免疫层析法检测原理分类介绍

1、免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名    文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司    点击数： 88    更新时间：2005-10-16双抗体夹心 ·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的链和一条高度特异的链。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到

2、达金标位置hCG的链和单抗-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的链和多抗-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。  该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。 竞争反应原理  

3、3;以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。C 线包被羊抗鼠抗体。  当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应

4、，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。当无C、T线时，表示试剂盒失效。其它产品如 DPC、DTH、DME、DAM、DCO等依次类推。  应用proteinA金标的试剂盒检测原理 蛋白 A是金黄色葡萄球菌的一种胞壁蛋白，有与哺乳动物的lgG结合的特性，亲和力根据物种的差异而有区别。而人体中所有的抗体均是lgG因此能用来检测人体血液中的抗体用已知抗原测未知抗体。  ·以IHI为例说明HIV试剂盒金标为protein A-金标复合物,T

5、线包被HIV抗原。C线包被鸡抗protein A多克隆抗体。当待测血清中含有HIV抗体时，该抗体先和protein A胶体金复合物免疫结合，到T线位置时，该抗体又和固定在NC膜上的HIV抗原免疫结合，从而桥连protein A胶体金，T线显色。到达C线位置时，固定在NC膜上的鸡抗protein A 多抗桥连protein A多抗桥连protein A胶体金，C线显色，得到阳性结果。若待测血清中不含HIV抗体，则T线上的HIV抗原和protein A不发生免疫结合，T线不显色，C线显色，得到阴性结果。若无C、T线，说明试剂盒已失效。应用此原理的产品还有IHC及测HbsAb的等产品。艾康HIV1/

6、2型抗体诊断试剂说明书作者：佚名    文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司    点击数： 85    更新时间：2005-10-16HIV艾滋病毒1/2 型抗体乳胶层析法全血/血清/血浆快速检测试剂盒使用说明书（产品编号： IHI-402）本品是一种不需要任何仪器设备的全血检测法，是利用免疫层析分析原理、双抗原夹心法快速检测血液中是否含有HIV1/2 抗体，从而用于临床判断人体是否受到HIV1/2 型病毒的感染。【测定原理】ACON HIV1/2 试剂盒采用高度特异性的

7、抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血液中是否含有HIV1/2抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试区(T)的重组HIV 抗原和质控区(C)的相应抗体。测试时，血标本滴入试剂盒加样孔（S）内，血标本中的HIV1/2抗体与预包被在膜上的重组抗原-乳胶结合物反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区（T）与固定在膜上的重组HIV抗原反应。如果血液中含有抗HIV-1或HIV-2抗体，在测试区内（T）会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内（T）没有出现红色条带，则血液中不含有抗HIV1/2 抗体，表明是阴性结果。无论抗-HIV1/2抗体是否存在于血液中，混合物都会继续向上层析

8、至质控区（C），质控区的相应抗体与乳胶结合物反应出现一条红色条带。质控区内（C）所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。【包装组成】l  ACON HIV1/2 乳胶层析法全血/血清/血浆/检测试剂盒(40人份)l  反应缓冲液（5ml）l  使用说明书一份l  一次性使用吸管(40支)【检测所需设备】l  采血针l  秒表l  止血棉球【标本收集】血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免融血。血清/血浆标本的收集：血清/血浆标本由静脉采血后

9、离心获得，标本在2-8°C可保存一周。如长期保存需冷冻。避免反复冻融【操作步骤】在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明，使用前将检测试剂盒和全血/血清/血浆标本恢复至室温（20-30oC），取出反应缓冲液并放置20分钟使其恢复至室温。1 从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在打开铝箔袋前应先恢复至室温）。在1小时内应尽快地使用，特别是在室温高于30°C或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。在一小时内测试将会得到最佳效果。2 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取指尖血或静脉血后滴入1滴全血/血清/血浆（约25ml）于加样孔S中，随后加入1 滴缓冲液于加样孔S 中。切勿将指尖血

10、直接滴入加样孔内。3 等待红色条带的出现，在15分钟左右读取测试结果。关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在20分钟后读取的结果无效。【结果判定】阳性（+）：两条红色条带出现。一条位于测试区内（T），另一条位于质控区内（C）。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）无红色条带出现。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：由于样本中抗-HIV 抗

11、体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。【灵敏度】ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒在临床标本中用HIV 的EIA 的检测试剂盒进行比较，结果表明ACON HIV 乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒对HIV-1和HIV-2抗体具有很高的灵敏度，其相对灵敏度达100%。【特异性】运用在ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒中的重组HIV抗原为病毒包膜上的糖蛋白。同EIA检测试剂盒相比，ACON HIV 乳胶层析法检测试剂盒对HIV-1 和HIV-2抗体具有很高的特异性，其相对特异

