临检血液概述、采血、抗凝剂

1、临床检验基础临床检验基础临床检验基础是采用各种实验室检查方法和技术，临床检验基础是采用各种实验室检查方法和技术，对来自机体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排对来自机体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行一般性状观察，理学、化学、免泄物等标本进行一般性状观察，理学、化学、免疫学、病原学和显微镜等检查，为疾病筛查和诊疫学、病原学和显微镜等检查，为疾病筛查和诊断提供简便、快速的检测结果。断提供简便、快速的检测结果。第一节概述第一节概述血液血液生理概要生理概要 标本采集、送检、保存与处理标本采集、送检、保存与处理 标本抗凝标本抗凝 血涂片的制备血涂片的制备血细胞染色方法血细胞染色方法血细胞显微

2、镜计数法血细胞显微镜计数法教学目标教学目标掌握：掌握：血液标本采集的方法及评价，抗凝剂的选择应用，血液标本采集的方法及评价，抗凝剂的选择应用，血涂片制备方法和染色原理血涂片制备方法和染色原理，血细胞显微镜计数，血细胞显微镜计数方法方法。 熟悉：熟悉：血液血液生理生理概述和概述和标本保存标本保存。一一 血液生理概要血液生理概要1.血液的组成血液的组成血浆：血液加抗凝剂后分离出来的液体部分。血浆：血液加抗凝剂后分离出来的液体部分。血清：血液离休后自然凝固分离出来的液体。血清：血液离休后自然凝固分离出来的液体。45%血尘55%89%9192%2.血液的理化性质血液的理化性质血量：正常人血液量血量：正

3、常人血液量7010ml/kg体重，成人体重，成人45L，占体重的占体重的6%8%。颜色：动脉血鲜红色颜色：动脉血鲜红色 HbO2 静脉血暗红色静脉血暗红色 Hbred 贫血病人贫血病人 红色变浅红色变浅 CO、氰化物中毒、氰化物中毒 樱红色樱红色红细胞悬浮稳定性红细胞悬浮稳定性 唾液酸根形成唾液酸根形成Zeta电位电位 黏滞性黏滞性 血细胞比容血细胞比容 （红细胞数量）（红细胞数量） 血浆粘度血浆粘度 （血浆蛋白浓度）（血浆蛋白浓度） 比密比密 血液比密与红细胞相关血液比密与红细胞相关 男男1.0551.063 女女1.0511.060 血浆比密与血浆蛋白相关血浆比密与血浆蛋白相关 1.025

4、1.030渗透压渗透压 血浆渗透压血浆渗透压 290310mOsm/（kgH2O）PH 7.357.45凝固性凝固性 凝血因子激活凝血因子激活 3.血液的功能血液的功能 运输功能运输功能 协调功能协调功能 维持内环境的稳定维持内环境的稳定 防御功能防御功能二、血标本的采集二、血标本的采集、送检、保存与处理送检、保存与处理（一）血标本的采集（一）血标本的采集采血采血静脉采血静脉采血毛细血管采血毛细血管采血 普通采血法普通采血法真空采血法真空采血法 静静 脉脉 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡需血量较多的检查凡需血量较多的检查0.5ml如：

5、如：ESR、Hct、凝血因子的测定等、凝血因子的测定等。部位部位 浅表静脉均可浅表静脉均可,常用肘部静脉，不明显时可用常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝部，手背、踝部， 幼儿可用颈外静脉。幼儿可用颈外静脉。体位体位 坐位或卧位坐位或卧位捆扎时间捆扎时间 1min二、静脉采血法二、静脉采血法 【采血方法】 准备选择静脉消毒扎压脉带穿刺、松压脉带抽血拔针止血注入试管。 如以下视频所示静脉采血法静脉采血法普通采血法普通采血法1.避免溶血避免溶血,器具干燥器具干燥,避免气泡避免气泡2.先拔针头先拔针头,再缓缓注入试管再缓缓注入试管3.与抗凝剂混匀时轻轻颠倒与抗凝剂混匀时轻轻颠倒4.严格消毒严格消毒5.

