先在(180±5)下烘干至恒重的玻璃砂坩埚抽滤。先将上层清液过滤，用倾泻法洗涤沉淀6次，每次用水约30 mL，最后将沉淀移人玻璃砂坩埚中过滤，再用水洗涤沉淀3次，将玻璃砂坩埚连同沉淀置于电烘箱中从温度稳定时计时，在(180±5)下干燥45 min，取出稍冷后，置于干燥器中冷却至室温，称量。5、计算:C(P)= (m1-m2)×0.01400/(m×20/250

22、)×100 = 17.5(m1-m2)/m式中：m1试验溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；      m2空白溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；      m试样的质量，g；      001400磷钼酸喹啉换算成磷的系数。注意事项: 测得磷含量应大于13%,平行测定结果的绝对差值不大于0.1%。八、水溶液磷含量的测定1、原理: 试样用水溶解后，测定水溶液中的磷含量。2、试剂和材料：同测磷3、步骤: 称取0.5g试样（精确至0.0002

23、g），置于60mm的研钵中，用少量的水研磨助溶，每次约用25mL水，连续研磨4次，水溶液全部移入250mL容量中瓶中，振荡30min，用水稀释到刻度 ，摇匀。干过滤，弃去初始30mL滤液。用移液管移取20mL试验溶液置于300mL 烧杯中，加入10 mL硝酸溶液，加水至总体积约100mL，加热煮沸5min后，加入50mL喹钼柠酮溶液，盖上表面皿，保温30s(在加入试剂和加热过程中，不得使用明火，不得搅拌，以免凝结成块)冷却。在冷却过程中搅拌34次，用预先在(180±5)下烘干至恒重的玻璃砂坩埚抽滤。先将上层清液过滤，用倾泻法洗涤沉淀6次，每次用水约30 mL，最后将沉淀移人玻璃砂坩埚

24、中过滤，再用水洗涤沉淀3次，将玻璃砂坩埚连同沉淀置于电烘箱中从温度稳定时计时，在(180±5)下干燥45 min，取出稍冷后，置于干燥器中冷却至室温，称量.4、计算:C(P)= (m1-m2)×0.01400/(m×20/250)×100 = 17.5(m1-m2)/m式中：m1试验溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；      m2空白溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量，g；      m试样的质量，g；     

25、; 0.01400磷钼酸喹啉换算成磷的系数。九、油脂中过氧化值的测定1 原理油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。2 要求指标名称指标mmol/Kg过氧化值 10.003、过氧化值的测定3.1 试剂和溶液3.1.1饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10mL水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中；3.1.2 三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40mL三氯甲烷，加60mL冰乙酸，混匀； 3.1.3 0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液； 3.1.4 1%淀粉试剂：将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状，倒入50mL沸水中调匀，煮沸，临时用现配；3.2 测

26、定方法称取2-3g样品（称准至0.0002g）于碘量瓶中，加30mL三氯甲烷冰乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1mL饱和碘化钾溶液，紧密,塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加100mL水，摇匀，立即以淀粉试液为指示剂，用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。同时做空白试验。3.3 结果计算过氧化值按下式计算：·(0)m×10001100010001000011100077710000100001000 式中：C硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L；V试样消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积，mL；V0空白消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积，

27、mL；m 样品质量，g。十、皂化价的测定皂化价（皂化值）系指中和1g油脂中所含全部游离脂肪酸和结合脂肪酸（甘油脂）所需氢氧化钾的毫克数。1、原理油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。反应式如下：RCOOH + KOH RCOOK + H2OC3H5(COOR)3 + 3KOH 3RCOOK + C3H5(OH)3KOH（过剩的）+HCl KCl + H2O2、测定方法2.1 试剂和溶液2.1.1 0.5mol/L的盐酸标准溶液；2.1.2 1%酚酞指示剂；2.1.3 无水乙醚；2.1.4 0.5mol/L氢氧化钾乙醇

