病毒性疾病标本采集要求

1、病毒性疾病临床标本病毒性疾病临床标本采集要求采集要求2015.062015.06济南济南主要内容主要内容n采集临床标本对于实验室检测的意义n临床标本的采集及种类n采集技术要求n标本采集情况及存在的问题n建议、要求一、一、临床标本对临床标本对实验室监测实验室监测的的作用和作用和意义意义n血清学监测：血清学监测：（IgM/ IgG IgM/ IgG ）n早期诊断早期诊断 ( (发热出疹症候群发热出疹症候群、脑膜脑炎症候群等、脑膜脑炎症候群等) )n人群免疫状况评价、疫苗效果评价人群免疫状况评价、疫苗效果评价n病毒学监测：病毒学监测： 病毒学监测与流行病调查资料结合在一起，可以病毒学监测与流行病调查

2、资料结合在一起，可以: :n追溯病毒传播途径追溯病毒传播途径n鉴定病毒来源，确定本土还是输入鉴定病毒来源，确定本土还是输入n区分疫苗、野毒引起的疑似病例区分疫苗、野毒引起的疑似病例（麻疹；（麻疹；VDPVVDPV等）等）n监测病毒的变异，开发新疫苗监测病毒的变异，开发新疫苗二、临床标本采集的基本要求n标本是进行一起实验室检测的基础标本是进行一起实验室检测的基础n标本采集质量（采集时间、部位）影响实验室检测的结果标本采集质量（采集时间、部位）影响实验室检测的结果n标本采集应根据不同症候群采集不同种类的标本标本采集应根据不同症候群采集不同种类的标本n标本具有不再获得性，采集的量应充分满足检测工作需

3、要标本具有不再获得性，采集的量应充分满足检测工作需要n采集的标本应有明确标示，并包含疾病所有的基本信息采集的标本应有明确标示，并包含疾病所有的基本信息n标本的采集、运送、保存都应符合生物安全要求标本的采集、运送、保存都应符合生物安全要求临床诊断临床诊断标本种类标本种类血液血液鼻鼻/ /咽咽拭子拭子粪便粪便尿液尿液疱疹疱疹液液含漱含漱液液脑脊脑脊液液疑似麻疹疑似麻疹疑似风疹疑似风疹（CRSCRS）疑似腮腺炎疑似腮腺炎疑似水痘疑似水痘肠道病毒（疑肠道病毒（疑似脊灰）似脊灰）疑似肝炎疑似肝炎疑似乙脑疑似乙脑用于病毒学检测疑似病例标本采集种类用于病毒学检测疑似病例标本采集种类（一）、麻疹、风疹、腮腺炎

4、标本（一）、麻疹、风疹、腮腺炎标本的采集要求的采集要求三、标本的采集要求三、标本的采集要求071421283542-7-14-210246810RashOnse出疹出疹tDays after rash onset 出疹天数出疹天数IgGIgMInfection感染感染Relative levels of antibody 相对抗体水平必要日期必要日期:最后接种日期最后接种日期出疹日期出疹日期出生日期出生日期IgM sensitivity 70% IgM敏感性敏感性70%virus excretion排泄病毒排泄病毒用于用于IgM检测的检测的血清血清标本要在初次接触病人时马上采集。标本要在初次接

5、触病人时马上采集。用于病毒分离及核酸检测检测的标本需在岀疹后用于病毒分离及核酸检测检测的标本需在岀疹后5天内采集。天内采集。对于岀疹对于岀疹3天内的血清标本：大约天内的血清标本：大约30%的病例因未产生的病例因未产生IgM抗体抗体不能检测到，需要不能检测到，需要 采集第二份血标本或采用荧光定量采集第二份血标本或采用荧光定量PCR检测病检测病毒核酸。毒核酸。麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄 1、合格血标本的基本要求是：出疹后28日内采集，血清量不少于0.5ml，无溶血，无污染；28条件下保存、运送。 2、监测病例血标本采集率达到80%以上；出疹后3日内