12、性达99.6%。【使用限制】l  ACON HIV1/2乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血/血清/血浆样本中的抗-HIV1/2抗体。l  这项测试仅表示样本中抗-HIV1/2 抗体的存在，而不能作为机体感染HIV-1或HIV-2的标准。l  为了确保结果的准确性，可对样本用ELISA 或Western Blot 作进一步的分析。l  同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。l  如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。阴性结果并不能排除感染HIV-1或HIV-2的可

13、能性。【存储和稳定性】原包装储存于2-30°C，并装在密封的袋中。反应缓冲液保存于2-30°C。试剂盒在有效期内是稳定的，切忌冷冻或超过有效期后使用。（有效期见包装袋）Experience Simple Testing艾康生物技术（杭州）有限公司制造地址：中国杭州市古荡工业园区（天目山路398号）邮编：310023电话：(0571)87960387(总机转)传真：(0571)87963009网址：编号:R015310-03 免疫层析类产品特殊情况及处理原则作者：佚名    文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司  

14、  点击数： 49    更新时间：2005-10-16·Q:1.跑板异乎寻常的慢或无样本跑动现象（在反应窗内不见有液体在膜上流动） 可能的原因:建议:1.加入的标本量或全血加缓冲液的量不够。（乙肝全血产品加样时滴加一滴指尖血是不够的，两滴才能保证50l的加样量） 用新产品重新检测，加入正确的样本或缓冲液的量，避免气泡产生。（如果儿童的指尖血连续挤两滴比较困难，可以从掌向指方向挤压过去，血量可以明显增加）。 2.包装袋破损或筒装试纸条长时间放在冰箱中保存（快诊试剂对环境的相对湿度敏感，一般常温保存，避免受潮）。 用包装完整的

15、诊断试剂重新测试/一般室温保存即可，太热或太冷需要保证适宜的温度除外。 3.从冷环境取出后没复温。从冷环境中取出复温2030分钟。4.样本不适合于检测（如样本中有小血块）。 血清/血浆重新离心后使用，全血需重新取样。 5.诊断试剂装配不当。与供货商联系。 6.全血产品加全血标本以后几分钟再加缓冲液（血液比较粘稠，在几分钟时间内已经接近凝固，再加缓冲液，不能帮助血液层析） 加血后立即加缓冲液 7.误操作，特别是针对个人消费者（将样本如尿液加到测试窗口或者有尿液溅到测试窗口） 改正操作，注意正确的操作方法，把尿液加到加样区。 8.试剂条的玻纤（海绵状）翘起换用新的试剂检测。·Q:2.层析

16、时没有红色背景可能的原因:建议:1.产品有问题。 用新的产品重新进行检测并与供货商联系。  ·Q:3.在反应窗内见到红色竖线 可能的原因:建议:1.当样本在膜上流动时可能发生。该情况不会影响检测结果，但保证背景清晰的情况下在规定时间内读取结果。2.可能使用了已溶血样本。用新鲜标本重新测试。  ·Q:4.规定的结果读取时间时未见C线 可能的原因:建议:1.加入的样本量不够。重新测试，按说明书要求加入足够的样本量。 2.加入的样本量太多，导致产品流动不正常。严格按照说明书要求滴加样本量。3.样本不流动。血清/血浆重新离心后使用，全血需重新取样。 4.试剂未复

17、温就进行检测。冷藏的试剂检测前应复温。5.试剂有问题。与供货商联系。6.用血清血浆试剂检测全血。用对应的标本检测 。 ·Q:5.C线不完整，出现颜色不均一或者线条中部短开的现象可能的原因:建议:1.标本在试纸条上层析不均匀。出现这样的情况并不影响判断结果，仍然可以按一般的C线判断，请将该产品的批号告知供应商。·Q:6.T线处出现比正常状况下的T/C线要窄得多的一根或两根线条可能的原因:建议:1.标本在试纸条上层析不均匀。这样的情况应该判没有T线·Q:7.在规定的读数时间后出现了T线 可能的原因:建议:1.金标或乳胶（有色标记物）持续释放。1.这个结果是无

18、效的。注意请在规定的时间读取结果。·Q:8.检测后出现假阴性结果 可能的原因:建议:1.样本中被检样本浓度低于检测阈值或者快诊试剂检测与复核实验检测的不是同一标记物 （例如丙肝抗体检测和 HCV RNA 检测） 用其它检测方法确认该患者的实际含量。  2.该样本含有的亚型较为特殊或者病毒变异能力强。 用其它检测方法确认该患者是否为阳性。 3.测试者的样本被稀释。 样本应不加稀释。 4.针对乙肝两对半检测板第四、五项的原理为竞争法，T线处没有线条判为阳性。 按照说明书判断结果 5.沙眼衣原体产品取样失误或使用的不是配套提供的涤纶棉签。参阅说明书正确取样，使用配套的涤纶棉签。