28、溶液：称取化学纯氢氧化钾30g，溶于95%乙醇中使成1L，摇匀，静置24h，倾出上层清液，贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。2.2 操作步骤称取5g样品（称准至0.0002g），用索氏提取法提取出粗脂肪，蒸干乙醚溶剂，准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，在水浴上加热回流30min，不时摇动。取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。同时做空白试验。2.3 结果计算皂化价按下式计算：56.1×·(0)m式中：C0.5mol/L的盐酸标准溶液的浓度，mol/L；V试样耗用盐酸标准溶液之体积，mL；V0空白试验消耗盐酸标准溶

29、液之总体积，mL；m试样之质量，g；56.11mol/L盐酸标准液1ml相当于氢氧化钾的克数；一般植物油的皂化价如下：棉子油189198，花生油188195，大豆油190195，菜子油170180，芝麻油188195，葵子油188194，茶子油188196。皂化率的计算：×100皂化率=脂肪皂化价-酸值理论皂化值理论皂化值鱼油酸值一般为： 0.7mgKOH/g 理论皂化值一般为：200-210mgKOH/g豆油酸值一般为： 0.7mgKOH/g 理论皂化值一般为：190-195 mgKOH/g花生油酸值一般为：3.5mgKOH/g 理论皂化值一般为：188195mgKOH/g十一、油

30、脂酸价的测定油脂酸价又称油脂酸值，是表示油脂中游离脂肪酸含量,检验结果以中和1克油脂中的游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数表示（毫克KOH克油）1、原理：用中性乙醚-乙醇混合溶液溶解油脂及其脂肪酸，再用碱标准溶液滴定。2、试剂准备（1） 中性乙醚-乙醇混合溶液：乙醚（2份）与乙醇（1份）2：1混合，临用前以酚酞为指示剂，用0.1N氢氧化钠标准溶液滴定至中性。（2） 0.1N的氢氧化钾标准溶液3、测定称量2-5g混合均匀的样品于锥形瓶中加入中性乙醚-乙醇混合液50mL再加2滴酚酞指示剂用0.1N氢氧化钾滴定至中性（淡粉红色）。4、数据处理氢氧化钾溶液浓度C×消耗氢氧化钾体积V×5

31、6.1酸价=-试样的质量M56.1氢氧化钾的摩尔质量十二、玉米脂肪酸值测定方法A.1 范围本方法规定了玉米中脂肪酸值的测定原理、试剂、仪器和设备、分析步骤、结果计算和结果表述等。本方法适用于一般玉米的储存品质。A.2 原理在室温下用无水乙醇提取玉米中的脂肪酸，用标准氢氧化钾溶液滴定，计算脂肪酸值。A.3 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。A.3.1 无水乙醇。A.3.2 酚酞-乙醇溶液（10g/L）：1.0g酚酞溶于100mL95（VV）乙醇。A.3.3 不含二氧化碳的蒸馏水：将蒸馏水烧沸，加盖冷却。A.3.4 c（KOH）=0.01mol/L氢氧化钾-95乙醇标准滴定溶液A.3.4.1 c

32、（KOH）=0.5mol/L氢氧化钾标准储备液的配制称取28g氢氧化钾，置于聚乙烯容器中，先加入少量无CO2的蒸馏水（约20mL）溶解，再将其稀释至1000mL，密闭放置24h。吸取上层清液至另一聚乙烯塑料瓶中。A.3.4.2 c（KOH）=0.5mol/L氢氧化钾标准储备液的标定称取在105烘2h并在干燥器中冷却后的邻苯二甲酸氢钾2.04g，精确到0.0001g，溶于50mL不含CO2蒸馏水中，滴加酚酞-乙醇指示剂(A 3.2)35滴，用配制的氢氧化钾标准储备液滴定至微红色，以30s不褪色为终点，记下所耗氢氧化钾标准储备液mL数（V1），同时做空白试验（不加邻苯二甲酸氢钾，同上操作），记下所