6、血标本麻疹、风疹IgM阴性者，应在出疹后4-28天内采集第二份血，与第一份血采集时间相隔10-20天。第2份血标本的比例达到80%以上。 3、麻疹、风疹暴发疫情实验室确诊率达到90%上。 4、技术要求：采集病例出疹后28日内静脉血23ml，加入到无菌试管中，标明采集日期和病例姓名、编号。1 1、血标本的采集、运送、保存要求、血标本的采集、运送、保存要求（20142014版麻疹监测方案）版麻疹监测方案）5、 1500rpm/20分钟离心机分离血清。如果没有离心机，在室温下凝固分离血清，或2-8C过夜直到血清完全析出。 6、血清标本运送前应可在28保存，如果7日内不能运送的，应置-20以下保存，避

7、免反复冻融（会对IgM抗体的稳定性产生不利影响）。7、全血标本不能冻结。8、标本送检要符合生物安全条件要求。1 1、血标本的采集、运送、保存要求、血标本的采集、运送、保存要求（20142014版麻疹监测方案）版麻疹监测方案）2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）1、采集出疹后5天内病例咽拭子或尿液标本，用于病毒分离或病毒核酸检测。2、努力采集每例散发监测病例病原学标本。当确认为麻疹或风疹暴发疫情时，应至少采集疫情早期5例病例的病原学标本，病例数小于5例者应全部采集。3、麻疹、风疹暴发疫情实验室确诊率达到90%以上；麻疹、风疹暴发疫情采集病原学起数占暴发疫情总起数的

8、比例达到80%以上。2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）4 4、技术要点：、技术要点： （1）出疹当日至出疹后5日采集。（2）用无菌棉拭子适度用力在咽后部及两侧，反复擦拭，获得上皮细胞。（3）把拭子放入有外螺旋盖并装有2ml病毒运输液的冻存管中。（4）常用的病毒运输液（商用）：pH 7.47.6的Hanks液：在90ml蒸馏水中加入10mlHanks，然后加入10ml牛血清和0.2ml 0.4酚红溶液，过滤消毒。加1ml青/链霉素溶液。分装到无菌管中，于4储存备用。细胞培养液：含2-5%胎牛血清DMEM2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监

9、测方案）5、咽拭子等标本采集后48小时内能送达市级实验室者，可在28保存，否则-70保存。无-70保存条件者，可在-20保存并在1周内送达。6、尿液标本采集：出疹后5天内，最好采集晨尿（其他时段也可），用50ml无菌离心管采集3050ml尿液。采集后的标本在2-4C保存，必需在24h内离心处理（1500rpm/20min）,用35ml病毒保存液悬浮沉渣，转移到咽拭子保存管， -70保存。未经离心处理不得直接冻存。3、腮腺炎疑似病例标本采集1、血清标本采集同上。2、采集时间：发病5天内采集咽拭子、腺管分泌液。3、方法：咽拭子采集同麻疹。 腺管分泌液采集：用无菌棉拭子，放患者口腔两边腮腺管开口处，

10、放置10min后，取出放装有病毒保存管中。4、标本保存、运送要求同麻疹。采集后尽快送省级实验室进行病毒分离。1、血清标本：散发病例，每年以市为单位血清标本合格采集数不少于100份、水疱液标本采集数不少于10份；若散发病例少于100例，血清标本合格采集率应达病例总数的80%以上。2、暴发病例，采集暴发早期510例病例血清标本进行确诊，同时还要采集35例病例水疱液标本，进行病毒分离。3、水泡液采集（用于病毒分离及核酸检测）：选择患者5 10个充盈度较好的水疱，在无菌条件下用注射器抽取疱液，保存于装有2-3mL标本保存液标本管中(同麻疹)。4、疱疹液采集后应在4条件下24小时内运送至省级实验室，未能

11、24小时内送达的，应置-70或以下保存，并于标本采集后7天内送达省级实验室。（二）、水痘（二）、水痘- -带状疱疹标本带状疱疹标本的采集、运送、保存要求的采集、运送、保存要求一、一、AFPAFP病例标本的采集病例标本的采集 1. 麻痹出现后14天内采集 ；双份大便 ；采集时间至少间隔24小时 。2.每份标本重量5克（约为成人的大拇指末节大小）。3.麻痹时间超过3个月，可不采集大便标本 。4. -20冰箱储存，冷藏运送至实验室 。（三）、脊髓灰质炎标本采集、（三）、脊髓灰质炎标本采集、运输要求运输要求标本的采集-2二、二、AFPAFP病例接触者标本的采集病例接触者标本的采集 以下情况应采集AFP

