2021年MC00906D高效液相色谱仪检定规程

1、标准操作程序STANDARDOPERATINGPROCEDURE部门： QC、设备工程部题目：高效液相色谱仪检定规程SOP编号： MC-009-06-D起草：部门批阅： |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. QA 批阅：批准：执行日期：复制： 3 份分发：设备工程部、 QA、QC目的：建立高效液相色谱仪检定规程，确保检验数据的精确性；范畴：本规程适用于配有紫外 -可见光检测器、二级管阵列检测器、荧光检测器、示差折光率检测器和蒸发光散射检测器的液相色谱仪的首次检定、后续检定和使用中检查； 责任者：计量主管、 QC 主任、

2、化验员；程序：1、为了证明仪器在日常使用过程中，仪器本身或使用环境的变化（有意的和无意的）没有影响仪器的整体性能，确保分析数据的牢靠性；应对HPLC 进行定期检定；2、本检定规程参照国家技术监督局JJG705-201“4 液相色谱仪检定规程” 以及 USP<1058>“分析仪器确认”制订；3、检定项目与要求3.1 计量器具掌握包括：首次检定、后续检定和使用中检验；3.1 .检定条件3.1.1 .环境条件3.1.1.1 .检定室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，排风良好；3.1.1.2 仪.器应平稳地放在工作台上，四周无剧烈机械震惊和电磁干扰源，仪器接地良好；3.1.1.3.电源

3、电压为220±22V，频率为（ 50±0.5）HZ；3.1.2 .检定设备3.1.2.1. 秒表：分度值不大于 0.1s；3.1.2.2. 分析天平: 最大称量不小于 100g，最小分度值不大于 1mg；第 1 页，共 21 页3.1.2.3. 数字温度计: 测量范畴为 0100，最小分度不大于 0.1；3.1.2.4. 注射器:10 L 和 50L 各一支； 以上计量器具需经计量检定合格；3.1.2.5. 10ml注射器一支；3.1.2.6. 游标卡尺： 15cm/0.02mm；3.1.2.7. 容量瓶： 50ml，10 个；3.1.3. 标准物质|精.-4-7|品.|可

4、.|编.|辑.1x10 g/ml,1x10g/mL 的萘/甲醇溶液|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 紫外波长标准溶液；3.1.4. 其他要求3.1.4.1. 检定用试剂： HPLC 用甲醇、纯水，分析纯的丙酮和异丙醇等；3.1.4.2. 其他玻璃器皿等4、检定程序4.1. 仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证标志；4.2 .仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清楚；4.3 、文件系统有设备的确认文件、设备的使用记录、日

5、常保护保养记录等相关记录；4.4 输液系统的检定4.4.1 输液系统：a）输液管路接口紧密坚固，在规定的压力范畴内无泄漏； b）泵流量设定值误差 SS 和流量稳固性 SR 应符合表 2 的要求；c 梯度最大答应误差 Gc:±3%；表 1泵流量设定值误差 SS 和稳固性 SR 指标要求泵流量设定值 /（mL/min0.20.50.61.0大于 1.0测量次数333第 2 页，共 21 页流淌相收集时间 /min20101055泵流量设定值最大答应误差泵流量稳固性 SRSS±5%3%±3%2%±2%2%注： 最大流量的设定值可依据用户使用情形而定对特殊的、流

6、量小的仪器， 流量的设定可依据用户使用情形选大、 中、小三个流量， |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 流淌相的收集时间就依据情形适当缩短或延长；4.5 柱温箱4.5.1 柱温箱温度设定值最大答应误差：± 2；4.5.2 柱温箱温度稳固性：不大于 1/h4.6 检测器仪器的检测器的主要技术指标见表2.表 2液相色谱仪检测器的主要技术指标项目检测器紫外-可见光检测器二极管阵列检测器荧光检测器示差折光率检测器蒸发光散射检测器-4-4-7基线噪声 5×10AU 5×10 AU 5×1