6、抽血时只能外抽不能内推抽血时只能外抽不能内推真空采血法（真空采血法（40年代，美国年代，美国BD公司）公司）套筒式和头皮静脉式两种优点： 血样无需容器之间的转移，减少溶血现象，保持 血液标本的完整性，使检验结果更加准确，也有 利于防止医院内血源性传染病的交叉感染和环境 保护。缺点： 真空采血管价格较高注意: 采血后,先拔下刺塞针端的采血试管,后拔穿刺针。 I.采血针采血针2008-10-21 II.持针器持针器2008-10-212008-10-21 III.真空采血管真空采血管2008-10-21 血量量0.1ml的检验项目：的检验项目：RBC计数、计数、WBC计数、计数、 BPC计数、计数

7、、Hb测定等测定等 毛细血管采血法毛细血管采血法Skin puncture for blood collection采血部位WHO推荐采取推荐采取毛细血管毛细血管血以左手中指或无名指指尖内血以左手中指或无名指指尖内侧侧为宜为宜1手指采血：手指采血： 优点：方便优点：方便获较多血量获较多血量检查结果比较恒定检查结果比较恒定 缺点：与静脉血仍在某些差异。缺点：与静脉血仍在某些差异。2耳垂采血：耳垂采血： 优点：痛感轻优点：痛感轻 方便方便 适用于反复采集适用于反复采集 缺点：血循环差缺点：血循环差受气温影响大检查结果不恒定受气温影响大检查结果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特

8、别是冬季。结果均比静脉血高，特别是冬季。3、其他部位：、其他部位： 拇指、拇趾或足拇指、拇趾或足底外侧缘底外侧缘采血采血 半岁以下婴幼儿半岁以下婴幼儿 皮肤完整处皮肤完整处 严重烧伤者严重烧伤者 采血针采血针 三棱针或专用的三棱针或专用的“采血针采血针”为好，使用前者应高压灭菌，为好，使用前者应高压灭菌， 一人一针一人一针。2008-10-21注意事项1、采血部位皮肤完整。、采血部位皮肤完整。2、无菌技术操作：防采血部位感染，、无菌技术操作：防采血部位感染， 一人一针防肝炎、艾滋病。一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：、

9、多项检查时，采血次序为：BPC计数计数RBC计数、计数、Hb测测 定定WBC计数与分类。计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入 堵塞仪器。堵塞仪器。两种采血方法的优缺点比较毛细血管毛细血管采采血血静脉采血静脉采血缺点缺点限制了重复实验和追限制了重复实验和追加实验，标本量少，加实验，标本量少，局部炎症可得假结果局部炎症可得假结果，组织液可混入，组织液可混入不同抗凝剂的使用，不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响改变血液性质，影响有形成分的形态有形成分的形态优点优点价廉、快速、操作简价廉、快速、操作简便，标本可直接测定便，标本可

10、直接测定标本代表性大，无组标本代表性大，无组织液影响，适于临床织液影响，适于临床研究，可重复实验和研究，可重复实验和追加其他实验追加其他实验 1.血标本运输2.血标本保存3.检验后标本处理 （二）（二）血液标本运输、保存与处理血液标本运输、保存与处理 三、血标本的抗凝 1、枸橼酸钠（柠檬酸钠） a. 抗凝原理：螯合钙离抗凝原理：螯合钙离子子使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1：9 配成配成 105 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1：4 化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）c. 适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）适用范围：止血学检验

11、、血沉、输血保养液（毒性小）d. 不适用于：血细胞计数不适用于：血细胞计数 2. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）盐）盐a. 抗凝原理：抗凝原理： 螯合钙离子螯合钙离子b. 使用方法：使用方法： 15g/L浓度浓度EDTA 和血液和血液 1：10适用范围：适用范围： 对血细胞形态影响小对血细胞形态影响小,适合血常规检查、适合血常规检查、 Hct不适用于：影响血小板聚集和不适用于：影响血小板聚集和凝血因子凝血因子功能功能, 不宜凝血不宜凝血因子因子检查和血小板功能试验。检查和血小板功能试验。 3. 肝素肝素 （含硫酸基团的粘多糖）（含硫酸基团的粘多糖）抗凝原理：低浓度时抑制因子抗凝原理：低

