XpertMTBRIF系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性探讨

1、xpert mtbrif系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性探讨徐州市云龙区东甸子徐州传染病医院结核科江苏徐州221004【摘要】目的：探究xpert mtb/rif系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性。方法：收集100例疑似肺结核患者痰液标本，给予涂片抗酸杆菌检 查与结核杆菌培养，并采用xpert mtb/rif系统快速检测结核分枝杆菌及利福平 耐药性。结果：在100例疑似肺结核患者屮，40例培养与涂片显示阳性，占40%;9例涂片显示阴性但培养显示阳性，占9%; 6例培养与涂片显示阴性，且符合肺 结核诊断标准，占6%; 45例无结核病临床证据。经xpert mtb/rif检测，培养 阳性

2、者敏感度为94.2%，培养阳性、涂片阳性者敏感度为93.7%，培养阳性、涂 片阴性敏感度为93.1%，涂片阴性、符合临床标准敏感度为47.6%，非结核荞灵 敏度为99.3%。49例培养显示阳性标本屮，采用比例法测得4株利福平耐药菌， 耐药率为8.2%,在经xpert检测灵敏度为93.9%,特异度为98%。结论：xpert mtb/rif系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性，具有较高临床应用价值。【关键词】xpert mtb/rif系统；检测；结核分枝杆菌；利福平；耐药 性abstract objective： to explore the rapid detection of mycobac

3、terium tuberculosis with mtb/rif system and drug resistance of rifampicin. methods： 100 sputum specimens of patients with suspected tuberculosis were collected, acid-fastbacillus examination and mycobacterium tuberculosis cultivation were given，and themycobacterium tuberculosis and drug resistance o

4、f rifampicin were rapidly detected with mtb/rif system. results： in 100 patients with suspected pulmonary tuberculosis, 40 cases of cultivation and smear both showed positive，accounts for40%. 9 cases of smear showed negative but the cultivate showed positive，accountsfor 9%.6 cases of cultivation and

5、 smear showed negative，and conform to thetuberculosis diagnosis standard, accounts for 6%. 45 cases of patients had no tuberculosis clinical evidence. after the mtb/rif detection, the cultivate positive sensitivity was 94.2%, the cultivate and smear of positive sensitivity was 93.7%，the cultivate of

6、 positive and smear of negative sensitivity was 93.1%，smear of negative, accord with standard of clinical sensitivity was 47.6%，and the sensitivity of people without tuberculosis is 99.3%. among 49 cases of the cultivate of positive specimens, 4 strains of rifampicin resistant bacteria were measured

7、 using the ratio method，the resistant rate of 8.2%，and the detection sensitivity was 91.7%，the specificity was 99.4%. conclusion： it has high clinical value to rapidly detect the mycobacterium tuberculosis and drug resistance of rifampicin were with mtb/rif system.【keywords】 xpert mtb/rif system； de

8、tection； mycobacterium tuberculosis； rifampicin； drug resistance随着分子生物学不断发展，xpert mtb/rif试验作为新型分子检测技术 受到临床广泛关注，该检测技术灵敏度、特异性较高，操作简便，利于流行学调 查与临床应用1-3。本研究旨在探究xpert mtb/rif系统对结核分枝杆菌及利福 平耐药性诊断的临床价值。现报告如下：1资料与方法1.1 一般资料选择2014年6月-2015年11月于我院接受治疗100例疑似肺结核患者， 均在2月内未接受抗结核药物治疗，ii传统实验室检査显示细菌学阳性。1.2试剂与仪器抗酸染色用试剂、

9、罗氏固体培养试剂、比例法药敏用试剂、xpert mtb/rif 检测仪与配套试剂盒。1.3方法1.3.1留取痰液标本患者晨起漱口用用力咳出深处痰液或手机支气管吸出物，共3份，分别进行培养、xpert mtb/rif检测、涂片检查。经培养或涂片显示阳性的标本，次 日再收集标本行xpert mtb/rif重复检测，若xpert mtb/rif显示阳性，培养或涂 片显示阴性，则需次日收集标本行培养或涂片重复确认。1.3.2检测方法涂片结果是根据在特定视野中发现抗酸杆菌个数进行判定:（-）即在300 个视野中未发现；18条即在300个视野中发现18条；（+ ）即在100个视野中 发现39条；（+）即在

