![A260、A230、A280的含义[二类参考]_第1页](http://file2.renrendoc.com/fileroot_temp3/2021-11/5/a92a9c0f-0362-4e55-84de-081f058d0ee7/a92a9c0f-0362-4e55-84de-081f058d0ee71.gif)
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1、A260/A280和A260/A230的含义1. A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值<0.1);朗伯比尔定律:A 吸光值I0 入射光强度I 投射光强度c 吸光物质的摩尔浓度(mol/L)d 光通过的液层厚度(cm) 摩尔吸光系数(Lm
2、ol-1cm-1)2. A280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0。如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染,需要纯化样品。比值=1.5相当于50蛋白质/DNA溶液3. A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中,需要降低样品的稀释度,
3、A230的负值会被校正。4. A320nm或A340nm为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是,标明溶液中有悬浮物,需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。5. A260/A280和A260/A230是核酸纯度的指示值,纯度好的DNA,在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5,A260 / A280的比值, 用于评估样品的纯度, 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230表示样品中存
4、在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。2. 纯净的DNA和RNA在A260和A280都有吸收值,但以260最高。而核酸提取过程中最主要的污染物蛋白质在A280处有强烈的吸收值,所以计算这两个吸收峰的比值就可以确定核酸的纯度。DNA的这个值一般是1.82.0,而RNA则是2.0。值得注意的是,这个比值并不能很好的反应出核酸的纯度,简单来说寡聚核酸会造成A260值升高,如果核酸有降解,则会导致A260/A280值上升。另外,如果A280值偏高,并不一定是蛋白污染。蛋白在A280有吸收值是因为其苯丙氨酸等氨基酸残基中所含有的苯环的缘故,所有含苯环的化合物都会在A280有吸收峰。所以如果A280升高虽然有最有可能是蛋白污染,但也有可能是其他苯环物质。如植物DNA提取过程中的多酚类物质污染。另外,如果要求高的话,我们还会要求
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