12、浓度时抑制因子a、和和PF3之之 间的作用，加强抗凝血酶间的作用，加强抗凝血酶灭活丝灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成， 还能抑制凝血酶的自我催化及抑制还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高浓度时阻断凝血的作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白的反应。酶和纤维蛋白的反应。 b. 适用方法：适用方法： 1g/L浓度的肝素钠与血液浓度的肝素钠与血液 1：10优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、能耐高温。溶血、能耐高温。适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白

13、 测定、红细胞比积）和多种生化分析测定、红细胞比积）和多种生化分析 e. 不适用于：不适用于： WBC和和BPC计数、血涂片检查、计数、血涂片检查、 凝血凝血功能功能检验。检验。4. 草酸钠（乙二酸的钠盐）草酸钠（乙二酸的钠盐）a. 抗凝原理：草酸钙沉淀抗凝原理：草酸钙沉淀b. 使用方法：使用方法： 草酸钠草酸钠 0.1mol/L 和血液和血液1：9c. 适用范围：适用范围： 止血学检验止血学检验 。d. 不适用于：对凝血因子不适用于：对凝血因子V保护功能差，保护功能差， 影响影响PT测定；沉淀物影响测定；沉淀物影响 自动凝血仪的使用自动凝血仪的使用。5. 双草酸盐抗凝剂双草酸盐抗凝剂 a.

14、抗凝原理：抗凝原理： 草酸钙沉淀草酸钙沉淀使用方法：使用方法： 草酸钾草酸钾0.8g , 草酸铵草酸铵1.2g（100ml） 与血液与血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）适用范围：适用范围： 红细胞检验（红细胞比积、计数）红细胞检验（红细胞比积、计数） d. 不适于不适于: 血小板计数和白细胞分类计数血小板计数和白细胞分类计数, 电解质测定电解质测定 物理方法抗凝物理方法抗凝 脱纤维蛋白：脱纤维蛋白： 将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动， 纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，使血液使血液 不能凝固不能凝固。适用于免疫学检验和红斑。适用于免

15、疫学检验和红斑 性狼疮细胞检查。性狼疮细胞检查。小结小结 血液是由血细胞和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。凡需血液量较少的检验项目，常用皮肤采血法，通常采手指血。采血时要注意采血部位要无病变，要擦去第一滴血，不能用力挤压。凡需血液量较多的检验项目，要用静脉采血法，其采血部位常用肘前静脉。如需要抗凝抗凝血标本时，则需要根据检验项目的要求，采用枸橼酸钠、乙二胺四乙酸盐和肝素等抗凝剂来阻止血液凝固。请您练习请您练习答案答案: :皮肤采血法用注意什么问题皮肤采血法用注意什么问题? ?所选择采血部位的皮肤应完好。严格消毒所选择采血部位的皮肤应完好。严格消毒皮肤，防止采血部位感染。皮肤消毒后

16、，待乙皮肤，防止采血部位感染。皮肤消毒后，待乙醇挥发干后再刺针。如血流不畅，切不可用力醇挥发干后再刺针。如血流不畅，切不可用力挤压勉强采血，而应重新针刺。出血不止时，挤压勉强采血，而应重新针刺。出血不止时，可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时应在报告单上注明，提醒临床医生注意。进行应在报告单上注明，提醒临床医生注意。进行多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血小板计数、红细胞计数、白细胞计数。小板计数、红细胞计数、白细胞计数。请您练习请您练习请说出静脉采血的步骤？请说出静脉采血的步骤？答案答案: : 准

17、备准备选择静脉选择静脉消毒消毒扎压脉带扎压脉带穿刺、松压脉带穿刺、松压脉带 抽血抽血 拔针止血拔针止血注入试管。请您练习请您练习答案答案: :请说出枸橼酸钠的抗凝原理、用途及其用量？请说出枸橼酸钠的抗凝原理、用途及其用量？枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使物，使CaCa2+2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。失去凝血作用，从而阻止血液凝固。主主要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象检查常用检查常用0.109mol/L0.109mol/L的水溶液，与血液之比通常的水溶液，与血液之比通常为为1 1

