开展“高血压”化学发光免疫检测技术可行性分析20120712

1、运用化学发光免疫检测技术开展“高血压项目”检测的可行性分析一、开展“高血压项目检测”在医疗机构检测中的重要性放射免疫分析技术开展肾素活性血管紧张素醛固酮系统（RRAS）测定，临床意义介绍如下：RAAS是人体血压、水和电解质平衡重要的调节系统，对维持人体内环境的稳定起着十分重要的作用。肾素在生理和许多病理情况下，其数量和活性决定了整个体系的活性，测定肾素活性因此成为RAAS活性的标志。实际工作中肾素活性的测定是通过测定血管紧张素I（Ang I）的量和在37条件下1hAI的增加量（即肾素原被肾素催化转化为AI的量）来计算肾素活性的。肾素的主要生理功能是将血管紧张素原分解成Ang I，AI在血管紧张

2、素转移酶（ACE）作用下转变成Ang，并可引起醛固酮（ALD）分泌,以此发挥对机体血压的调节作用。ALD是肾素-血管紧张素系统的一个延伸部分，它也参与了高血压的发病过程。原发性醛固酮增多症患者，肾上腺因肿瘤或增生等原因大量分泌ALD，肾素分泌受抑制。临床上表现为高血压、低血钾。血、尿中ALd水平升高。肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）是由一系列激素及相应的酶组成,通过对血容量和外周阻力的控制，调节人体血压、水和电解质平衡，来维持机体内环境恒定。另外，它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切的关系。目前检测血浆中肾素活性（PRA）、血管紧张素（Ang）和醛固酮（ALD）已成为原发性和继

3、发性高血压分型诊断、治疗及研究的重要指标。对一些有关肾脏疾病的诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要意义。二、采用化学发光法检测“高血压项目”是医学检验技术的必然趋势1. 本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（

4、EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。2. 临床实验数据对照案例：2.1试验方案试验目的：通过博奥赛斯试剂盒对临床样本（金域提供）的对比试验，验证博奥赛斯试剂与金域现用试剂是否等效，从而验证博奥赛斯试剂和进口试剂的测值相关性。试验项目：博奥赛斯醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯ALD）博奥赛斯血管紧张素（Ang）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯PRA) 博奥赛斯血管紧张素（Ang）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯Ang)对照试剂：贝克曼（Beckman Coulter）ALD放

5、射免疫试剂（以下简称Beckman ALD） 索林（DiaSorin）血浆肾素活性放射免疫试剂（以下简称DiaSorin PRA） 伯乐免疫测定质控品三水平（371,372,373）（以下简称伯乐质控品） 美国病理学家协会（College of American Pathologists，CAP）尿样本室间质评（2012年）（以下简称CAP 尿样室间质评）试验样本：金域当天新鲜检测样本，样本量应足够进行比对试验。试验前去除严重溶血、脂血、黄疸和染菌的样本。试验方法：双盲法。2.2试验结果与结论2.2.1醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）2.2.1.1分析灵敏度、剂量反应曲线性同时测定

6、10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值与标准偏差SD。计算-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。表1 ALD分析灵敏度、线性S0发光值校准品浓度（pg/mL）发光值参数297559432291442526222252456235r0.9995309894630776687519795911963318S030766762896896313798221012428041231795SDS0105600.131607252990420650557883517335分析灵敏度13.7318559330137871500262278263060本次试验分析灵敏度为13.7pg/

7、mL，r=0.9995.2.2.1.2精密度（CV%）10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（）与标准差（SD）。批内不精密度（CV %）= SD×100%表2 ALD精密度样本1（2010-5-30 75160）样本2（2010-5-30 75180）孔数发光值测定值发光值测定值11817980115.98218668070.6521809837126.29222597866.3831802299129.84211410076.6441804197129.45211712576.1351828486124.53217459671.4561874899115.67214