10、10个视野中发现19条；（+）每个视野中平均可发现 10条。结核分子杆菌培养与比例法药敏试验均按相关结核诊断实验室检验规程 进行。xpert检测：将该痰液与消化液按2: 1比例混合，处于温室内保存15 min, 痰液全部溶解后，取2 ml痰液于反应试剂盒中，再采用cene xpert仪器监测。1.4结果分析根据培养与涂片结果分为：培养与涂片显示阳性；涂片显示阴性, 培养显示阳性；培养与涂片显示阴性，ii符合肺结核诊断标准；涂片与培养 均为阴性，不符合肺结核诊断标准。2结果2.1 320例疑似肺结核患者诊断结果在100例疑似肺结核患者中，40例培养与涂片显示阳性，约占40%; 9 例涂片显示阴性

11、但培养显示阳性，约占9%; 6例培养与涂片显示阴性，且符合 肺结核诊断标准，约占6%; 45例无结核病临床证据。2.2 xpert mtb/rif检测结果分析经xpertmtb/rif检测，培养阳性者敏感度为93.9%,培养阳性、涂片 阳性者敏感度为90%，培养阳性、涂片阴性敏感度为88.9%，涂片阴性、符合临 床标准敏感度为16.7%,非结核者灵敏度为97.8%。2.3利福平耐药检测结果49例培养显示阳性标本中，采用比例法测得4株利福平耐药菌，耐药 率为8.2%,其中在经xpert检出3株耐药株，灵敏度为93.9%。在比例法敏感菌 中，1例经xpert检测为耐药，特异度为98%。3讨论当今，

12、我国肺结核患病率、死亡率均处于世界较高水平，再由于化学药 物不合理应用、hiv感染流行，使得耐药结核病、耐多药结核病不断增多，严重 影响了对结核病的控制。因此结核分枝杆菌检测及利福平耐药性探究具奋重要临床价值4-6。结核杆菌培养、鉴定要求时间较长，且标本需含奋活菌。现药物敏感试 验需超过4周吋间，未能及吋发现、及吋治疗结核感染者，进而导致结核病死亡 率上升，继发性耐药增强。结核分支杆菌培养及普通pcr技术要求较为严格，操 作复杂，限制了在普通实验室中使用。xpert系统是将巢式pcr与实吋荧光pcr 相结合的技术，靴基因选利福平耐药相关rpob基因，按ropb耐药决定区81bp 中序列设计5对

13、探针，标记不同荧光基因。在5个探针对应位置mtb野生株扩 增出s型曲线，突变株则不能扩增出相应曲线，这样在2小吋内即可同吋检测 mtb与rif耐药7-8】。大部分rif耐药菌株对异烟肼耐药，因此一定程度上rif 可作为耐药结核病的检测指标9-10。本研宄结果显示，在100例疑似肺结核患者中，40例培养与涂片显示 阳性，占40%; 9例涂片显示阴性但培养显示阳性，占9%; 6例培养与涂片显示 阴性，ii符合肺结核诊断标准，占6%; 45例无结核病临床证据。经xpert mtb/rif 检测，培养阳性者敏感度为94.2%,培养阳性、涂片阳性者敏感度为93.7%,培 养阳性、涂片阴性敏感度为93.1

14、%，涂片阴性、符合临床标准敏感度为47.6%， 非结核者灵敏度为99.3%。49例培养显示阳性标本中，采用比例法测得4株利福 平耐药菌，耐药率为8.2%，在经xpert检测灵敏度为93.9%,特异度为98%。综 上所述，xpert mtb/rif系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性，具奋较高 临床应用价值。参考文献：1张治国，欧喜超，孙倩，等.利福平耐药实吋荧光定量核酸扩增 技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究门.中国防痨杂志，2013,35 (1)： 13-16.2尹青琴，申阿东.xpert mtb/rif试验在结核病诊断中的研究现状 j.中华结核和呼吸杂志，2012, 35 (5

15、)： 363-365.3贾留群，龙虹羽，胡倩婧，等.xpert mtb/rif试验对肺外结核诊 断价值的meta分析门.中华临床医师杂志(电子版),2013, 7(6): 2567-2591.4张昆南，许自强，王朝东，等.脑脊液中检测结核分枝杆菌特异性 抗原对结核性脑膜炎的诊断意义.中华神经科杂志，2011, 44 (2)： 86-90.5郑瑞娟，秦莲花，周燕，等.焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌四 种药物耐药性.中华检验医学杂志，2011，34 (2)： 115-120.6王旭洲，谢飞来，郑智勇.荧光定量pcr检测结核/非结核分枝杆 菌在肉芽肿病理诊断中的应用.临床与实验病理学杂志，2013, 29(8)： 884-887.7吕中全，张明新，张慧.荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌 的价值.新乡医学院学报