33、耗氢氧化钾标准储备液mL数（V0），按式（1）计算氢氧化钾标准储备液浓度。c（KOH）=(1)式(1)中：c（KOH）氢氧化钾标准储备液浓度，mol/L；1000换算系数；称取邻苯二甲酸氢钾的质量，g ；V1滴定所耗氢氧化钾标准储备液体积，mL ；V0空白试验所耗氢氧化钾标准储备液体积，mL ；204.22邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量g/mol 。注：氢氧化钾标准储备溶液按要求定时复标。A.3.4.3 c（KOH）=0.01mol/L氢氧化钾-95乙醇标准滴定溶液准确移取20.0mL已经标定好的0.5mol/L氢氧化钾标准储备液，用95（V/V）乙醇稀释定容至1000mL，盛放于聚乙烯塑料瓶中。临

34、用前稀释。注：稀释用乙醇应事先调整为中性。A.4 仪器与设备A.4.1 具塞磨口锥形瓶：250mL。A.4.2 移液管：50.0mL、25.0 mL。A.4.3 微量滴定管：5mL，最小刻度为0.02mL；10mL，最小刻度为0.05mL。A.4.4 天平：感量为0.01g以上。A.4.5 振荡器：往返式，振荡频率为100次/min。A.4.6 粉碎机：锤式旋风磨，具有风门可调和自清理功能，以避免样品残留和出样管堵塞。在粉碎样品时，磨膛不能发热。A.4.7 电动粉筛：按GB/T 5507要求。A.4.8 玻璃短颈漏斗。A.4.9 中速定性滤纸。A.4.10 锥形瓶：150mL。A.5 分析步骤

35、A.5.1 试样制备取混合均匀样品约80100g，用锤式旋风磨粉碎，要求粉碎细度能一次性达95%以上过CQ16(相当于40目)筛，粉碎样品充分混合后（筛上、筛下的全部筛分范围样品）装入磨口瓶中备用。注1:按GB/T 5507检验样品粉碎细度，使用其它类型粉碎机可以达到细度要求，粉碎样品也只能选用锤式旋风磨。一次粉碎达不到细度要求的，该锤式旋风磨不能使用。注2:粉碎样品时，应按照设备说明书要求，合理调节风门大小，并控制进样量，防止和减少出料管留存样品，为避免出料管堵塞，减少磨膛发热，引起样品中脂肪酸值的变化，每粉碎10个样品应将出料管拆下清理。注3:制备好的样品应尽快完成测定，如需较长时间存放，

36、应存放在冰箱中，全部过程不得超过24h。A.5.2 试样处理称取制备试样约10g，精确到0.01g，于250mL具塞磨口锥形瓶中，并用移液管准确加入50.0mL无水乙醇(A3.1)，置往返式振荡器上振摇30min，振荡频率为100次/min。静置12min，在玻璃漏斗中放入折叠式的滤纸过滤，并加盖滤纸。弃去最初几滴滤液，收集滤液25mL以上。A.5.3 测定精确移取25.0mL滤液于150mL锥形瓶中，加50mL不含CO2的蒸馏水，滴加34滴酚酞-乙醇指示剂后，用0.01mol/L的氢氧化钾-95乙醇标准滴定溶液(A3.4.3)滴定至呈微红色，30s不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾-95乙醇溶液

37、体积（V1）。注:样品提取后一定要及时滴定；滴定应在散射日光或日光型日光灯下对着光源方向进行；提取液颜色较深，滴定终点不易判定时，可用一已加入去CO2蒸馏水后尚未滴定的提取液作参照，当被滴定液颜色与参照相比有色差时，即可视为已到滴定终点。若上述参照比色法，仍无法准确判定滴定终点时，可在滤纸锥头放入0.5g粉末活性炭,褪色后滴定。A.5.4 空白试验取25.0mL无水乙醇于150mL锥形瓶中，加50mL不含CO2的蒸馏水，滴加34滴酚酞-乙醇指示剂，用0.01mol/L的氢氧化钾-95乙醇溶液滴定至呈微红色，30s不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾-95乙醇溶液体积（V0）。注:提取、滴定过程的环境