7、0 RIU1mV基线漂移5×10-3AU/30min5×10-3AU/30min5×10-6RIU/30min5mV/30min最小检测浓度5×10-8g/mL萘-甲醇溶液5×10-9g/mL萘-甲醇溶液5×10-6g/mL胆固醇 -甲醇溶液5×10-6g/mL胆固醇 -甲醇溶液波长示值最大答应误差±2nm± 5nm波长重复性2nm 2nm10线性范畴优于 103优于33优于 10注： 如仪器的输出信号用 mV 或 V 表示，留意查看仪器说明书或仪器标牌说明的其与AUFU 的换算关系：如无特殊标明通常可依

8、据1V=1AUFU 进行换算；4.7 整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示，指标要求见表3.项目检测器紫外-可见光检测器二极管阵列检测器荧光检测器示差折光率检测器蒸发光散射检测器第 3 页，共 21 页定性重复性1.0%1.0% 1.0%1.5%定量重复性3.0%3.0% 3.0%4.0%5、通用技术要求5.1 仪器外观仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌，国 |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 产仪器应有制造运算器具许可证标志；5.2 仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧

9、密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清楚；6、计量器具掌握计量器具掌握包括：首次检定、后续检定和使用中检查；6.1 检定条件6.1.1 环境条件6.1.1.1 检定室应清洁无尘，无易燃，易爆和腐蚀性气体，通风良好；6.1.1.2 室温（ 1530），检定过程中温度变化不超过3（对示差折光率检测器， 室温变化不超过 2），室内相对湿度 20%-85%；6.1.1.3 仪器应平稳地放在工作台上，四周无剧烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好；6.1.1.4电源电压为（ 220±22）V，频率为（ 50 ±0.5）Hz；6.1.2 检定设备6.1.2.1 秒表：最小

10、分度值不大于 0.1s；6.1.2.2 分析天平：最大称量不小于 100g，最小分度值不大于 1mg；6.1.2.3 数字温度计：测量范畴为（ 0100），最大答应误差为 ±0.3；以上器具需经计量检定合格；6.1.3 有证标准物质：萘-甲醇溶液标准物质：认定值为 1.00 ×10-4g/mL,，扩展不确定度小于 4%，k=2； 萘-甲醇溶液标准物质：认定值为 1.00 ×10-7g/mL,，扩展不确定度小于 2.0%，k=2；甲醇中胆固醇溶液标准物质：认定值为200ug/mL,，扩展不确定度小于 5.0%，k=2；甲醇中胆固醇溶液标准物质：认定值为5.0ug/m

11、L,，扩展不确定度小于 4%，k=2；第 4 页，共 21 页胆固醇纯度标准物质：认定值为99.7%，扩展不确定度小于 0.1%，k=2；6.1.4 其他要求6.1.4.1 检定用试剂：色谱级甲醇，纯水，分析纯的丙酮和异丙醇，紫外分光光度计溶液标准物质等； |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | 6.1.4.2 注射器： 10L， 50L 和 10mL 各一支；6.1.4.3 容量瓶： 50mL，10 个；6.2 检定项目和检定方法6.2.1 检定项目检定项目见表 4；序号检定项目首次检定后续检定使用中检定 * | * | |欢.|迎.|下.|载. 1 输液系统

12、：泵耐压检定泵流量设定值误差 Ss泵流量稳固性误差 SR+梯度误差 Gc流淌相比例掌握阀误差 L C+柱温箱： 温度设定值误差 Ts2温度稳固性 T+检测器：基线噪声基线漂移最小检测浓度3波长示值误差和重复性线性范畴换档误差+4自动进样器的检定+4整机：定性、定量重复性+注：“ +”表示应检定项目，“”表示可不检定项目；无梯度洗脱装置或无梯度操作要求的和无柱温箱的仪器，此项目不检定；6.2.2 检定方法第 5 页，共 21 页6.2.2.1 通用技术要求按 5.1.和 5.2 的要求，目视、手动检查；6.2.2.2 输液系统 |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | *

13、| * | * | |欢.|迎.|下.|载. a）泵耐压将仪器各部分连接好，以 100%甲醇（或纯水）为流淌相，流量为0.2mL/min， 按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路借口是否有湿迹； 卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器一下） ，使压力达到最大答应值的 90%，保持 5min 应无泄漏；b 泵流量设定值误差 SS和流量稳固性 SR按表 1 的要求设定流量， 启动仪器，压力稳固后， 在流淌相出口处用事先称重过的干净容量瓶收集流淌相，同时用，秒表计时，收集表1 规定时间流出的流淌相，在分析天平上称重，按公式（ 3）运算流量实测值 Fm 按公式（ 1）、公式（ 2）

14、运算 SS 和 SR；每一设定流量，重复测量 3 次；Ss=（ Fm Fs）/Fs×100%（1）式中：Fm 同一设定流量 3 次测量值的算术平均值， mL/min Fs流量设定值， mL/minSR=（FmaxFmin）/ Fm ×100%（2）式中：Fmax同一设定流量 3 次测量值的最大值， mL/min ； Fmin同一设定流量 3 次测量值的最小值， mL/min；Fm=（W2-W1）/（ t ·t ）式中：Fm流量实测值， mL/min； W2容量瓶+流淌相的质量， g； W1容量瓶的质量， g；3t 试验温度下流淌相的密度， g/cm ，（不同温度下

15、流淌相的密度参见附录C）； t收集流淌相的时间， min；c梯度误差的检定第 6 页，共 21 页由梯度掌握装置设置阶梯式的梯度洗脱程序（梯度程序可参照表5），A 溶剂为纯水， B 溶剂为含 0.1%丙酮的水溶液；将输液泵和检测器连接（不接色谱柱） ，开机后以 A 溶剂冲洗系统，基线平稳后开头执行梯度程序，画出 B 溶剂经由 5 段阶梯从 0%变到 100%， 如图 1 所示；求出 B 溶剂变化所产生的每一阶段梯对应的响应信号值的变化值Li；重复 测量 2 次，按公式（ 4）运算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均值Li；按公式（ 5） |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料.

16、* | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 运算五段阶梯响应信号值的总平均值；按公式（ 6）运算每一段的梯度误差Gi，取 Gi最大值作为仪器的梯度误差；4式中： Li 第 i 段阶梯响应信号值的平均值；L1i第 i 段阶梯第 1 组响应信号值；L1（ i-1）第（ i-1）段阶梯第 1 组响应信号值； L 2i第 i 段阶梯第 2 组响应信号值；L2（ i-1）第（ i-1）段阶梯第 2 组响应信号值；5式中：5 段阶梯响应信号值的总平均值；n=梯度的阶梯数， n=5；6式中： Gi 第 i 段阶梯的梯度误差；注：当 i 为 1 （i-1=0）时，第（ i-1）阶梯响应信号值为

17、B 溶剂为 0%时的响应信号值；第 7 页，共 21 页 |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 序号表 5A 溶剂梯度程序设置B 溶剂（纯水）（0.1%丙酮水溶液）1100%0%280%20%360%40%440%60%520%80%60%100%7100%0%0A输出信号100%A0B20B40B60B80B100B时间图 1 梯度误差检定示意图6.2.2.3 柱温箱温度设定值误差 TS和柱温箱稳固性 TC将数字温度计探头固定在柱温箱内与色谱柱内与色谱柱相同部位，挑选35和 45（也可依据用户使用温度设定）进行检定；

18、按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳固后，记 下温度计读数并开头计时，以后每隔10min 记录 1 次读数，共计 7 次，求出平均值；平均值与设定值之差为柱温箱温度设定值误差Ts，7 次读数最大值与最小值之差为柱温箱温度稳固性 Tc；6.2.2.4 紫外-可见光检测器和二级管阵列紫外检测器的性能 a）波长示值误差和重复性的检定第 8 页，共 21 页将检测器和数据处理系统连接好， 通电预热稳固后， 用注射器将纯水注入检测池内进行冲洗后，布满检测池；待检测器示值稳固后，在（235±5）nm、（257±5）nm、（313±5） |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习