8、634575.371875937115.48212384278.0381831369125.45209637981.4991773696130.91210623880.23101827748124.68212261578.18123.8375.45SD6.024.67CV%4.86%6.20%样本1,2的变异系数分别为4.864%，6.20%.2.2.1.3测值重复性 取1020份新鲜样本，将每份样本分装成35份。每天测定一次，连续35天。计算每个样本测定值的CV%.表3 ALD测值重复性2012-6-1高血压样本样本号放免测定值（pg/mL）6-2测定值6-4测定值6-7测定值SDCV%17

9、51287701339.991183.671262.591262.0878.166.19%275104116154.45175.64164.78164.9610.66.43%375105273173.35153.07170.15165.5210.96.59%475106575397.76341.49357.33365.5329.027.94%5751557941108.321038.141106.461084.3139.993.69%675108235279.25246.47257.12260.9516.726.41%7751096260.3153.6555.4456.473.456.11%8

10、7515621894.8783.9383.5987.466.427.34%9751575898.0685.6389.9191.26.316.92%10751587758.3449.8550.8453.014.648.75%117515990185.47165.63182.14177.7510.625.97%测得2012年6月1号金域高血压样本11个，分别于6月2号、4号、7号测定，分别计算CV%,结果在3.69%8.75%之间。2.2.1.4准确性2.2.1.4.1测定伯乐质控品表4 ALD测定伯乐质控品伯乐质控品（批号40250）测定值（pg/mL）Beckman Coulter测定范围（p

11、g/mL）是否在质控范围内37179.18<87.0是371200.26130-296是373400.47281-688是2.2.1.4.2测定CAP 尿样室间质评表5 ALD测定CAP 尿样室间质评CAP 尿样室间质评（2012）测定值（ug/L）CAP提供ALD测定范围（ug/L）是否在质控范围内N-0147.936.7-100是N-0217.713.5-35是N-0319.714.1-34.2是2.2.1.5与Beckman Coulter测定值的临床符合率。本次测定金域高血压样本213个，分别根据Beckman ALD，和博奥赛斯ALD说明书中普食立位的参考值判断样本值，判断样本

12、值属于正常，偏高或者偏低。结果如下表。 表6 ALD临床符合率（具体结果见附件一）低值样本数正常样本数高值样本数总数213例2117418213符合例数1716217196不符例数412117临床符合率92.00%2.2.1.6结论2.2.1.6.1博奥赛斯ALD试剂灵敏度为13.7pg/mL、批内不精密度4.864%，6.20%、测值重复性的不精密度在3.69%8.75%之间、剂量反应曲线线性0.9995、测定伯乐质控品值，CAP室间质评值均在要求范围之内。2.2.1.6.2博奥赛斯ALD试剂和Beckman ALD试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。2.2.

13、2血管紧张素（Ang）定量检测试剂盒（化学发光法）2.2.2.1分析灵敏度、剂量反应曲线性同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值与标准偏差SD。计算-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。表7 Ang分析灵敏度、线性S0发光值校准品浓度（ng/mL）发光值参数700631068132220.330039643263092r0.9996680761870308371.519568632079875S06672183702646969282375.510731561129713SDS0140375.76809113680954420509359560683分析灵敏度0

14、.027191726710626345231362250825本次试验分析灵敏度为0.02ng/mL，r=0.999。2.2.2.2精密度（CV%）10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（）与标准差（SD）。批内不精密度（CV %）= SD×100%表8 PRA精密度样本1（2010-6-5 75012）样本2（2010-6-5 75039）样本3（2010-6-5 75044）孔数4度值37度值PRA4度值37度值PRA4度值37度值PRA14.321.517.21.376.645.271.554.212.6624.622.0417.441.256.825.571.8

15、24.652.8335.3721.4516.081.216.415.21.264.042.7844.4623.0918.631.135.914.781.334.182.8554.7723.2918.521.216.2150.953.812.8663.2418.3515.111.487.075.590.973.742.7774.3821.9517.571.647.255.610.923.892.9784.5321.516.971.33.872.5794.9723.718.7317.365.292.79SD1.210.320.12CV%6.97%6.05%4.30%样本1,2,3的变异系数分别为6