12、病例的5名接触者（原则上5岁以下）大便标本1.每年AFP病例大便标本数少于150份的省。2.未采集到合格大便标本的AFP病例。3.根据临床或流行病学资料高度怀疑为脊灰的AFP病例。4.死亡的AFP病例。 标本的采集-3三、高变异株三、高变异株AFPAFP病例、病例、VDPVVDPV病例、输入性病例、输入性脊灰野病毒病例接触者：脊灰野病毒病例接触者： 标本采集要求见输入性脊灰野病毒病例和脊灰疫苗衍生病毒循环病例应急处理预案脊灰标本的运送脊灰标本的运送 1.采集后7天内送达省级脊灰实验室 。2.冷藏运送，运送时冰袋不少于4个，在送达省脊灰实验室时应带冰且包装完整。3.标本的运送同时要符合实验室生物

13、安全有关要求。4.采集的标本应有完整的登记资料（采样单），一并送达省脊灰实验室。 运输器材运输器材 1.单个病例的标本容器应单放在盒或塑料袋内，并做有效的封闭。 2.用于运输标本的器材每次用过后毁掉或者消毒后再用。 3. Polio标本不能和疫苗同放在一个冷藏器中。4.用于计免中携带疫苗的冷藏箱可用于标本运输，但不可再用于装运疫苗。 1.1.血清标本采集：血清标本采集：发病7天内采集，血液标本量应3ml。如第一份血液标本在发病7天内采集，且乙脑IgM抗体检测阴性，应于7天后采集第二份血液标本。 血清装于带螺旋盖的血清管中保存和送检，血清管上贴好写有患者个人资料的标签 。血清应低温（-80）保存

14、，避免反复冻融；标本要冷藏运送（最好用干冰或液氮），同时要符合实验室生物安全和相关运输管理要求。（四）、流行性乙型脑炎检测标本的（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输采集、保存与运输2 2、脑脊液标本采集：、脑脊液标本采集： 需要专业的临床医生来完成。 发病1周内采集，每份1 2ml 。 低温（-80）保存，避免反复冻融；标本要冷藏运送（最好用干冰或液氮），同时要符合实验室生物安全和相关运输管理要3 3、蚊虫样本采集：、蚊虫样本采集： 地点：人房、猪圈、稻田；时间：早晨5点之前和傍晚7 点之后。 鉴定分类：将蚊虫于-20冰箱中冷冻半个小时左右，将蚊虫冻晕，以便分拣；对蚊虫分类时，要在

15、冰排上进行；分类完毕，50只为一批，迅速装入冻存管，并立即放入液氮中保存。 用液氮进行运输。在蚊虫标本采集的整个过程中都要保持冷链，注意补充液氮。 （四）、流行性乙型脑炎检测标本的（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输采集、保存与运输（四）、流行性乙型脑炎检测标本的（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输采集、保存与运输4 4、猪血样本采集：、猪血样本采集：选择上年11月份以后出生、尚未经历乙脑流行期的仔猪30头作为观察对象。每头猪从流行季节前的3月份开始，连续每旬采耳静脉血一次，直到10月下旬。 也可采集屠宰场所宰杀的未经过上一次乙脑流行季节的猪血清，每次不少于30份，从每

16、年的3月份开始采集直到流行季节结束。 低温（-20）保存，冷藏运送。 四、标本采集情况、存在的问题四、标本采集情况、存在的问题市市监测病监测病例数例数年化排除病年化排除病例报告发病例报告发病率率(/10(/10万万) )及时性指标及时性指标特异性指标特异性指标麻疹病毒分离及核酸检麻疹病毒分离及核酸检测测4848小时完整调查小时完整调查血清标本血清标本散发病例血标本散发病例血标本采集采集咽拭子咽拭子标本数标本数病毒分病毒分离离 阳性数阳性数核酸核酸检测检测阳性阳性数数病例数病例数调查率调查率3 3日内送达日内送达率率结果结果4 4日内日内报告率报告率病例数病例数 采集率采集率济南济南152152

17、1.11 1.11 13913991.4591.4510010098.5798.5713113190.9790.97青岛青岛8408407.77 7.77 83483499.2999.2995.195.195.1595.1582082099.6499.641351354747111111淄博淄博28280.46 0.46 272796.4396.4396.8896.8896.7796.77242410010013135 51111枣庄枣庄2142145.23 5.23 21121198.698.691.0491.0481.2881.2820020099.599.548489 92222东营东营