18、：9 9。魏氏法血沉测定用浓度为。魏氏法血沉测定用浓度为0.105mol/L0.105mol/L，与血液比例为与血液比例为1:41:4（V V：V V）。）。请您练习请您练习请将下列抗凝方法和适宜的项目用线连接起来。 枸橼酸钠 血细胞比容测定乙二胺四乙酸盐 红斑狼疮细胞的检验 肝素 凝血象 脱纤维法 一般血液学检查教学教学目标目标1.叙述载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合叙述载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合格血片的标准。格血片的标准。2.阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事项和染色结果的判断。意事项和染色结果的判断。3.知道吉姆萨染

19、色法和混合染色法。知道吉姆萨染色法和混合染色法。良好血涂片的标准厚薄适宜, 头体尾分明， 细胞分布均匀,血膜边缘整齐两侧两端留有空隙 良好血涂片尾体头四四 血涂片的制备血涂片的制备血涂片染色显微镜检查用途：细胞形态检查，细胞血涂片染色显微镜检查用途：细胞形态检查，细胞 数量评估，数量评估，网织红、异常细胞、寄生虫检验。血膜过厚：细胞重叠缩小血膜过厚：细胞重叠缩小血膜过薄：细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘血膜过薄：细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘1.玻片清洁：玻片清洁： a 新玻片处理：新玻片处理：用盐酸浸泡用盐酸浸泡24小时小时。 b 用过玻片处理：用过玻片处理：用洗涤剂清洗。用洗涤剂清洗。

20、c 使用中玻片处理：只能持玻片边缘，使用中玻片处理：只能持玻片边缘， 保持清洁、干燥、保持清洁、干燥、 中性、无油腻。中性、无油腻。操 作推片载玻片 25-30 30-45 推玻片载玻片制备过程：角度大角度大 角度大 速度快 血膜厚血滴过大,血膜过厚造成血膜厚的原因示意图造成血膜薄的原因示意图造成血膜薄的原因示意图角度小角度小血滴小 血膜薄角度小 速度慢 血膜薄 25 血膜分布不均：主要由于以下原因所致血膜分布不均：主要由于以下原因所致: : 推片用力不均,血膜成厚薄相间的梯形玻片不清洁 有油迹 血膜出现空泡区推片边缘不齐血膜出现线条样缺损碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核碱性染料：

21、为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、 嗜酸性颗粒成分等。嗜酸性颗粒成分等。3. 复合染料：复合染料： 同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（一）染料（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料） 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染发色基团和助色基团使生物学染色剂产

22、生颜色和被染 组织亲合。组织亲合。五五 细胞常用的染色方法细胞常用的染色方法（二）细胞染色原理：（二）细胞染色原理：1. 物理作用：物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：化学作用： a. 染料的化学成分：染料的化学成分： 助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。 瑞氏染色法（一）染色原理 分两相进行，第一相是

23、酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性亚甲蓝与细胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板结合。第二相是亚甲蓝和伊红结合在适宜条件下形成紫色的亚甲蓝-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。 b. 蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质： 蛋白质中的氨基酸含有不同蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基（数量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，），同时还有其他活性基团。在游离状态时， -NH2获得一个获得一个H+变成带正电的变成带正电的-NH3+，而，而-COOH失去

24、一个失去一个H+变成带负电的变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。分别与不同染料结合。 c. 周围环境的酸碱度：周围环境的酸碱度： 如环境如环境pHpI（ pI 为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性 染料；反之，染料；反之， pH pI，则结合碱性染料。，则结合碱性染料。 PHH增多增多易与伊红结合易与伊红结合染色偏红染色偏红 PHH减少减少易与美蓝结合易与美蓝结合偏蓝偏蓝 （二）试剂（二）试剂 1. Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS）：）： （PH6.46.8） 磷酸二氢钾（无水

25、）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水），磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸馏水加到蒸馏水加到1000ml。 配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。，塞紧瓶口备用。123 3. 染色方法：染色方法： a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。分钟。 d. 用清水冲洗，待干后镜检。用清水冲洗，待干后镜检。注意事项：注意事项： a. 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落 b. 染色时间与染液浓度、室