原癌基PIM3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治

1、 复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心 复旦大学上海医学院肿瘤学系复旦大学上海医学院肿瘤学系 李李 影奕影奕 1. pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制激酶在胰腺癌发生中的作用机制2. 以以pim-3为靶向治疗分子的新型有效的为靶向治疗分子的新型有效的 抗肿瘤药物的开发抗肿瘤药物的开发1. pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制激酶在胰腺癌发生中的作用机制p34p34p34p37p40kinase domainpim-1pim-2pim-3deneen b. et al. mol cell biol 2003;23:3897mikkers h. et al. mo

2、l cell biol 2004;24:6104pim-3 与恶性转化相关与恶性转化相关pimpim基因敲出的小鼠生基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代命力旺盛且可繁殖后代 pim-3pim-3是原癌基因。是原癌基因。pim-3 is a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity.fujii c et al. int j cancer. 2005 mar 20;114(2):209-18. pim-3 pim-3激酶是否与肝脏以外的其它脏器肿瘤发生有关？激酶是否与肝脏以外的其它脏器肿瘤发生有关？ 我们聚焦在同是内胚层来源的器官，胰

3、腺。我们聚焦在同是内胚层来源的器官，胰腺。normal tissuecancer tissuespci55pci35-pim-3actin3643kdawcl pim-3shrna non scramble pim-3pci55scramble shrnapim-3 shrnadna contentno shrnasubg1annexin vpim-3 shrnascramble shrnapim-3 shrnascramble shrnano-shrnascramble shrnapim3 shrna 0 1 2 3 4 5 8 7 6 5 4 3 2 1 0cell viability r

4、atiotime after passage (days)* *pim-1, pim-2pim-3?badser136 survival factorpi3kaktbad14-3-3survivalser112pim-1 and pim-2 can inactiavte pro-apoptotic molecule, bad, by phosphorylating its serine residuesapoptosisbadbcl-xl+bcl-xlpim-3badpim-3/badpci5520m20mma a-pim3helaa a-bada a-iggip: pci35 pci55 p

5、ci552526kdabadiggblot: anti-pim3blot: anti-bad5036pim-3iggimmunoprecipitation with anti-pim-3 western blotting with anti-bad washing with stripping bufferwestern blotting with anti-pim-3 pim-3pbad112pim-3/pbad112pci35 pci5520m20mmactinbadpbad112pbad136pbad155 pim-32626262643kda36shrna non scramble p

6、im-3pci55小结（小结（1）2. 以以pim-3为靶向治疗分子的新型有效为靶向治疗分子的新型有效的抗肿瘤药物开发的抗肿瘤药物开发 胰腺癌是我国十大恶性肿瘤之一胰腺癌是我国十大恶性肿瘤之一 早期诊断困难早期诊断困难 晚期患者手术治疗晚期患者手术治疗5年生存率低于年生存率低于5%，发病率等于死亡率，发病率等于死亡率 传统的化学治疗存在抗肿瘤能力低，杀伤指数过小，副作用大等缺点传统的化学治疗存在抗肿瘤能力低，杀伤指数过小，副作用大等缺点 分子靶向治疗具有特异性强，效果显著，正常组织损伤小等优点分子靶向治疗具有特异性强，效果显著，正常组织损伤小等优点 现有的抑制增殖因子受体活性的分子靶向治疗缺乏

7、肿瘤治疗的特异性，而且容现有的抑制增殖因子受体活性的分子靶向治疗缺乏肿瘤治疗的特异性，而且容易产生耐药性易产生耐药性pim-3与与pim-1具有高度的同源性（具有高度的同源性（70%）和类似的生物功能）和类似的生物功能推测推测pim-3的立体空间结构的立体空间结构低分子化合物低分子化合物-pim-3激酶复合物立体空间结构激酶复合物立体空间结构从从drugbank和和pubchem数据库中筛选了数据库中筛选了23种类似低分子化合物种类似低分子化合物 选择并合成了对选择并合成了对pim-3有高亲和性的小分子化合物有高亲和性的小分子化合物-蔓生百部蔓生百部碱（碱（stemonamide）合成中间体）

8、合成中间体pim-3pim-1pim-2ic50 (m mmol/l)pim-3 pim-1 pim-2 akt-1 akt-2 t2t5t10akt1/278922000nd90562000nd33502000nd1934 2000 2000 200031.58 72.47345 462times after treatment with inhibitor (days)cell proliferation ratio cell line namet-2t-5l3.6pl6.626.1miapaca-2 5.922.9ic50 (m mmol/l)relative od450miapaca-

9、2-dmso t-2+12 h+48 h+24 hpbad112badbcl-xlcytochrome ccleaved-caspase-3l3.6plactinpbad136caspase-3cdc25apim-3pbad1555x105 l3.6plsubcutaneous injection3615dayssacrify: intraperitoneal injection15 16 17 18 1929 30 31 32 3322 23 24 25 26(days)t-2 (20mg/kg)* dmso (n=5) t2 (n=5) 20dmsot2051015alt (u/l)nsna (meq/l)144148152dmsot2156160ns02468dmsot2k(meq/l)10nsdmsot2cl (meq/l)0108112116120ns dmso t2 (n=5) (n=6)hematologicalparameters9.30.07 8.080.3349.883.06 46.721.9030.043.84 9.91.7084.21.90 81.171.1000 0.170.0700 0013.401.83 16.671.002.400.46 2.000.15rbcp