18、27271.44 1.44 242488.8988.8996969696242488.8988.898 82 28 8烟台烟台94941.54 1.54 919196.8196.8196.7796.7797.7897.78777796.2596.2540409 93737潍坊潍坊2422422.01 2.01 23423496.6996.6994.0794.0798.6798.6722722796.1996.1970703 33535济宁济宁1491491.72 1.72 13113187.9287.9287.0287.0295.8395.8312612687.587.546464 43232

19、泰安泰安1501503.18 3.18 13913992.6792.6792.1492.1490.390.3999990.8390.8318184 45 5威海威海1101103.75 3.75 10910999.0999.0998.9598.9596.8196.81797984.9584.95717127275656日照日照1491492.00 2.00 14214295.395.392.6892.6877.9777.97929277.9777.97848433334949莱芜莱芜13130.68 0.68 121292.3192.311001001001007 787.587.52 2临沂

20、临沂31310.44 0.44 282890.3290.3285.7185.718080252589.2989.292 2德州德州2242244.98 4.98 21121194.294.299.5399.5310010019219295.5295.5228283 32121聊城聊城38380.35 0.35 333386.8486.84100100100100282884.8584.857 71 17 7滨州滨州37370.71 0.71 303081.0881.0890.9190.9183.3383.33242482.7682.762 21 11 1菏泽菏泽41410.22 0.22 27

21、2765.8565.8555.1755.1752.9452.94252583.3383.33合计合计253925392.262.262422242295.3995.3994.2894.2893.593.52200220094.594.55735731481483953952015.1-5麻疹检测指标完成情况麻疹检测指标完成情况四、标本采集情况、存在的问题四、标本采集情况、存在的问题四、标本采集情况、存在的问题四、标本采集情况、存在的问题年份年份病病例例数数血标本血标本采集数采集数采集率采集率（% %）不同时间采集数不同时间采集数3 3天内天内4-284-28天天2828天天2014201454

22、8654865356535697.6397.6364264211.99%11.99%4670467087.19%87.19%12120.20%0.20%2015.1-2015.1-5 5323932393060306094.4794.4758858819.22%19.22%2462246280.46%80.46%8 80.26%0.26%2014-2015.52014-2015.5麻疹血清标本采集情况麻疹血清标本采集情况年份年份病例病例数数咽拭子咽拭子时间分布时间分布采集数采集数采集率采集率（% %）岀疹岀疹555天天20142014548654861835183533.45 33.45 13

23、14131471.60%71.60%43743729.23%29.23%2015.1-52015.1-5323932391283128339.6139.611067106783.16%83.16%21021016.84%16.84%2014-2015.52014-2015.5全省麻疹疑似病例全省麻疹疑似病例咽拭子标本采集情况咽拭子标本采集情况存在问题存在问题1 1、麻疹、麻疹标本的采集情况：标本的采集情况：近年来麻疹疑似病例标本采集率、合格标本采集率以及采集质近年来麻疹疑似病例标本采集率、合格标本采集率以及采集质量有很大改善，但咽拭子病原学标本整体采集率仍较低，量有很大改善，但咽拭子病原学标本

24、整体采集率仍较低，岀岀疹疹5 5天后采集的咽拭子仍占较高的比例，采集合格咽拭子标本工作天后采集的咽拭子仍占较高的比例，采集合格咽拭子标本工作需要进一步加强。需要进一步加强。麻疹血清标本、咽拭子标本同时采集的问题。麻疹血清标本、咽拭子标本同时采集的问题。麻疹首发病例病原学标本跟踪采样不够、信息不全，难以寻找麻疹首发病例病原学标本跟踪采样不够、信息不全，难以寻找可能的传播链。可能的传播链。标本及时送检、保存问题。标本及时送检、保存问题。 目标：无本土麻疹野毒株传播，至少维持目标：无本土麻疹野毒株传播，至少维持1212个月以上。个月以上。u 麻疹病毒本土基因型麻疹病毒本土基因型H1aH1a仍持续流行。仍持续流行。20142014年（年（3030个省）、个省）、20152015年年1-31-3月月（1515个省）。个省）。u 输入病毒引起流行的潜在危险。输