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文档简介

1、最新资料推荐体内药物分析实验1. HPLC法测定大鼠血浆中的山奈酚1.1目的要求1.掌握血浆样品的前处理方法。2. 熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。3. 熟悉大鼠眼眶采血技术； 熟悉方法学研究中其他评价内容。1.2主要实验材料与仪器 山奈酚(Kaempferol)及其对照品，黄芩素(baicalein )，抗坏血酸， 肝素，-葡萄糖醛酸苷酶(-glucuronidase )和硫酸酯酶 (sulfatase )，分析纯甲醇， 冰醋 酸、无水乙醚， 色谱纯乙腈； 高效液相色谱仪， 氮吹装置， 恒 温水浴，漩涡混合器，13000r/mi n台式离心机， 不同规格移液枪(5, 20, 50,

2、 100, 200, 1000L) 和容量瓶(10，25mL), 510mL具塞离心管若干； 雄性SD大鼠(180220g)。1.3实验原理山奈酚吸收进入体内后，多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得，故米用加入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品，使代谢物水解后测定苷元山奈酚的浓度。实验以黄芩素为内标，HPLC法测定血浆中山奈酚浓度，对建立的方法进行方法学评价。1.4实验方法1.色谱条件：C18 柱(250mm4.6m,5m),配保护柱，柱温 40C；乙腈-0.5% 冰醋酸（35:65 ）为流动相，流速1mL/min ;检测波长370nm;进

3、样量20L。2. 溶液配制：取山奈酚对照品约2.5mg，精密称定， 置25mL量瓶中，用 甲醇溶解并定容。精密吸取适量， 分别用甲醇稀释成0.3、0.6、3、6、9、20 和30g/mL的标准系列溶液， 置4C冰箱保存。另取黄芩素适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释至0.1mg/mL的溶液，精密吸取1.5mL置10mL量瓶中，用甲醇定容， 得内标溶液， 置4 C冰箱保存。3. 血浆样品处理：取大鼠血浆样品120L ,加入甲醇20L、1%冰醋酸（含2mg/mL 抗坏血酸）32L、-葡萄糖醛酸苷酶（20U/mL）和硫酸酯酶（6U/mL） 的混合水溶液50L , 37C水浴温育30min后，加入内标溶液50L , 然后加无水乙醚2mL,漩涡混合5min ,于12019r/min离心5min ; 取上清液在氮气流下挥干，残留物用100L甲醇复溶，12019r/min离心5min ,取上清液进样分析。4. 专属性考察：取空白血浆、添加山奈酚与内标的空白血浆、血浆样品，按血浆样处理项下方法处理，照色谱条件项下方法进样测定。比较所得色谱图， 考察血浆内源性物质是否干扰测定，药物及内标是否达到基线分离。最新资料推荐若有必要， 适当调整色谱条件，已达到专属性要求。5. 标准曲线制备：精密吸取120L大鼠空白血浆9份，分别加入20L不同浓度的标准系列溶液，制得0.0 （空

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