伸筋草超临界萃取物工艺参数优化及药效验证(精)

1、【摘要】 目的考察超临界 CO2 流体萃取伸筋草有效成分的最佳工艺，进一 步验证萃取物的药效。方法采用正交实验设计，以萃取物得率为指标，考察萃 取压力、萃取温度、解析压力及解析温度 4 个因素的影响；采用热板法、醋酸 扭体法、鼠耳二甲苯致炎法、棉球肉芽肿致炎法观察萃取物的镇痛抗炎效果。 结果最佳萃取工艺条件为萃取压力 20 mPa,萃取温度 35C， 解析压力 8 mPa, 解析温度 55E， 萃取时间 4 h ;萃取物对热致痛和冰乙酸所致的小鼠扭体疼痛 具有良好的镇痛作用，对二甲苯致小鼠耳炎有显著的消炎作用。结论 超临界 CO2 流体萃取技术用于伸筋草有效成分提取，方法简单，适用于工业生产。

2、伸 筋草超临界萃取物具有显著镇痛抗炎的药理作用。【关键词】 伸筋草; 超临界二氧化碳萃取; 抗炎; 镇痛Optimization on Craft and Drug Action Validation of SFECO2Extract for Lycopodium japonicum Thunb.Abstract:ObjectiveTo study the optimal technology of supercritical CO2 fluidextraction(SFE CO2) on Lycopodium japonicum Thunb.and validate the drug act

3、ionof extract.MethodsThe yield of extractant was used as index to evaluate thetechnologies based on orthogonal design , in which 4 factors considered wereextraction temperature and pressure , separation temperature and pressure;the anti-inflammation and analgesia pharmacological actions was observed

4、 by drug actionexperiment.ResultsThe optimum extraction conditions were : extraction pressure20MPa, temperature35C;se paration pressure 8MPa, temperature55C; extraction time 4hours.The extract had good analgesia pharmacological action to pain caused byheat in mice and by acetic acid causing body dis

5、tortion test in mice. It also hadsignificant depressions to the inflammation caused by dimethyl benzene on the earof mice.ConclusionSupercritical fluids extraction method is simple for the activities ofLycopodium japonicum Thunb., and useful for the large scale production. Theextract has significant

6、 antiinflammation and analgesiapharmacological actions.Key words: Lycopodium jhponicum Thunb.; SFE CO2; Antiinflammatory ;Analgesia中药伸筋草为石松科植物石松 Lycopodium juponicum Thunb. 的干燥全 草。具有祛风除湿、舒筋活络的功效，用于关节酸痛、屈伸不利等症 1,2 药理研究表明，伸筋草氯仿提取部位具有显著的镇痛消炎作用，而正丁醇提取 部位和水提取部位则无此作用或作用较弱 3。可见，其有效成分多为低极性 或脂溶性成分。目前，对本品挥发油等

7、低极性部位的成分研究尚未见报道。超 临界二氧化碳流体的极性相当于正己烷，适于萃取中药中的低极性成分，且无溶剂残留，工艺简单，萃取时间短。目前对伸筋草超临界萃取研究未见报道， 本实验以萃取率为指标，采用正交实验设计，研究伸筋草超临界CO2 萃取的最佳工艺，并验证萃取物的镇痛抗炎效果，为伸筋草的进一步开发利用提供依 据。1 仪器与材料1.1仪器与药材 HA231 50 06 型超临界萃取装置（江苏南通华安超 临界实业公司）；伸筋草购自广州市清平药材市场，经本院生药教研室鉴定为 伸筋草Lycopodium japonicum Thunb. 的干燥全草，粉碎成 1020 目备用。1.2动物 NIH 种

8、小鼠，体重 1822 g ; SD 系大鼠，体重为 150180g,均购自广东省卫生厅医用动物中心。地塞米松片：浙江仙踞制药股份有限公 司生产，批号 040763。吗啡注射液：沈阳第一制药厂出品，批号 931202。2 方法与结果2.1SFE CO2 法提取工艺的基本流程将 200 g 伸筋草粉末投入萃取釜 中，对萃取釜、解析釜I、贮罐分别进行加热，当达到所选定的温度时，开启 C02 气瓶对系统进行加压，当达到所选定的压力时，开始循环萃取，并保持恒 温恒压。待达到选定的萃取时间后，从解析釜I出料口出料，得淡黄色的油状 伸筋草萃取物，计算萃取率 （萃取率为每 100 g 药得到的提取物的量 ）。

9、2.2正交实验选择萃取条件选择萃取压力（A）、萃取温度（B）、解析 压力（C）、解析温度（D） 4 个主要因素，各设定 3 个水平，设计 4 因素 3 水 平正交实验 L9（34），对伸筋草进行超临界 CO2 萃取。因素水平见表 1。结果见 表 2。表 1 提取工艺 4 因素 3 水平正交实验方案及结果（略）2.3正交实验的验证从表 2 实验结果综合后分析认为本实验的最佳条件 为A3B2C2D3取伸筋草药材 15 kg （n = 3）按最佳工艺进行中试放大实验，各 批次的出油率分别为 1.13%， 1.21%及 1.15%。表 2 正交实验结果（萃取率）分析（略）2.4萃取物镇痛作用实验2.4

10、.1 小鼠冰乙酸致痛扭体实验小鼠雌雄各半，体重1822 g ，随机分组，分别灌胃给药（吗啡组腹腔注射）， 1 h 后（吗啡 30 min 后），每只 小鼠腹腔注射 0.6%冰乙酸 0.2 ml ，记录注射后 20 min 内小鼠因疼痛扭体的 次数。结果见表 3。表 3 伸筋草萃取物对冰乙酸致小鼠疼痛扭体的影响（略）与蒸馏水组比较，*PV0.05 , *Pv0.01结果表明，伸筋草萃取物大、中、小剂量组小鼠扭体次数都少于空白组， 差异有显著性意义，提示伸筋草萃取物对冰乙酸所致的小鼠扭体疼痛有镇痛作 用。The paper shows that flavanones are abundant in

11、 longan nucleuses. It issignificant to make full use of longan necleuses. It has a brilliant prospect indeveloping this natural resources.【参考文献】 1 Cai Changhe, Tang Xiaolang,Zhang Aiyu, etc. longan fruit pulpnutritional therapy value and its development application prospect J. FoodScience, 2002, 23

12、(8): 328.Xu Jiankai. Longan high production technology question and answer M .Guangzhou: Guangdong Science and Technology Publishing Press,2001:56.Tan Shuhui, Zhan Reting. Chinese medicine open country recognitionhandbook (2)M. Guangzhou: Guangdong Science andTechnology Publishing Press,2004:208.Nan

13、jing college of pharmacy compilation groupChinese medicine study (center book)M .Nanjing:Jiangsu Peoples Publishing Press,1976:628.Xiao Gengsheng, Huang Ruqiang,Ceng Qingxiao,etc. Nutrition composition ofLongan seeds J.Food Science and Technology,2004,(1):93.Xia Xingzhou, Zhang Hui, Wei Chuanwan. In the banyan treeleaf the flavonoid withdraws the condition researchJ.FoodResearch and Developent.2