19、6.很淡的线条客户判为阴性。（一般背景干净的情况下，T线处有正常宽度的线条即判阳性，特殊判断方法的除外） 仔细阅读说明书，按照指定的判读方法判断。 7.乙肝表面抗体全血检测试剂每一条都加缓冲液或者缓冲液加入的量超过说明书的规定。 根据全血试纸条的层析状况决定是否滴加缓冲液。8.试剂受潮 换用新的试剂检测 。 9.如果使用排卵试剂连续几个月检测不出阳性结果，可能的原因有：隔天检测错过了排卵期；连续检测的时间太短，还没到排卵期就停止检测；激素分泌不正常。 连续检测 / 建议您去医院向专业医生咨询。  ·Q:9.检测后出现假阳性结果 可能的原因:建议:1.血清/血浆样本中含有特殊

20、干扰物质。用另外的方法确诊检测结果。2.在超过规定时间后读取结果。 不要在说明书规定读数时间后读取检测结果。 3.该加缓冲液的没有加或者加入检测样本后几分钟才加入缓冲液，导致非特异性结合没有被屏蔽 按照说明书加入缓冲液 4.不使用与产品配套提供的吸管，加样量严重超过说明书规定的样本体积（例如艾滋全血产品） 尽量使用与产品配套的吸管。 5.针对排卵检测试剂，使用了早上第一次的尿液或几个小时睡眠后的尿液检测。 使用一天中其他时间的尿液。  ·Q:10.用阴性标本检测时测试区出现两条线 可能的原因:建议:1.产品质量问题用新的产品重新检测该血液样本，并将该事件通报公司。 

21、0;·Q:11.用水检测后测试区出现线条 可能的原因:建议:1.在金标记物上行过程中，未反应的金颗粒滞留在测试区显现线条。 ACON 的产品设计为使用全血 / 血清 / 血浆 / 大便 / 宫颈感染细胞等样本进行检测，请勿用水作为阴性对照品进行实验。建议您使用阴性标本作为对照。因为阴性标本的内环境与水存在较大差异，如 PH ，蛋白浓度，电解质浓度。 ACON 部分产品配套提供缓冲液或裂解液，保证稳定的反应环境。 艾康产品常见问题解答测试标本作者：佚名    文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司    点

22、击数： 75    更新时间：2005-10-16Q:1.艾康的产品一般用什么标本检测？      A:根据艾康检测产品与要求的不同，使用较多的检测标本有尿液，指尖、耳垂末梢血，静脉血，血清，血浆，阴道分泌物，尿道分泌物，大便。  Q:2.艾康的产品对标本的采集、保存有什么要求？      A: 指尖，耳垂末梢血采集后应该尽快使用，防止凝血；静脉采血过程尽量避免溶血；抗凝血在 24小时内使用，避免溶血；血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8可保存一周；如长期保存需冷冻至-20

23、，避免反复冻融；尿液标本必须采集新鲜尿液，若尿样呈可见的浑浊状，需要先离心、过滤或待其沉淀后去上清检测；宫颈取样时棉签事前不要用生理盐水浸润，这样会减少标本获得量，标本收集前应将阴道内粘性物质去除；取粪便标本时，在新鲜粪便的不同部位取样三次，保证取样具有代表性。  Q:3.全血/血清/血浆试剂使用指尖、耳垂末梢血和使用静脉血是否相同？     A:通常情况下，各种标本检测效果是相同的。指尖、耳垂末梢血量较少，检测时需加缓冲液，而且末梢血中含有一些组织液的成分，血液浓度较静脉血低。   Q:4.全血标本里加入抗凝剂时是否对检测结果有影响？

24、0;     A: 加入各种抗凝剂不会影响试剂的正常使用。 Q:5.当全血产生融血现象后是否可以继续检测？     A: 不可以。应避免使用融血标本的检测，会导致背景变深，从而影响判读结果。  Q:6.血清 /血浆产品可以检测全血吗？全血产品可以检测血清/血浆吗？      A: 所有艾康全血产品除 Malaria检测试剂外均可使用血清/血浆标本进行检测；全血产品不适合用血清/血浆标本进行检测艾康产品常见问题解答 结果判定作者：佚名    文章来源：艾康生物技术（杭

25、州）有限公司    点击数： 67    更新时间：2005-10-16Q:1.测试时，若未到判读时间出现的阴性结果，可否判为阴性？      A: 不可以。测试结果应按照说明书规定的时间判读，以防止漏检！例如用乙肝表面抗原血清 /血浆测试条检测时，强阳性结果会在15分钟内出现，弱阳性结果可能在15分钟以后出现，所以在说明书规定的判读时间内结果都是有效的。   Q:2.超过了判读时间结果还准确吗？     A:结果不准确，应按照说明书规定的时间判读。如果到判读时间为止，结果为阴性，判读时间以后，出现淡淡的线条，可能是有色标记物持续释放造成的，但是这种结果是无效的。   Q:3.当试剂进行检测时，可见红色的液体在膜上移动，这种情况正常吗？     A:这是标本在试剂上层析的正常现象，只要判读结果时，背景清晰就可以了。