38、温度应控制在1525。A.6 结果的计算和表述A.6.1 脂肪酸值以中和100g干物质试样中游离脂肪酸所需氢氧化钾毫克数表示。按式（2）计算：脂肪酸值（KOHmg/100g干基） （2）式（2）中：V1滴定试样所耗氢氧化钾-95乙醇溶液体积，mL ；V0滴定空白所耗氢氧化钾-95乙醇溶液体积，mL；C氢氧化钾-95乙醇溶液的准确浓度，mol/L；50提取试样用无水乙醇的体积，mL；25用于滴定的滤液的体积，mL； 100 换算为100g（干）试样的质量，g；试样的质量，g；试样水分百分数，即每100g试样中含水分的质量，g。注 : 用测定脂肪酸值的同一粉碎样品，按GB/T 5497中105恒重

39、法测定样品水分含量，计算脂肪酸值干基结果。此水分含量结果不得作为样品水分含量结果报告。A.6.2 结果表示每份试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果保留小数点后一位数。A.7 重复性同一分析者对同一试样同时进行两次测定，结果差值不超过2mgKOH/100g。十三、油脂碘价的测定1、原理将试样溶于惰性有机溶剂中，加入过量的氯化碘的冰醋酸溶液（韦氏碘液）与油脂中的不饱和脂肪酸起加成反应，生成饱和的卤素衍生物，再加过量的碘化钾与剩余的氯化钾（碘）作用生成游离碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定游离出来的碘，同时做空白试验，根据空白与试样消耗硫代硫酸钠标准溶液之差，可计算加成碘的数量。

40、2、测定根据试样碘值的大小，按下表称取试样（m，准确至0.0002g）,注入250mL碘量瓶中,加20mL四氯化碳或三氯甲烷,充分振荡使试样溶解,然后由滴定管精确放入25mL韦氏液(加入速度不可太快,应掌握在2分钟左右)立即盖紧瓶赛(塞口和瓶口先用少量15%KI溶液润湿,以防碘挥发)摇匀后在20±5条件下于暗处静置30分钟（碘价在130以上的静置60分钟），使加成反应完全，到时立即加入15%碘化钾溶液20mL和水100mL，不断振摇下用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定至溶液由棕红色变成淡黄色时,加入1毫升淀粉指示剂(5%),继续滴定至蓝色消失为止.同时作空白试验。碘价数值与试样用量表碘价试

41、样用量范围(g)碘价试样用量范围(g)200.84611.58651000.25330.3173400.63460.79351200.21150.2644600.42310.52881400.18130.2666800.31730.39661600.15870.19833、计算 （V2V1）*N*0.1269碘价=- *100 M式中:V1-滴定试样消耗的硫代硫酸钠的量,mL;V2-滴定空白消耗的硫代硫酸钠的量,mL;N硫代硫酸钠溶液的当量浓度,mol/L;M试样重量,克;0.1269-每毫克当量浓度硫代硫酸钠相当于碘的克数.4、允许偏差每个试样做两个平等试验,碘价在100以上不超过1,碘价在

42、100以下,不超过0.6，取平均数。5、韦氏液的配制方法1：称取13克纯碘于500mL烧杯中加200mL冰醋酸,在水浴上微热使其溶解,冷却后移入1000mL容量瓶中,以冰醋酸稀释至刻度,从容量瓶中取150mL作调节韦氏液用,(其余碘液按图装置通入经过洗涤和干燥的氯气,使之与碘作用,生成氯化碘,反应如下:盐酸与高锰酸钾反应生成氯气,经过水洗涤除去水溶性杂质,经浓硫酸洗后可脱水净化.氯气与碘反应生成氯化碘.将氯气通入碘冰乙酸溶液中,使碘冰乙酸溶液由浓褐色变为透明的橙红色(突变)为止.);方法2：分别称取三氯化碘7.9克和纯碘8.7克分别溶于冰乙酸中,和并两溶液转入容量瓶中，再用冰乙酸稀释至1000

43、mL，贮棕色瓶中备用。 6.0.1N硫代硫酸钠的配制(见化验手册第86页)另附:测动物油、大豆磷脂、其称量范围是在，碘价是80其试样用量范围在0.31730.3966.各油脂的碘价油脂碘价鱼油160豆油120猪油7080(90)棕榈油20菜油100110大豆磷脂80碘价是测油脂中不饱和键的程度，主要用于油脂掺假的检测，例将豆油掺入鱼油中；因猪大油根据原材料猪的品种和饲养方式不同其碘价的差异幅度较大，低的碘价在30，高的达7080间，一般情况下参考碘价在7080间；相对来说意义不是太大。针对猪大油的质量评定要结合以下几个方面综合评定：1 感观，无臭味及煤油等其它动特油以外的味道2 酸价如规定在1