16、.97%，6.05%，4.3%。2.2.2.3测值重复性 取1020份新鲜样本，将每份样本分装成35份。每天测定一次，连续35天。计算每个样本测定值的CV%.表9 PRA测值重复性2012-6-4高血压样本样本号放免测值（ng/mL/hr）6-5测值6-6测值6-7测值6-8测值SDCV%1751412.162.172.031.991.912.030.115.42%2751561.041.331.131.191.131.20.097.50%3752471.982.282.12.262.492.280.167.02%4753832.432.672.512.252.362.450.187.35%5

17、7540422.8113.9413.3912.9712.1413.110.765.80%67547826.6126.1323.5925.5427.6725.731.696.57% 测得2012年6月1号金域高血压样本6个，分别于6月5号、6号、7号和8号测定，分别计算CV%,结果在5.42%7.5%之间。2.2.2.4准确性2.2.2.4.1测定伯乐质控品表10 PRA 伯乐质控品测定伯乐质控品（批号40250）测定值（ng/mL/hr）DiaSorin PRA测定范围（ng/mL/hr）是否在质控范围内3712.422-3.5是3716.775.3-9.1是3738.245.9-10.1是2

18、.2.2.5与DiaSorin PRA测定值的临床符合率。本次测定金域高血压样本218个，分别根据DiaSorin PRA，和博奥赛斯PRA说明书中立位的参考值判断样本值，判断样本值属于正常，偏高或者偏低。结果如下表。 表 11 PRA临床符合率（具体结果见附件二）低值样本数正常样本数高值样本数总数1335035218符合例数1284431203不符例数56415临床符合率93.10%2.2.2.6结论2.2.2.6.1博奥赛斯PRA试剂从灵敏度为0.02ng/mL、批内不精密度为6.97%，6.05%，4.3%、测值重复性的不精密度在5.42%7.5%之间、剂量反应曲线线性0.9996、测定

19、伯乐质控品值均在要求范围之内。2.2.2.6.2博奥赛斯PRA试剂和DiaSorin PRA试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。2.2.3血管紧张素（Ang）定量检测试剂盒（化学发光法）2.2.3.1分析灵敏度、剂量反应曲线性同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值与标准偏差SD。计算-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。表12 Ang分析灵敏度、线性S0发光值校准品浓度（pg/mL）发光值参数683629464066703068290877419047r0.9998744122670646487034101773938250S06

20、9725936970649721270615021301582235844SDS0329377.26611462682908743012323571342272分析灵敏度7.05693414774190471500567130607886本次试验分析灵敏度为7.05pg/mL，r=0.9998。2.2.3.2精密度（CV%）10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（）与标准差（SD）。批内不精密度（CV %）= SD×100%表13 Ang精密度样本1（2010-6-1 75103）样本2（2010-6-1 75104）孔数发光值测定值发光值测定值1364851730.3

21、3486931419.752362659930.69484696319.783365176430.28516306717.054351088732.69515310617.145377768829.1510317217.576362968430.64513375317.317357167831.62525926116.228374836529.36518959116.829381174528.8491244119.2310373995529.43491111319.2430.2918.01SD1.21.34CV%3.97%7.44%样本1,2的变异系数分别为3.97%，7.44%。2.2.3.

22、3测值重复性 取1020份新鲜样本，将每份样本分装成35份。每天测定一次，连续35天。计算每个样本测定值的CV%.表14 Ang测值重复性2012-6-4高血压样本样本号6-5测值6-6测值6-7测值SDCV%17512726.0824.4523.4524.661.335.39%27514037.9332.9736.9235.942.627.29%37514151.3148.9554.6451.632.865.54%47515649.9547.7843.6747.133.196.77%57516928.1524.7427.3126.731.786.66%67524523.1621.2823.8422.761.335.84%77524733.437.1733.5234.72.146.17%87538347.3748.9948.2348.20.811.68%97540478.32