19、.|资.nm、（ 350±5）nm 的波长下降示值回零， 然后再用注射器将紫外分光光度计溶液标准物质（参考波长为 235nm，257 nm ， 313 nm和 350 nm）从检测器入口注入样品池中清洗， 并将样品池布满至示值稳固；将检测器波长调到低于参考波长5nm 处（例如检定 257nm时，检测器波长先调到 252nm），转变检测器波长，每（ 510）s 转变 1nm，记录每个波长下的吸取值（吸取值变化的示意图见图3），最大或最小吸取值对应的波长与参与波长示值误差；每个波长重复测量3 次，其中最大值与最小值之差为波长重复性；|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下

20、.|载.AU253257256258255259254260252波长/nm图 2 波长示值误差检定中吸取值变化示意图有吸取值显示的检测器，转变波长时刻直接读出吸光值，其最大（或最小）吸光值对应的波长与参考波长之差为波长示值误差； 由波长扫描功能的仪器可画出标准溶液的光谱曲线，其波峰（或波谷）对应的波长与参与波长之差为波长示值误差；对于由内置标准滤光片可进行自检的仪器可直接采纳其测量数据；对转变波长有自动回零的紫外 -可见光检测器，可采纳连续进样的方法检定波长示值误差，详细做法是：用一节空管代替色谱柱检报告液路连通，以水做流淌相，流量为（0.51.0）mL/min ，采纳步进进样方法，例如检定

21、257nm时，从 252nm 开头到 262nm，每 2min 转变 1nm，用注射器注入相同体积的紫外分光光度计溶液标准物质，得到一组不同欧畅的色谱峰，最高（或最低）（b）基线噪声和基线漂移的检定选用 C18 色谱柱，以 100甲醇为流淌相， 流量为 1.0 ml/min，紫外检测器的波长选在254nm,检测灵敏度调到最灵敏档； 开机预热，待仪器稳固后记录基线 30 min，选取基线中噪声最大峰 -峰高对应的信号值，按公式（7）运算基线噪声，用检测器自身的物理量（ AU ） 作单位表示；第 9 页，共 21 页式中：NdKB（7）Nd 为检测器基线噪声； |精.|品.|可.|编.|辑.|学.

22、|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. K 为衰减倍数；B 为测得的基线峰峰高对应的记录仪标度（ AU ）；（c）最小检测浓度的检定7在 6.2.4 中（b）的色谱条件下，用微量注射器从进样口注入 1020L，1.00×10 g/mL 的萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰峰高， 按式（ 8）运算最小检测浓度 cL（按 20L 进样量运算）；8式 中 ： CL 为最小检测浓度（ g/mL）； Nd 为基线噪声峰峰高（ mm）；c 为标准溶液浓度（ g/mL）； V 为进样体积 L； H 为标准物质的峰高（ mm）；注： Nd 和 H

23、的单位保证一样，式中分母的“ 20”表示标准的进样体积，其单位为微升（ L）（d） 线性范畴将检测器和数据处理系统连接好，检测器波长选在254nm，通电稳固后，用注射器 直接向检测池中注射 2异丙醇-水溶液冲洗检测池至示值稳固后， 登记此值；然后，依照上法向检测池中依次注入丙酮 -2异丙醇系列水溶液（丙酮含量为 0.1，0.2， ，1.0） 冲洗检测池， 并登记各溶液对应的稳固响应信号值， 每个溶液重复测量 3 次，取算数平均值；以 5 个丙酮溶液浓度（ 0.1，0.2%，0.3%，0.4%， 0.5）和对应的响应信号值做标准曲线，在曲线上找出丙酮溶液浓度大于0.5各点的读数，与对应各浓度点的

24、测量值 做比较，量值相差 5时的浓度作为检测上限 CH；按 6.2.2.4中 c）得到的最小检测浓度为第 10 页，共 21 页检测下限 CL 值， CH/CL 比值为线性范畴；6.2.2.5 荧光检测器性能a）波长示值误差和重复性固定波长荧光检测器波长示值误差和重复性的检定，需取出检测器中的滤光片，参照JJG537-2006荧光分光度计 5.3.3 的方法（参与附录B），在经检验合格的紫外 -可见分 |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 光光度计上测出其最大投射比对应的波长， 此波长与滤光片上标记的波长之差， 为波长