44、0个内，则其相对应的过氧化值应在0.1内.3 动物油重要的是掺假的检测6、油脂碘价测定的注意事项（1）须在无水的条件下操作，试验用的仪器、碘量瓶、吸管必须是干燥无水的，不可带有水珠，否则影响结果较大。（2）每次的空白试验要与前一次的比较，空白试验的耗用的硫代硫酸钠要与则配好时韦氏液的空白作比较。因韦氏液配制后随时间的延长会不断发生变化。十四、真蛋白的测定 方法一：盐析法1、试剂：I. 硫酸铜溶液：10%，称取50.00g硫酸铜加水溶解，并稀释到500mL。II. 氢氧化钠溶液：2.5%，称取12.50g氢氧化钠，加水溶解，并稀释到500mL。III. 盐酸标准溶液：0.05mol/L。2、测定

45、粗确称取1g左右样品置于250mL烧杯中，加50mL蒸馏水于250mL烧杯中，于电炉上加热煮沸，加入20mL10%硫酸铜溶液，再在搅拌下缓缓加入20mL2.5%氢氧化钠溶液，摇匀，从电炉上取下，室温下放置2h或静置过液。沉淀物用中速定性滤纸倾泻法过滤。并用少量70以上热水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至滤液无硫酸根离子（用5%BaCl2溶液检验无沉淀），连沉淀物一起放入80烘箱中烘到略潮，放入凯氏定氮烧瓶中，消化，测定其中的蛋白质含量，同时进行空白测定。另取样品0.5g样品进行粗蛋白质的测定。方法二：测非蛋白氮（NP）法1、NP的测定称取15g左右样品，准确加入100mL5%三氯乙酸溶液，浸泡震荡2

46、h，静置过滤，精确量取10-20mL滤液定氮，同时做空白实验。2、NP计算同粗蛋白质的计算真蛋白质（TP）的计算：TP%=CP%-NP%真蛋白质的比率应=TP%/CP%*100%=（CP%-NP%）/CP%*100%一般进口鱼粉真蛋白质的比率应大于或等于80%，国产鱼粉真蛋白质的比率应大于十五、糊化度的测定1、原理-淀粉酶在适当的PH值和温度下，能在一定的时间内，将糊化淀粉转为还原糖及-糊精，转化的糖量与淀粉的糊化程度成正比。用铁氰化钾法测其还原糖量，即可计算出淀粉的糊化度。2、试剂（1）10（体积分数）磷酸盐缓冲液（PH值为6.8）A、甲液：溶解71.64g磷酸二氢钠于水中，并稀释至1L。B

47、、乙液：溶解31.21g磷酸氢二钠于水中，并稀释至1L。取甲液49mL与乙液51mL合并为100mL,再加入900mL即为10（体积分数）磷酸盐缓冲液。（2）60g/L-淀粉酶溶液：溶解6.0g-淀粉酶(PH值为6.8及40时，活力大于8万单位，细度为80以上通过60目)于100mL10磷酸盐缓冲液中成乳浊液（-淀粉酶储于冰箱内，用时现配）。（3）0.1mol/L碱性铁氰化钾溶液：溶解32.9g铁氰化钾和44.0g无水碳酸钠于水中并稀释到1L，储于棕色瓶内。（4）乙酸盐溶液：溶解70.0g氯化钾和40.0g硫酸锌于水中，加热溶解，冷却至室温，再缓缓加入冰乙酸并稀释到1L。（5）0.1mol/L