25、示值误差；可调波长荧光检测器波长示值误差和重复性的检定， 将检测器与数据处理系统连接好，医用萘在 290nm（激发波长）和 330nm（发射波长）有最大荧光强度的特性，用检测器自身注射器从检测池入口注入1.00 ×10-7g/mL 的萘-甲醇溶液标准物质， 冲洗检测池并将其布满；调激发波长为 290nm，转变发射波长，从 325nm 到 335nm，每（ 510）s 转变1 nm，记录每个波长下的吸取值（吸取值变化的示意图类似图3），曲线最高点对应的波长与参考波长之差， 为发射波长示值误差， 重复测量 3 次，其最大值与最小值之差为波长重复性；然后将发射波长调到测得的曲线最高点对应的

26、波长，转变激发波长 从 285nm 到 295nm，用与前面相同的方法测出激发波长的示值误差和重复性； b基线漂移和基线噪声将仪器各部分连接好， 选用 C18 色谱柱，以 100甲醇为流淌相，流量为 1.0mL/min, 灵敏度选在最灵敏挡， 激发波长设定为 290 nm，发射波长设定为 330 nm，仪器预热稳固， 记录基线 30min,依据检测器的衰减倍数和测得的基线峰 -峰高对应的响应信号值，按公式（7）运算基线噪声，用检测器自身的物理量（ FU）做单位表示；基线漂移用 30min 内基线偏离起始点最大响应信号值（ FU/30min）表示；c最小检测浓度在 6.2.2.5 中 b 的色谱

27、条件下，待基线稳固后由进样系统注入（1020）L 的 1.0078× 10g/mL（或 1× 10g/mL）的萘-甲醇溶液，记录色谱图，按公式（ 8）运算最小检测浓度；d线性范畴555将检测器和数据处理系统连接好， 检测器的激发波长设定为 290nm，发射波长设定为 330nm，仪器稳固后，向检测池中注入100%甲醇，冲洗检测池，至示值稳固后，登记此值；然后按此法依次向池中注入1×10g/mL， 2×10g/mL， 3× 10g/mL，1×第 11 页，共 21 页 555510萘-甲醇溶液，登记每种溶液对应的响应信号值，重复测量3

28、次，取平均值；以 5 个萘-甲醇溶液浓度（ 1×10 5 × 10）g/mL 和对应的响应信号值作标准曲线，在曲线上找出萘-甲醇浓度大于 5×10g/mL 个点读数，与相应各浓度点的测量值做比较，两值相差 5时的萘 -甲醇溶液浓度为检测器上限CH，6.2.2.5中 c）得到的最小检测浓度 CL 为检测下限， CH /CL 比值为线性范畴；5 68注：荧光检测器性能的检定过程中使用的1×10 |精.410g/mL 的萘- 甲醇溶液标准物质稀释而得；g/mL. 1×10g/mL 和 1×10g/mL 的萘-甲醇溶液可用 1.0×

29、|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 6.2.2.6 示差折光率检测器性能a) 基线漂移和基线噪声选用 C18 色谱柱，将仪器各部分连接好，以甲醇为流淌相，流量为1.0 mL/min ，参比池布满流淌相， 灵敏度挑选在最灵敏当， 接通电源，待仪器稳固后记录基线 30 min，依据检测器的衰减倍数和测得的基线峰 -峰高对应的响应信号值， 按公式（7）运算基线噪声， 用检测器自身自身的物理量 （RIU）表示；基线漂移用 30 min 内基线偏离起始点最大响应信号值（ RIU/30 min）表示；（试验室中应特殊留意，室温的波动不

30、要超过2）b）最小检测浓度在 6.2.2.6中 a）的色谱条件下，待基线稳固后由进样系统注入（1020）L 的 5.0 g/ L的甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按公式（8）运算最小检测浓度 CL；b) 线性范畴44 4将检测器与数据处理系统连接好， 用甲醇反复冲洗样品池与参比池， 并布满参比池， 仪器稳固后登记响应信号值；依次向样品池中注入1× 10g/mL，2×10g/mL， 10× 10g/mL 甲醇中胆固醇溶液，登记上述各浓度溶液对应的响应信号值，重复测量3 次， 444取平均值；以 5 个甲醇中胆固醇溶液浓度（ 1×10 5×1