48、硫代硫酸钠溶液：称取26g硫代硫酸钠（Na2S2O3-5H2O）或16g无水硫代硫酸钠，溶于1L水中，缓缓煮沸10 min。冷却。放置两周后过滤备用。标定：精确称取约0.15g在120干燥至恒温的基准物质重铬酸钾，称准至0.0001g，置于500mL碘量瓶中，溶于50mL水。加入2g碘化钾，轻摇使之溶解。再加入20mL20硫酸，密塞，摇匀，放置暗处10min后，用150mL水稀释。用硫代硫酸钠标准溶液滴至溶液呈浅黄色近终点时，再加入3mL0.5淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失而显亮绿色。反应液及稀释水的温度不应高于20。同时做试剂空白试验。 m 硫代硫酸钠标准溶液浓度(mol/L)= (V1-V

49、2)×0.04903式中 m重铬酸钾的质量，g; V1-硫代硫酸钠标准溶液用量，mL; V2-试剂空白试验中硫代硫酸钠标准溶液用量,mL; 0.04903-与1.00mL1.00mL硫代硫酸钠标准溶液相当的重铬酸钾的质量，g。（6）10（体积分数）硫酸溶液。（7）120g/L钨酸钠溶液。（8）100g/L碘化钾溶液：溶解10.0g碘化钾于100mL水中，加入几滴饱和氢氧化钾溶液（防氧化）。（9）1淀粉指示剂。3、仪器（1）多孔恒温水浴锅。（2）天平等。4、操作步骤（1）试样的制备：取要检测的颗粒饲料样品50g左右，在实验室样品磨中粉碎，其细度通过40目编制筛，混匀，放于密闭容器内，贴

50、上标签作为试样，样品应低温（410）保存。（2）分别称取试样1.0000±0.0003g（淀粉含量不大于0.5g）两份，置于两支150mL三角瓶中，标上A、B。另取1支150mL三角瓶，不加试样，做空白，并标上C。在这三只三角瓶中各取50mL量筒加入40mL磷酸盐缓冲液。（3）将A置于沸水浴中煮沸30min，使样品全部糊化，取出快速冷却至60以下。（4）将A、B、C置于（40±1）恒温水浴锅中预热3min后，各用5mL移液管加入5mL-淀粉酶溶液，40保温1h(每隔15min轻轻摇匀1次)。（5）1h后，将3支三角瓶取出，用移液管分别加入2mL10硫酸溶液摇匀，再加入2mL

51、钨酸钠溶液摇匀，并将它们全部转移到3支100mL容量瓶中（用水洗三角瓶3刺以上，洗液也转移到相应的容量瓶内）。最后用水定容至100mL，贴上标签，摇匀。静置2min后，用中速定性滤纸过滤，留滤液作为下面测定试样（从碘量瓶内液体开始沸腾计时）。（6）用5mL移液管分别吸取上述滤液5mL，放入洁净的150mL三角瓶内，再用15mL移液管加入15mL碱性铁氰化钾溶液（还原糖氧化），摇匀后置于沸水中，准确加热20min后取出，用冷水快速冷却至室温，用25mL移液管缓慢加入25mL乙酸盐溶液（为中和碱性铁氰化钾中的碱，为滴定准备一个弱酸环境），并摇匀。（7）用5mL移液管加入5mL碘化钾溶液，摇匀，立即

52、用硫代硫酸钠溶液滴定，当溶液颜色变成淡黄色时，加入几滴1淀粉指示剂，继续滴定到蓝色消失，各三角瓶分别逐一滴定，并记下相应的滴定量。5、计算 V0-V2试样糊化度（） V0-V1式中：V0空白液滴定量，mL； V1完全糊化样品溶液滴定量，mL； V2样品溶液滴定量，mL。每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，双试验的相对误差：糊化度在50以下时，不超过10；糊化度在50以上时，不超过5。6、注意事项（1）-淀粉酶在储存期间会有不同程度的失活，一般每储存3个月测1次酶活力。为了保证样品酶解完全，以酶活力8万单位，酶用量300mg为准，如酶的活力降低，酶用量则按比例加大。（2）在测定时，指示剂不要过早地加入，否则会影响测定结果，同一样品滴定时，应在变成一样的淡黄色时加入淀粉指示剂。 十六、配合饲料混合均匀度的测定1、方法原理本方法