31、0 ）g/mL 和对应的响应信号值作标准曲线， 在曲线上找出甲醇中胆固醇溶液浓度大于 5× 10 g/mL 各点对应的读数， 与相应各浓度点的测量值做比较，两值相差 5%时的甲醇中胆固醇溶液浓度为检测上限 CH， 6.2.2.6中 b）得到最小检测浓度为检测下限 CL ,CH/CL 之比值为线性范畴；6.2.2.7 蒸发光散射检测器性能a）基线漂移和基线噪声选用 C18 色谱柱，将仪器各部分连接好，以甲醇为流淌相，流量为1.0 mL/min ，漂 移管温度70（低温型35），雾化气体流速为（ 2.53.0）L/min或适当的气体压力第 12 页，共 21 页（280350）kPa，灵

32、敏度挑选在适当的档位，接通电源，待仪器稳固后记录基线30min，依据检测器的衰减倍数和测得的基线峰 -峰高对应的响应信号值，按公式（ 7）运算基线噪声，用检测器自身的物理量（ mV ）表示；基线漂移用 30min 内基线偏离起始点最大响应信号值（ mV/30min）表示； |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. b）最小检测浓度在 6.2.2.6中 a）的色谱条件下，待基线稳固后由进样系统注入（1020）L 的 5.0 g/ L6（5.0×10g/mL）的甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按公式（8）运算最

33、小检测 浓 度 CL ；6.2.2.8自动进样器的检定将检测器和数据处理系统连接好， 检测器波长选在 254nm，以 3%丙酮作为样品， 以100%甲醇为流淌相，流速为 1.0ml/min，设定进样量，分别为 5、l10、l20、l30、l40、l50，l每个进样量分别平行测定 5 次，记录每次进样后的峰面积，依据峰面积求算平均值以及 RSD，对进样量及峰面积进行线性回来，得到线性回来方程以及相关系数；假如峰面积的 RSD 及相关系数符合要求，证明该自动进样器的残留以及进样精确度在规定范畴内；RSD1.5%，R0.999；6.2.2.9整机性能（定性，定量重复性）5将仪器各部分连接好， 选用

34、C18 色谱柱，用 100甲醇为流淌相， 流量为 1.0mL/min， 依据仪器配置的检测器，挑选测量参数：紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器波长设 定为 254nm，灵敏度挑选适中，基线稳固后由进样器注入肯定体积的1.0×10-4g/mL 萘-甲醇溶液标准物质；荧光检测器激发波长和发射波长分别设定为 290nm 和 330nm，灵敏度挑选在中间挡，基线稳固后注入肯定体积的1× 10g/mL 萘-甲醇标准溶液；示差折光率检测器和蒸发光散射检测器灵敏度挑选在中间挡，注入肯定体积的200L/mL2.0×10 4g/mL的甲醇中胆固醇溶液标准物质；连续测量6 次，记录

35、色谱峰的保留时间和峰面积， 按式（ 9）运算相对标准偏差 RSD6；1RSD 6 定性（定量）=Xn X i -i =1X 2n -1 ×100 %（ 9）式中：RSD6 定性（定量）定性（定量）测量重复性相对标准偏差；第 13 页，共 21 页X i 第 i 次测得的保留时间或峰面积；X 6 次测量结果的算术平均值；i 测量序号；n测量次数；6.3 检定结果 |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. 6.3.1 按本规程条款检定， 全部检定项目（详见第 4 章）均达到规定技术要求的仪器为合格仪器，发给检定证书；

36、6.3.2 只配一个检测器的仪器，任何一个检定项目不合格， 该仪器为不合格仪器， 发给检定结果通知书，注明不合格项；6.3.3 配一个以上检测器的仪器， 只要其中一个检测器的检定项目和除检测器外其它检定项目合格，可发给配该检测器的仪器检定证书； 同时注明其它不合格的检测器， 限制使用；6.4 检定周期仪器的检定周期 6 个月，更换重要部件或对仪器性能有影响时，应重新检定；附表：高效液相色谱仪检定记录第 14 页，共 21 页高效液相色谱仪检定记录设备型号：设备编号：检定开头日期：检定完成日期：1、通用技术要求确认确认项目确认内容仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的

37、标牌，国 |精.仪器外观仪器电路系统产仪器应有制造计量器具许可证标志；仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清楚；|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载.文件系统有厂家对设备的确认文件、设备的使用记录、日常保护保养记录等相关记录；结论：符合规定不符合规定确认人：复核人：2、紫外-可见光检测器性能检定平均标准样品标准值测量值波长235.0值波长示值误差波长重复性确准紫外波长度标准溶液257.0313.0350.0±2nm2nm测试条件波长:254nm流淌相:100%甲醇流速:1.0

38、ml/min灵敏度：1.00范畴AU/V ：1基线噪声： Nd（mm）5×10-4AU基线漂移 5×10-3 AU/h最小检测浓度测试条件标样: 萘/甲醇 cg/ml1×10-7进样量20V l萘： CL（g/mL）1×10-7g/mL峰高 HAU结论：符合规定不符合规定检定人：复核人：其中：基线噪声 NdKB最小检测浓度（萘）： 基线漂移=AU/h表 MC-009-06-D（1/6）式中： Nd 为检测器基线噪声； K 为衰减倍数；第 15 页，共 21 页B 为测得的基线峰峰高对应的记录仪标度（ AU ）；基线漂移用 1h 内基线偏离原点的值（ AU

39、/h ）表示；cL 为最小检测浓度（ g/mL）； Nd 为基线噪声峰峰高（ mm）； c 为标准溶液浓度（ g/mL）； |精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.|下.|载. H 为标准溶液的色谱峰高（ mm）;V 为进样体积（ L）；注： Nd 和 H 的单位保证一样，式中分母的“ 20”表示标准的进样体积，其单位为微升（ L）3、泵流量设定值误差及流量稳固性误差的检定流淌相名称t（ g/cm3）Fs/（mL/min）Fs1=0.5t1=7Fs2=1.0t2=4Fs3=2.0t3=3测量次数123123123W 1（g） W 2（

40、g）（W2-W1）（g）W2-W1/tFmFmSs SR答应误差SS±5±3±2SR322结论：符合规定不符合规定检定人：复核人：表 MC-009-06-D（2/6）其中：SS=（ Fm -FS）/FS×100%SR=（ Fmax-Fmin）/ Fm ×100Fm=W2-W1/（t*t ）Fm =Fm1+Fm2/2第 16 页，共 21 页式中： Fs/（mL/min）为流量设定值；W2 为容量瓶+流淌相的质量（ g）；W1 为容量瓶的质量（ g）；t 为试验温度下流淌相的密度（ g/cm3）；t 为收集流淌相的时间（ min）；Fm 为同一组

41、测量值的算术平均值（ ml/min）；Fs 为流量设定值， ml/minFmax 为同一组测量中流量最大值（ ml/min）；Fmin 为同一组测量中流量最小值（ ml/min）；4、线性范畴 |精.|品.测试条件丙酮/水；进样量:20l0.1%丙酮的峰高AU最小检测浓度丙酮|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. * | * | * | * | |欢.|迎.浓度0.1%2.0%0.3%0.4%0.5%0.6%0.7%0.8%0.9%1.0%123平均值相关|下.|载. Y=mX+b斜率 m截距 b系数 r理论值（ AU）0.1 1.0该点误差%<5%线性范畴CH 浓CL 浓0.1 0

42、.5CH/CL103度度检定人：复核人：5.柱温箱温度设定值误差及控温稳固性的检定结论：符合规定不符合规定温度设定值3540测量值平均1234567值设定值误差±2控温稳固性1.0结论：符合规定不符合规定检定人：复核人：表 MC-009-06-D（3/6）6.梯度误差梯度精确度 AB 泵B 溶液变化范畴1读数0%20%40%60%80%100%时间表流速1.0ml/min时间B%0.0105.0105.022010.02202第 17 页，共 21 页15.034015.046020.046020.058025.058025.0610030.0610030.07030.08Stop平均 Li10.0340Lmi=Li-L （i-1） 平均 LmGi%=Lmi-Lm/LmGimax %±3.0%测试条件A